Why is sterile tissue harvest important in laboratory animal research?

Sterile tissue harvest prevents contamination of cells and organs collected from research animals, which is essential for cell and tissue cultures, protein and RNA analysis, and metabolic profiling. Using harvested tissues for in vitro experiments reduces overall animal usage in research, supporting the replacement principle of the 3 R's framework for humane research practices.

What equipment and preparation are needed before starting a sterile tissue harvest?

The procedure requires a laminar flow hood running for at least 15 minutes before use. Disinfect the hood with 70% alcohol and place wet paper towels inside. Arrange sterile instruments in order of use from left to right to maintain unidirectional workflow. The sterile technician must wear a sterile gown and two pairs of sterile surgical gloves covering the wrists to prevent skin cell contamination.

How are abdominal organs like the liver and spleen removed during sterile harvest?

For the spleen, position the animal in right lateral recumbency and cut directly over the organ, gently retracting it while avoiding punctures. For the liver, place the animal in dorsal recumbency, reflect it away from the diaphragm, and carefully sever membranes and blood vessels. The liver is fragile and easily punctured, so handle it carefully to prevent excessive blood release that could compromise tissue quality.

What is the proper technique for harvesting the heart and lungs together?

Place the animal in dorsal recumbency and open the thoracic cavity by cutting through the abdominal muscle and diaphragm. Puncture the diaphragm at the lateral rib cage and extend cuts to the sternum. Grasp the trachea with forceps and sever it with scissors, then lift and remove lung attachments from the spinal surface until the heart and lungs can be lifted free from the chest cavity.

How is the brain harvested using aseptic technique?

Strip the skin from the body and over the skull, then saturate with alcohol and remove outer gloves. Make a cut along the midline from the cervical area to the nose. Using dedicated sterile scissors, cut through the spine at the skull base and along the midline through the foramen magnum. Lever the parietal bones away, disrupt nerve attachments with a spatula, and break olfactory bulb attachments with forceps before dropping the brain into sterile media.

What research applications use sterile tissue harvest techniques?

Neural stem researchers extract tissue from mouse neonatal brains to study stem cell development and cancer progression in vitro. Metabolic profiling studies analyze tissue metabolites using nuclear magnetic resonance spectroscopy. Immunologists harvest lungs aseptically to measure bacterial load in infection models, collecting samples at multiple time points to track disease progression.

What roles do sterile and non-sterile technicians play during tissue harvest?

Both technicians wear masks and bouffants. The non-sterile technician euthanizes the animal, places the carcass on paper towels, soaks it with 70% alcohol, and opens sterile instrument packages without touching inner surfaces. The sterile technician wears a sterile gown and two pairs of gloves, removes instruments aseptically, and performs the actual organ extraction to maintain sterility throughout the procedure.

حصاد الأنسجة المعقمة

0 مشاهدات12:29 د

1. التحضير

تشمل المواد المستخدمة بشكل شائع 70٪ كحول في زجاجة بخ ، وإبر معقمة قياس 20-25 ، وعبوتين من الأدوات المعقمة لمقص القزحية وملقط الإبهام (واحدة للجلد والأخرى للأنسجة الداخلية) ، والمناشف الورقية ، وقفازات الجراح المعقمة ، وطبق بتري معقم ، ووسط معقم ، ومحلول ملحي معقم.
يجب أن تعمل مروحة غطاء المحرك لمدة 15 دقيقة على الأقل قبل الإجراء ، ويجب تطهيرها بالكحول بنسبة 70٪.
إذا كان غطاء المحرك مزودا بمصباح تعقيم بالأشعة فوق البنفسجية ، فيمكن استخدامه لمزيد من التطهير لسطح العمل.
يتم ارتداء القفازات النظيفة لإعداد غطاء المحرك. يتم تحميل الجهاز في غطاء المحرك بالترتيب الذي سيتم استخدامه به ، عادة من اليسار إلى اليمين. يسمح ذلك بإجراء العمل في سير عمل أحادي الاتجاه ، مما يمنع العناصر المتسخة من تلويث العناصر النظيفة. سيحمي ذلك الأنسجة أو الأعضاء المحصودة من التلوث العرضي من جثث.
يتم فتح حزم الأدوات المعقمة ، مع مراعاة الجزء الداخلي المعقم للعبوات. للحفاظ على العقم ، يتم وضع العبوة في وسط الطاولة ، ويتم فتح كل رفرف دون عبور الحقل المعقم أو داخل العبوة. يفتح الشخص غير المعقم أول رفرف علوي من خلال عكسها بعيدا له. ثم يتم فتح اللوحات الجانبية باستخدام كلتا يديك - واحدة على كل رفرف - وسحبها بعيدا عن العبوة. ثم يتم سحب السديلة النهائية نحو الشخص الذي يفتح العبوة ، مع الحرص على تجنب لمس أي من الأسطح الداخلية للعبوة.
ضع المناشف الورقية في الغطاء ، وبللها بالكحول.
الشخص غير المعقم سوف يقتل.
يرتدي الشخص المعقم مجموعتين من القفازات الجراحية المعقمة.
يضع الشخص غير المعقم الذبيحة على المناشف الورقية وينقع الذبيحة بالكامل بنسبة 70٪ من الكحول.
باستخدام مجموعة واحدة من المقصات والملقط المعقم ، قم بعمل قطع أفقي في الجلد أمام القلفة (عند الذكور) أو عظم الحوض (عند الإناث). تجنب قطع عضلات البطن.
ضع الأدوات جانبا.

