$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
يعد التحديد الصحيح لحيوانات المختبر مطلبا أساسيا للبحوث الطبية الحيوية. من الضروري أن يكون الباحثون قادرين على التمييز بين الفردية بحيث يتم استخدام الصحيح للإجراءات التجريبية وجمع البيانات. طور العلماء العديد من الطرق الدائمة والمؤقتة لتحديد المختبر الفردية. هنا ، سنناقش الطريقتين الأكثر استخداما: وضع علامات على الأذن وتثقيب الأذن.
قبل الخوض في إجراء تثقيب الأذن ، دعنا نقدم رمز لكمة الأذن ، وأنواع اللكمات المتاحة ، ونناقش فوائد وعيوب هذه الطريقة. كما قد تكون خمنت ، فإن تثقيب الأذن ينطوي على إحداث ثقب أو شق في الأذن الخارجية للحيوان أو الصيوان. من أجل توحيد هذه الطريقة ، تم تطوير رموز لكمة الأذن العالمية.
اعتمادا على الموضع ، تمثل الشقوق الموجودة على الأذن اليمنى رقما مفردة ، مثل 1 و 3 و 5 ، وتمثل الشق المزدوج 2. باستخدام مجموعات مختلفة من هذه الشقوق ، وتلخيص قيمة كل شق ، يمكنك تسمية من 1 إلى 9. وبالمثل ، على الأذن اليسرى ، تمثل نفس الشقوق العشرات. ومرة أخرى ، ستغطي المجموعات المختلفة النطاق من 10 إلى 90. تمثل الثقوب الموجودة في وسط الصيوان الأيمن والأيسر 100 و 200 على التوالي. والثقوب في كلاهما تشير إلى 300. لذلك ، على سبيل المثال ، إذا كنت ترغب في تسمية 173 ، فيجب عليك عمل ثقب في وسط الأذن اليمنى لمدة 100 ، وثلاث شقوق في السنة اليسرى تلخص المجموع إلى 70 ، وشق واحد في الأذن اليمنى العلوية يمثل مكان الوحدة "ثلاثة".
الآن ، دعنا نناقش الأنماط الثلاثة لكمات الأذن المتوفرة تجاريا: لكمة المقص ، لكمة الإبهام ، ولكمة الرافعة. كل من هذه لها مزاياها وعيوبها.
تتطلب لكمة الإبهام حركة قرص، ولكنها صغيرة بما يكفي لتناسب أنبوب إيبندورف بحيث يمكن جمع أنسجة الأذن بسهولة أكبر. من الناحية الهندسية ، فإن ثقب الرافعة أسهل في الاستخدام من لكمة الإبهام ، خاصة بالنسبة للآذان السميكة للفئران الأكبر سنا. لا تتطلب لكمة المقص حركة معسر ، وبالتالي تجنب إجهاد النفق الرسغي والإصابة.
على الرغم من كونها طريقة سريعة وبسيطة لتحديد الهوية ، إلا أن تثقيب الأذن له بعض القيود. أولا ، يحتوي رمز لكمة الأذن الذي تمت مناقشته أعلاه على حد أعلى يبلغ 399 ، مما قد يحد من استخدام هذه الطريقة في بعض الدراسات واسعة النطاق. قيد آخر هو أنه يجب الإمساك بمعظم عند القفص من أجل قراءة الكود ، وبالتالي زيادة أوقات التعامل معها. مع تقدم الفئران في العمر ، يزداد سمك جلد آذانهم ويصعب إجراء لكمة الأذن دون التسبب في ضائقة كبيرة للحيوان. لذلك ، من الأفضل إجراء لكمات الأذن على الفئران الصغيرة أثناء فطامها. بالنسبة للفئران البالغة التي تتطلب تحديد الهوية ، يجب مراعاة استخدام التخدير المستنشق عند إجراء لكمات الأذن.
الآن بعد أن أصبح لديك بعض المعلومات الأساسية حول رمز ثقب الأذن وأنواع الأدوات المتاحة ، دعنا نتعلم كيفية تنفيذ هذه التقنية في الفئران.
قبل البدء في الإجراء ، يوصى بتنظيف أدوات التثقيب بمحلول مطهر ، وشطفها بالكحول ، وتجفيفها جيدا. تجنب تعقيم لكمات الأذن ، لأنها ستؤدي في النهاية إلى إضعافها.
