سحب الدم II

يعد جمع الدم من الفئران والجرذان ضروريا لمجموعة متنوعة من الدراسات العلمية ، وقد طور الباحثون طرقا مختلفة لتحقيق أهداف تجريبية محددة.

في الدفعة الأولى ، ناقشنا الاعتبار العام لسحب الدم وراجعنا نزيف العين المداري الرجعي ، وقصاصات الذيل والنكات ، بالإضافة إلى طرق جمع الدم داخل القلب. هنا ، سنحدد إجراءات جمع الدم من الأوردة الوجهية وتحت الفك السفلي والصافن والفخذ. هذه الطرق أقل توغلا ولا تتطلب تخديرا ، مما يجعلها طريقة مفضلة عندما يؤدي استخدام التخدير إلى إرباك نتائج الدم أو البيانات الأخرى.

لنبدأ بإجراء الحصول على عينة دم من وريد وجه الفئران. على الماوس ، يوجد وريد وجه يسهل الوصول إليه يمتد عبر الخد. ابدأ باختيار المعدات المناسبة لهذا الإجراء. في الأساس ، تحتاج إلى أنبوب طرد مركزي صغير لجمع الدم وإبرة وخز متوفرة بأحجام مختلفة. يعتمد اختيار إبرة الوخز الصحيحة على عمر وجنسه ووزن جسمه وحجم العينة المراد جمعها. انظر بروتوكول النص للحصول على تفاصيل حول اختيار إبرة الوخز.

ابدأ الإجراء بتقييد باستخدام تقنية التجريف. يقلل ضبط النفس المناسب من حركة الرأس من جانب إلى آخر ويساعد في ضمان بزل الوريد بدقة وأمان باستخدام إبرة الوخز. إذا كانت القبضة ضيقة جدا ، فقد يتم تقييد تدفق الدم مما يؤدي إلى تقليل الحجم الذي يتم جمعه. بمجرد تقييد ، حدد المنطقة التقريبية من وريد الوجه عن طريق قياس طول العين أسفل الكانثوس الجانبي وعرض العين الذيلية. مع طرف إبرة الوخز ، اشعر بلطف بالنقطة التي ينتهي عندها عظم الفك. للحصول على دقة أفضل في ثقب الوعاء ، قد ترغب في وضع الماوس على جانبه.

الآن ، في موقع الإدخال ، أمسك إبرة الوخز بشكل عمودي على سطح الجلد بحيث يكون الطرف متجها قليلا نحو الأنف. هذا أمر بالغ الأهمية ، لأنه إذا تم توجيه طرف إبرة الوخز ذيليا ، ثقب قناة الأذن مما يتسبب في نزيف من الأذن. لثقب الوريد، ضعي دفعة قوية واثقب الجلد حتى كتف إبرة الوخز. عند الإزالة ، سيبدأ الدم في التدفق. للمساعدة في التدفق ، ضع برأس أقل من القلب. لوقف النزيف ، امسح موقع البزل لتحقيق الإرقاء ومنع فقدان الدم المفرط. أخيرا ، حرر الضغط على القفص وأعد إلى قفصه. لاحظ أن أحجام التجميع ستختلف ، ولكن من الضروري عدم تجاوز الحد الأقصى لحجم جمع الدم للبقاء على قيد الحياة. شاهد البروتوكول النصي لفيديو سحب الدم للحصول على تفاصيل حول الحد الأقصى الموصى به لحجم الجمع. يمكن أخذ عينات تسلسلية بالتناوب بين الجانب المستخدم. لا ينبغي استخدام أي من الجانبين أكثر من كل 5-7 أيام.

الآن دعنا نراجع طريقة نزيف الوريد تحت الفك السفلي. على الرغم من أن هذا يشبه إلى حد بعيد تقنية نزيف وريد الوجه ، إلا أن هناك اختلافات في المعدات واختلافات طفيفة في إجراء النزيف.

يمتد الوريد تحت الفك السفلي على طول الفك السفلي للفأر ويتقارب مع وريد الوجه في الوريد الوداجي. بدلا من إبرة الوخز ، يتم تنفيذ هذه الطريقة باستخدام الإبر. ولكن على غرار المشارط ، يعتمد اختيار مقياس الإبرة على العمر والجنس ووزن وحجم العينة - انظر بروتوكول النص للحصول على التفاصيل.