2. حصاد الأنسجة

قم بعمل قطع صغير أمام الحوض عند الإناث وفوق القلفة عند الذكور.
ضع الإبهام تحت القطع وأمسك بحافة الجمجمة للقطع. باستخدام اليد الأخرى ، أمسك الأطراف الخلفية والذيل بإحكام أثناء سحب الجلد نحو الرأس.
سوف يتمزق الجلد بعيدا عن الجسم فوق الأطراف الخلفية مباشرة ويمكن قلبها من الداخل إلى الخارج فوق الرأس والساقين الأمامية. هذا يزيل بشكل فعال ملوثات الشعر أثناء حصاد الأعضاء.
انقع الجسم مرة أخرى مع 70٪ كحول ، وقم بإزالة زوج القفازات السطحي الذي لم يعد معقما.
افتح تجويف البطن باستخدام أدوات معقمة.
1. طحال
  1. لحصاد الطحال ، يتم وضع الجسم في الراقد الجانبي الأيمن.
  2. يمكن تصور الطحال من خلال عضلة البطن.
  3. يتم قطع المقص مباشرة فوق الطحال.
  4. يتم سحب الطحال بلطف من تجويف الجسم.
  5. عند قطع جميع المرفقات بين الطحال والمعدة وأنسجة البنكرياس ، تجنب ثقب العضو أو تمزيقه.
2. كبد
  1. لحصاد أي أعضاء أخرى في البطن ، يتم وضع الجسم في الاستلقاء الظهري.
  2. يتم رفع عضلة البطن وقطعها بعيدا ، تاركة فتحة بيضاوية مباشرة فوق تجويف البطن.
  3. بعد تعريض تجويف البطن ، قم بعكس الكبد ذيليا بعيدا عن الحجاب الحاجز.
  4. اقطع بعناية أي أغشية تربط الكبد بالحجاب الحاجز.
  5. قم بعمل قطع عمودي على العمود الفقري من خلال الأوعية الدموية المرئية بين الكبد والحجاب الحاجز.
  6. ارفع الكبد وعكسه باتجاه الحجاب الحاجز لتصور المرفقات الموجودة تحته.
  7. ستكون هناك أغشية رقيقة تربط فصوص الكبد الأصغر بالمعدة والأمعاء الدقيقة ، والتي ستحتاج إلى تعطيل.
  8. أمسك العقدة الليفية في وسط الكبد على جانبها السفلي ، وارفع العضو للعثور على جميع المرفقات. افصل الكبد عن الأعضاء والأنسجة الأساسية.
  9. لاحظ أن الكبد هش ويمكن ثقبه بسهولة ، مما يؤدي إلى إطلاق الدم. لذلك ، يجب التعامل معها بعناية.
3. كلى
  1. بعد تعريض تجويف البطن ، ادفع الأمعاء إلى اليسار لتصور الكلية اليمنى ، أو إلى اليمين لتصور الكلية اليسرى.
  2. لإزالة الكلى ، استخدم شفرات الملقط للإمساك بها أسفل الكلى لعزل العضو عن الجسم. باستخدام مقص أو شفرة مشرط ، اقطع الكلية بعيدا عن الجسم. قم بعمل القطع تحت الملقط لتجنب إتلاف الكلى.
  3. بمجرد إزالة الكلى ، يمكن قص أي دهون من العضو.
4. مبيض
  1. بعد تعريض تجويف البطن ، حرك الأمعاء في الجمجمة لتصور الرحم.
  2. اتبع قرون الرحم اليسرى ، ثم اليمين ، إلى المبايض.
  3. المبايض صغيرة. في الأكبر سنا ، قد تكون مغروسة في الدهون.
  4. حرك الملقط تحت المبيض لعزله عن الجسم ، واقطعه بعيدا عن الدهون وقناتي فالوب.
5. الخصيتين