للبدء ، حدد الكود التجريبي للحيوان واللكمة التي سيتم استخدامها. دعنا نستخدم الكود 173 ولكمة المقص كأمثلة هنا. ينطبق نفس الإجراء على أي رمز أو لكمة أخرى. عندما تكون جاهزا ، قم بتقييد عن طريق الإمساك به في القفص بحيث يمكن الوصول إلى الأذنين بسهولة. ابدأ بالثقب لمدة 100. ضع الأذن اليمنى في الثقب بحيث يتم وضع ثقب الثقب بعيدا عن هامش الصيوان. بعد ذلك ، اضغط لإغلاق المقص بسرعة وثبات لقطع الجلد. ثم حرر الثقب وقم بإزالته من الأذن. تجنب سحب الثقب أو لفه لمنع تمزق الأذن. لعمل شق ، ضع الثقب على حافة الصيوان في الأذن في المكان الصحيح ، في هذه الحالة في الجزء العلوي من الأذن اليمنى ل "الثلاثة" في مكان وحدة الكود ، وافعل الشيء نفسه - اضغط سريعا وثابتا ثم افتح المقص لإزالته. كرر نفس الإجراء على الأذن الأخرى لكمة ثلاث شقوق - اثنتان ل "20" بالقرب من الزاوية الخارجية وواحدة ل "50" بالقرب من الزاوية الداخلية ، مع إجمالي الرمز إلى "70".
تأكد من أن الرمز الصحيح قد تم ثقبه قبل إضافة مرة أخرى إلى القفص. مرة أخرى ، قم بتنظيف الثقب بمطهر ، واشطفه بالكحول وجففه جيدا لمنع الصدأ.
الآن ، دعنا ننتقل إلى وضع علامات على الأذن ، وهي طريقة أخرى غير مكلفة وسهلة الأداء لتحديد الفئران والجرذان الفردية. هناك مجموعة متنوعة من علامات الأذن المتوفرة تجاريا. وتشمل هذه: العلامات المعدنية التي تحتوي على سلسلة من الأرقام و / أو الحروف المحفورة عليها ، والعلامات البلاستيكية مع الأحرف أو الرموز الشريطية على خلفيات ذات ألوان زاهية.
أحد عيوب العلامات المعدنية هو أنه غالبا ما يكون من الضروري التقاط لقراءة الكود. في المقابل ، من السهل قراءة العلامات البلاستيكية دون الحاجة إلى التعامل مع. ميزة أخرى للعلامات البلاستيكية هي توافقها مع التصوير بالرنين المغناطيسي. في حين أن العلامات توفر معرفا فرديا للفأر أو الجرذ ، إلا أنها ليست معصومة من الخطأ. يمكن أن تفقد العلامات بسبب الإفراط في الاستمالة أو التهاب الجلد أو العدوى والصدمة الذاتية التي تحدث أثناء محاولة إزالة العلامات بسبب التعصب والقتال وسلوك التربية العدواني. إذا تم إيواء العديد من في نفس القفص ، فقد يكون فقدان علامة الأذن أمرا مزعجا. للتحايل على هذه المشكلة ، يجب استخدام شكل ثانوي لتحديد الهوية مثل رمز لكمة على الأذن المقابلة للعلامة. يجب أن توحد المنشأة كلا من اختيار الأذن المراد وضع علامة عليها والرمز المراد استخدامه على الأذن الأخرى ، ويجب الإشارة إلى جميع الرموز على بطاقة القفص.
الآن دعنا نتعلم كيفية تطبيق علامة الأذن بشكل صحيح ، حيث يمكن أن يكون للوضع غير الصحيح العديد من العواقب المؤسفة. بعد التطبيق ، سنناقش أيضا إزالة علامة الأذن ، والتي يتم إجراؤها عادة في حالة الإصابة بسبب تطبيق العلامة.
الخطوة الأولى هي تحديد علامة مناسبة للحيوانات المراد تحديدها. هنا ، سنستخدم علامة معدنية لتوضيح الإجراء على الفئران. تأكد من طلب أداة التطبيق المناسبة للحجم والنمط المحدد لعلامات الأذن المستخدمة. قم بإزالة العلامة برفق من حامل الورق المقوى ووجهها إلى أداة التطبيق بحيث يتم وضع النهاية مع الفتحة فوق المنطقة المسننة من التطبيق. يجب أن يكون الطرف المدبب للعلامة مقابل الشق.
عندما تكون جاهزا لتطبيق علامة الأذن ، قم بتقييد بحيث يمكن الوصول إلى الأذنين بسهولة. قد تكون أقل عرضة للمعاناة إذا استقرت الأطراف الخلفية على سطح مثل الجزء العلوي من القفص أو سطح المنضدة. بمجرد تقييد ، ضع نقطة علامة الأذن بعمق في محارة الأذن بحيث تواجه أرقام العلامات الجزء الخلفي من. ثم ، اضغط بقوة على التطبيق مغلقا ؛ سوف تخترق علامة الأذن الأذن وتغلق معا. عند تحريرها، ستسقط الأذن الموسومة من أداة التطبيق. تأكد من وضع العلامة وتطبيقها بشكل صحيح. إذا كنت تفضل أن تكون أرقام علامات الأذن مواجهة لأنف ، فضع نقطة العلامة في قاعدة الصيوان في الجزء الخلفي من الأذن ثم اضغط لقفل العلامة في مكانها.