للبدء ، قم بتقطيع بنفس طريقة نزيف وريد الوجه بحيث يكون هناك الحد الأدنى من حركة الرأس من جانب إلى آخر. تذكر - قد تؤدي القبضة الضيقة بشكل مفرط إلى تقليل حجم جمع الدم. أثناء تقييد الفأر ، تخيل خطا من زاوية الفم عبر الوجه وخطا من الكانثوس الجانبي للعين. نقطة تقاطع هذه الخطوط هي المساحة التقريبية للوريد تحت الفك السفلي. يتزامن هذا مع غمازة صغيرة خالية من الشعر وجدت ذيلية في زاوية الفم وأسفل خط الفك بقليل.

للحصول على دقة أفضل ، ضع في الاستلقاء الجانبي (3.6.1). بعد ذلك ، أمسك الإبرة بشكل عمودي على سطح الجلد وأدخلها بضغطة قوية. لا تدخل الإبرة خارج الطرف المائل ، لأن عمق الإدخال الأكبر من ذلك قد يؤدي إلى صدمة للعضلات والأعصاب والأوعية الأخرى الموجودة في الرأس والرقبة وتجويف الفم. عند إزالة الإبرة ، سيبدأ الدم في التدفق. مثل نزيف وريد الوجه ، ضع الفأر مع الرأس أقل من القلب للمساعدة في تدفق الدم. أخيرا ، قم بمسح موقع الثقب لتحقيق الإرقاء وتحرير الضغط على القفص لإعادة إلى قفصه.

الآن ، دعنا نتعلم كيفية جمع الدم من الوريد الصافن. هذا الوريد هو وعاء سطحي يمتد ظهريا ثم أفقيا عبر المفصل الرصغي.

تشتمل المعدات التي تحتاجها لهذا الإجراء على جهاز تقييد ، والذي يمكن أن يكون بلاستيكيا مرنا للفئران أو بالنسبة للفئران ، يمكن استخدام أنبوب مخروطي بلاستيكي معدل سعة 50 مل. لاحظ أن نهاية الأنبوب مقطوعة للسماح بوجود ثقب في التنفس ، ويتم قطع فتحة بعرض نصف بوصة وطول 2 بوصة من نهاية الغطاء. الحواف مغطاة بشريط جلطة من أجل سلامة. يتطلب هذا الإجراء أيضا عاصبة - مصنوعة باستخدام حقنة 3 سم مكعب وطول 0-2 خياطة غير قابلة للامتصاص ، ومرهم مضاد حيوي ثلاثي مع مسحة - لاستخدامها كحاجز مقاوم للرطوبة بين الجلد وقطرات الدم ، ومقص شعر ، وإبرة قياس 22 لبزل الوريد ، وأنبوب الهيماتوكريت لجمع الدم.

لكبح جماح الفأر ، ضعه في الأنبوب ، الأنف أولا. بعد ذلك ، قم بتوجيه الساق الخلفية برفق إلى الفتحة وقم بتثبيتها باستخدام السبابة والإبهام. بعد ذلك ، حلق الشعر من الجانب الجانبي للساق من العرقوب إلى الخنق. بعد ذلك ، قم بتلطيخ طبقة رقيقة جدا من مرهم المضاد الحيوي الثلاثي على المنطقة الخالية من الشعر. بعد ذلك ، ضع العاصبة إلى أقصى حد ممكن في الجمجمة وشدها. سيبدأ الوعاء الصافن الذي يمتد عبر السطح الخارجي من الركبة إلى الكاحل في الامتلاء وسيصبح مرتفعا ويسهل تصوره.

بعد ذلك ، أمسك إبرة قياس 22 مباشرة فوق الأوعية الدموية وعموديا على سطح الجلد. وثقب الوعاء الدموي ، مع الحرص على عدم إدخال الإبرة بعمق شديد وثقب العضلات أو العظام. سوف يتدفق الدم على سطح الساق لتجميعه في أنبوب الهيماتوكريت. بمجرد جمع الدم ، قم بفك العاصبة واضغط على ثقب الإرقاء. بعد توقف النزيف ، أخرج من المقبوض وأعده إلى قفصه. تتراوح الأحجام التي تم جمعها بهذه الطريقة بين 10 إلى 150؟ L ، اعتمادا على تكرار أخذ العينات. وجودة العينة متغيرة ، حيث قد تحتوي على منتجات الأنسجة. يجب ألا تؤخذ أكثر من 4 عينات دم في غضون 24 ساعة من نفس الساق.

أخيرا ، سوف نتعلم كيفية جمع الدم من الوريد الفخذي ، وهو خيار آخر لجمع الدم على الفئران. يمتد الوريد الفخذي على الجانب الإنسي من الساق الخلفية من الفخذ إلى مفصل الركبة قبل عبور الركبة ويصبح الوريد الصافن الجانبي ، مما يسهل الوصول إليه.