  1. بعد فتح تجويف البطن ، أمسك وسادة الدهون الأربية برفق واسحبها إلى الأمام.
  2. سيؤدي ذلك إلى سحب الخصية من كيس الصفن.
  3. بمجرد أن تتعرض الخصية ، قم بقطع المرفقات بكيس الصفن والأسهر لتحريرها من الجسم.
  4. يتم ذلك لكل خصية.
يتم فتح التجويف الصدري لإزالة الأعضاء الصدرية
1. يتم وضع الجسم في الاستلقاء الظهري. من الضروري أن ينعكس الجلد فوق الرأس إذا كان سيتم حصاد أعضاء التجويف الصدري.
2. أمسك عملية الخنجري وارفعها للسماح بقطع عضلة البطن فقط الذيلية إلى الأضلاع. قم بتمديد القطع على طول المنحنى السفلي للقفص الصدري على كلا الجانبين. سيسمح ذلك بتصور الحجاب الحاجز.
3. ثقب الحجاب الحاجز عن طريق عمل قطع صغير في القفص الصدري عند أقصى نقطة جانبية ممكنة على كل جانب. قطع الحجاب الحاجز بعيدا عن الضلوع.
4. ارفع الأضلاع عند الخنجري لتصور الأعضاء الصدرية
5. قم بتمديد القطع الجانبي إلى الجزء العلوي من القص على كلا الجانبين ، وافتح الصدر.
6. يمكن إزالة القلب والرئتين معا بسهولة.
  1. ضع الملقط بشكل عمودي على القصبة الهوائية ، وامسك القصبة الهوائية بإحكام.
  2. باستخدام المقص ، قم بعمل قطع عمودي على القصبة الهوائية أمام الملقط. يجب أن يقطع هذا القطع القصبة الهوائية والمريء.
  3. دون تخفيف قبضة القصبة الهوائية ، ارفع القصبة الهوائية لأعلى والذيلية. قص أي مرفقات للرئتين بسطح العمود الفقري في القفص الصدري.
  4. قد يحتاج المريء إلى القطع ليتمكن من رفع القلب والرئتين من تجويف الصدر.
7. القلب فقط
  1. ارفع القلب ، واقطع كيس التامور بعناية.
  2. يقع الشريان الأورطي في الجانب الجمجمي للقلب على يسار.
  3. أمسك الشريان الأورطي بالملقط ، وقم بعمل قطع بعيد عن الملقط ، مع الاحتفاظ بالإمساك بالشريان الأورطي والقلب.
  4. أمسك الشريان الأورطي أثناء قطع الوريد الأجوف الأمامي والشرايين والأوردة الرئوية.
  5. ارفع القلب بعيدا عن التجويف الصدري بواسطة الشريان الأبهري.
8. الأعضاء الصدرية الأخرى
  1. يتم حصاد الأعضاء بالترتيب التالي للحفاظ على عقم الأدوات: الغدة الصعترية والغدد الليمفاوية والمريء.
دماغ
1. في ظروف خاصة ، سيحتاج الدماغ إلى الحصاد للثقافة المعقمة.
2. يتم حصاد الدماغ أخيرا بعد أي حصاد أعضاء آخر.
3. في الحالات التي يكون فيها الدماغ هو العضو الوحيد الذي يتم جمعه ، لا يتم تجريد الجلد من الجسم ، ولكن بدلا من ذلك يتم إجراء قطع في مؤخرة العنق ويمتد على طول خط الوسط من منطقة عنق الرحم الظهرية إلى طرف الأنف.
4. بعد سحب الجلد بعيدا عن الجمجمة بشكل جانبي ، يتم نقع العظم المكشوف بنسبة 70٪ من الكحول وإزالة القفازات العلوية المتسخة.