يجب وضع العلامات بحيث لا تسبب انحناء في الأذن ، أو تتداخل مع حركة ، أو تلتقط أي جزء من القفص. إذا تم وضع العلامة بالقرب من حافة الأذن ، فيمكن تمزيقها بسهولة. إذا تم وضعه بالقرب من الرأس ، يمكن أن يلتصق جلد منطقة الرقبة بالعلامة ، مما يؤدي إلى تهيج وألم وتقييد الحركة ، مما قد يؤدي بعد ذلك إلى صدمة ذاتية. في بعض الأحيان ، يمكن أن تسبب العلامات المعدنية تهيجا وتورم الأذن. غالبا ما يؤدي هذا إلى التهابات الصيوان ، ويجب أن يشمل العلاج الفوري إزالة العلامة.
لإزالة العلامة ، قم بترطيب قضيب قطني بمحلول مطهر واستخدمه لإزالة أي حطام من حول العلامة. في حالات العدوى الشديدة ، قد يحتاج إلى التخدير. ثم ، باستخدام قواطع الأسلاك ، قم بقص الجزء العلوي من حلقة العلامة من الحافة إلى الحافة. الأهم من ذلك ، لا تقطع السطح المسطح لأن ذلك سيضغط على العلامة ويقرص الأذن ويتسبب في تلف الأذن. باستخدام مرقئ الدم، قم بتوجيه علامة الأذن برفق عبر الأذن وخارجها. انزلق العلامة للخارج بحيث لا تمر النهاية المجعدة من خلال التسبب في صدمة وتوسيع ثقب الثقب. بمجرد زوال العلامة ، امسح الأذن بعصا قطنية مبللة مطهرة ، وأعد إلى قفصه. إذا كان هناك إفرازات قيحية من الأذن ، فقد يكون من الضروري متابعة العلاج ويوصى بالتشاور مع الطاقم البيطري للتقييم.
الآن بعد أن عرفت كيفية تمييز المختبر باستخدام علامات الأذن واللكمات ، دعنا نراجع بعض التجارب التي يمكن أن تكون هذه الطرق مفيدة فيها. تتمثل إحدى الميزات الرئيسية لاستخدام كود لكمة الأذن في أن اللكمات يمكن أن تتضاعف كعينات من الأنسجة للتنميط الجيني ، وبالتالي تقليل الضغط على الناجم عن تكرار المناولة. ومع ذلك ، إذا كنت تخطط لاستخدام اللكمات لجمع عينات PCR ، فتذكر نقع الجهاز أولا في محلول مزيل للتلوث السطحي لمدة 3 دقائق على الأقل لإزالة الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي المتبقي ، ثم شطفه بالكحول قبل الاستخدام.
تزداد أهمية تقنية تحديد الهوية أكثر إذا استمرت التجربة لعدة أيام. على سبيل المثال ، في هذه التجربة ، قام العلماء أولا بتسمية باستخدام علامة معدنية ثم حقنوا العصب الوركي بتعليق من الخلايا السرطانية المعدلة وراثيا التي تعبر عن بروتين لوسيفيراز. بعد ذلك ، من أجل تحديد تطور السرطان ، قاموا بتصوير باستخدام التلألؤ البيولوجي بعد يوم واحد وعشرة وثمانية عشر يوما من الحقن.
لقد شاهدت للتو عرض JoVE الذي يوضح الطريقتين شائعتين الاستخدام لتحديد الهوية في القوارض: علامات الأذن ولكمات الأذن. يجب أن تفهم الآن رمز لكمة الأذن ، وتعرف الأنواع المختلفة من علامات أذن القوارض المتوفرة تجاريا ، ويجب أن تكون قادرا على تنفيذ هذه الإجراءات بدقة دون التسبب في إزعاج كبير للحيوانات.
تذكر أن كل تقنية لها مزاياها وعيوبها ، والتي يجب مراعاتها فيما يتعلق باحتياجاتك التجريبية. بالإضافة إلى النظر في التكلفة ، يجب أن تكون سهولة التقنية ومستوى الألم للحيوانات من الاعتبارات الأساسية عند اختيار طريقة تحديد الهوية المناسبة. كما هو الحال دائما ، شكرا على المشاهدة!