تتمثل ميزة نزيف الوريد الفخذي في أنه يتم جمع حجم أكبر بسهولة أكبر من الوريد الصافن. العيب هو أن هذا الإجراء ، في واعي ، يتطلب شخصين. تشبه المعدات اللازمة لهذا الإجراء طريقة الوريد الصافن ، إلا أنها لا تتطلب عاصبة ، وجهاز التقييد المفضل هو مخروط مرن. لتحديد المخروط الصحيح ، قم بقياسه مقابل طول جسم ثم قم بعمل ثقب بيضاوي مقطوع على مستوى الفخذ.

لكبح جماح ، ضعه في الأنبوب ، الأنف أولا. ثم قم بطي نهاية المخروط وأغلقه باستخدام مشبك رابط صغير لمنع من الخروج. الآن اسحب الساق الخلفية من خلال الفتحة البيضاوية للوصول إلى الوريد الفخذي. لا تمسك بإحكام شديد لأنها قد تؤدي إلى تفاقم تكوين الورم الدموي. بعد ذلك ، احلق السطح الداخلي للساق من الفخذ إلى الركبة ، وقم بتطبيق طبقة رقيقة من مرهم المضادات الحيوية الثلاثية على المنطقة الخالية من الشعر. بعد ذلك ، يجب على الشخص المقيد انسداد الوريد الفخذي وإمساك الجرذ مع السطح الداخلي للساق في مواجهة الشخص الذي سيسحب الدم. أمسك الإبرة قياس 22 بشكل عمودي على الأوعية الدموية ، وثقب الوريد مباشرة وجمع الدم في أنابيب الهيماتوكريت لأنها تنتشر على سطح الجلد. يجب أن يكون البزل قريبا من الركبة قدر الإمكان للسماح بأخذ العينات في المستقبل أمام هذا الموقع. تأكد أيضا من أن عمق الثقب ليس أعمق من طول شطبة الإبرة. للمساعدة في تدفق الدم ، ضع الجرذ مع ساقه أقل من القلب. أخيرا ، حرر الضغط على الساق واضغط على موقع البزل لتحقيق الإرقاء ومنع فقدان الدم المفرط. لاحظ أنه يمكن جمع كمية أكبر بكثير من الدم باستخدام هذا الإجراء.

بعد مناقشة أساسيات تقنيات جمع الدم ، دعنا نراجع بعض الأمثلة على سبب فائدة هذه الإجراءات للبحث العلمي

غالبا ما يتم تحليل الدم لتأكيد الاستجابة المناعية أثناء تطوير اللقاح. هنا ، قدم الباحثون لقاح الببتيد للحيوانات التي تعاني من سرطان المثانة. بعد ذلك ، قاموا بجمع الدم عبر الوريد تحت الفك السفلي وفصلوا المصل للكشف عن مستويات السيتوكينات المختلفة ، والتي تعمل كمؤشرات على فعالية اللقاح.

يتم أيضا إجراء جمع الدم بشكل شائع لاختبار فعالية العلاج من خلال دراسة المؤشرات الحيوية للمرض البشري ، مثل مستويات الجلوكوز في مرض السكري. كان هؤلاء الباحثون مهتمين باختبار فعالية العلاج الجيني الجديد الذي يتم تقديمه عبر وريد الذيل في المصابة بالسكري. بعد الحقن ، قام هؤلاء الباحثون بجمع الدم من الوريد الصافن في عدة نقاط زمنية لتحليل تأثير بروتوكولات العلاج المختلفة على مستوى الجلوكوز في الدم.

أخيرا ، بالنسبة لبعض التجارب ، من المهم معرفة الحالة الأساسية للحيوان ، مثل مستويات الالتهاب أو الإجهاد. في هذا المثال ، تم جمع بلازما الدم من فأر قبل وبعد حدث مرهق. وكما ترون ، يكون مستوى الكورتيكوستيرون ، أو هرمون التوتر ، أعلى في بعد عشر دقائق من الحدث المجهد.

لقد شاهدت للتو الدفعة الثانية من JoVE حول تقنيات سحب الدم للفئران والجرذان. بعد مشاهدة كلا المقطعين ، يجب أن يكون لديك فهم أفضل لاعتبارات وإجراءات جمع الدم من هذه وكيفية استخدامها في البحوث الطبية الحيوية اليوم. كما هو الحال دائما ، شكرا على المشاهدة!