5. باستخدام زوج مخصص من مقص حصاد الدماغ المعقم ، قم بعمل قطع في العمود الفقري عند قاعدة الجمجمة.
6. افتح الجمجمة عن طريق وضع نقطة المقص في الثقبة الماغنوم والقطع على طول خط الوسط.
7. استخدم الطرف المسطح لشفرة المقص لرفع العظام الجدارية بعيدا عن الدماغ.
8. قم بتعطيل المرفقات العصبية في جذع الدماغ بعناية ، والتصلب البصري أسفل الدماغ ، باستخدام النقطة المغلقة لملقط الإبهام.
9. بطريقة مماثلة ، حرك الملقط المغلق للأمام أسفل الدماغ وكسر المرفقات في المصابيح الشمية.
10. يمكن بعد ذلك إسقاط الدماغ من الجمجمة إلى وسط معقم.
11. عند حصاد الدماغ ، تعتبر إحدى اليدين غير معقمة لأنها تمسك الجلد من الجمجمة المنعكسة أسفل الذقن لتثبيت الرأس ، بينما يتم قطع الجمجمة وإزالة الدماغ.
جلد
1. الأنسجة الثديية
  1. تم العثور على الأنسجة الثديية من أعلى القص عند الوبروبريوم إلى الفتحة التناسلية على السطح البطني ، وتمتد بشكل جانبي لأعلى كلا الجانبين ، وتلامس تقريبا السطح الظهري عند الوركين والكتفين.
  2. افحص الأنسجة الثديية للبحث عن الكتل أو تغير اللون أو التشوهات. زيادة حجم أنسجة الثدي المرضعات أو الحوامل ، وقد يكون الحليب موجودا.
  3. يتطلب استئصال الغدد الثديية الإمساك بحافة الغدة باستخدام ملقط الإبهام واستخدام تشريح حاد لفك المرفقات بالجلد. بمجرد فصل الغدة عن الجلد ، يمكن استخدام مقص القزحية لقطع أي مرفقات متبقية.
  4. انقع الأسطح المكشوفة بنسبة 70٪ من الكحول وابدأ في حصاد الأنسجة باستخدام مجموعة جديدة من الأدوات المعقمة.
  5. يتم شطف الأنسجة المحصودة بمحلول ملحي معقم قبل وضعها في وسط الاستزراع.
2. الأورام تحت الجلد
  1. في كثير من الأحيان ، يتم زرع الخلايا السرطانية بشكل متكرر في ، ثم يتم حصاد الورم الناتج للحفاظ على خط الخلايا السرطانية.
  2. من الضروري إجراء حصاد الأنسجة المعقمة للأورام تحت الجلد قبل انتهاك سلامة الجلد.
  3. إذا كانت الكتلة متآكلة أو نخرية ، فلن تكون الأنسجة التي تم جمعها ذات نوعية جيدة وقد لا تكون معقمة.
  4. يتم وضع الجسم لفضح منطقة الاهتمام. يتم قطع الجلد على طول جانب واحد من الورم.
  5. يعكس الجلد بعناية لفضح الورم. ضع أدوات الجلد على الجانب وانقع الأنسجة المكشوفة بنسبة 70٪ كحول.
  6. باستخدام أدوات معقمة جديدة ، قم بتشريح الكتلة من المرفقات الأساسية وقطع أي أوعية دموية تغذي الكتلة.
  7. ثم يتم وضع الورم في وسط الاستزراع.

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: كاي ستيوارت ، RVT ، RLATG ، CMAR. فاليري أ. شرودر ، RVT ، RLATG. جامعة نوتردام ، إنديانا

في عام 1959 ، تم تقديم 3 R بواسطة W.M.S. Russell و R.…