المصدر: كاي ستيوارت ، RVT ، RLATG ، CMAR. فاليري أ. شرودر ، RVT ، RLATG. جامعة نوتردام ، إنديانا
في عام 1959 ، تم تقديم 3 R بواسطة W.M.S. Russell و R.L. Burch في كتابهما مبادئ التقنية التجريبية الإنسانية. 3 R هي استبدال وتقليل وصقل استخدام في البحث. 1 يعد استخدام خطوط الخلايا ومزارع الأنسجة التي نشأت من البحث تقنية بديلة ، حيث يسمح بإجراء العديد من التجارب في المختبر. يتطلب حصاد الأنسجة والأعضاء لاستخدامها في مزارع الخلايا والأنسجة تقنية معقمة لتجنب تلوث الأنسجة. الحصاد المعقم ضروري أيضا لتحليل البروتين والحمض النووي الريبي والتنميط الأيضي للأنسجة. ستناقش هذه المخطوطة عملية حصاد الأعضاء المعقمة في الفئران والفئران.
للتأكد من عقم الأنسجة. يتم الحصاد في غطاء تدفق رقائقي تم تطهيره بالكحول. يجب تعقيم جميع المواد المستخدمة. يجب على الفني الذي يقوم بالحصاد ارتداء معدات الحماية الشخصية ، بما في ذلك القناع ، والردوب المنتفخ ، والجراحي المعقم ، والقفازات الجراحية المعقمة. يجب أن يغطي الثوب الرسغين لمنع تساقط خلايا الجلد في تجويف الجسم المفتوح أو أطباق بتري أو الوسط المعقم. للحفاظ على عقم الفني ، يتطلب هذا الإجراء أن يساعد فني ثان غير معقم الفني المعقم في القتل الرحيم للحيوانات.
في التجارب التي تتطلب الملامح الأيضية للأنسجة ، يكون لطريقة حصاد الأنسجة تأثير كبير على جودة البيانات التي تم جمعها. 2 يمكن أن يؤثر كل من إجراء القتل الرحيم وطول الوقت الذي يستغرقه الحصاد على سلامة الأنسجة. ثبت أن نقص الأكسجة ، وهو نتيجة للقتل الرحيم بثاني أكسيد الكربون ، له تأثير عميق على المستقلبات في الأنسجة. يحدث نزيف الأوعية الدموية في أنسجة الرئة أيضا بسبب استخدام ثاني أكسيد الكربون للقتل الرحيم. يمكن أن يتسبب ترتيب إزالة الأنسجة عند إجراء التشريح المتسلسل للأنسجة المستهدفة في حدوث تغيرات في التمثيل الغذائي ، حيث تبدأ الأنسجة في التقدم في العمر أو التحلل أثناء الحصاد.
في حين أن معظم المحاصيل المعقمة تستهدف عضوا واحدا ، فقد تكون هناك أوقات تكون فيها هناك حاجة إلى أكثر من عضو واحد. أثناء التشريح المتسلسل ، ستحدد الأنسجة المطلوبة الترتيب الذي يجب إزالتها به. 2 يجب حصاد الأنسجة التي تتحلل بسرعة في أسرع وقت ممكن بعد القتل الرحيم. للحفاظ على عقم الأدوات ، تتم إزالة الأعضاء التي يتم حصادها من تجويف البطن بالترتيب التالي: الطحال والكبد والكلى والغدد الكظرية والمبيض أو الخصيتين والأعضاء الجنسية الملحقة (البروستاتا ، الحويصلات المنوية ، الرحم ، قناتي فالوب) ، أنسجة البنكرياس ، الغدد الليمفاوية ، المثانة البولية ، والأمعاء المعوية (المعدة والأمعاء الدقيقة والغليظة). ترتيب حصاد الأعضاء من التجويف الصدري هو إزالة القلب والرئتين أولا متبوعا بجمع الغدة الصعترية والغدد الليمفاوية والمريء. 3 قفازات جديدة مطلوبة لكل فأر.
قد تحتاج إلى الحفاظ على بعض الأعضاء المعقمة التي تم حصادها. يتم الحفاظ على الأنسجة عن طريق التجميد السريع بالنيتروجين السائل (LN2) أو بمزيج من LN2 و 2-methylbutane. بالنسبة إلى LN2 وحده ، يتم شطف الأنسجة بمحلول ملحي معقم ، ويتم مسحها على قطعة قماش ماصة معقمة لاستنفاد الرطوبة الزائدة ، وتوضع في مربعات من رقائق الألومنيوم المعقمة ، وتغمرها على الفور في LN2. 2 بالنسبة للعينات المناعية ، يضاف 2-ميثيل بوتان. يتم غمر الأنسجة في الواقع في 2-ميثيل بوتان الذي تم تبريده بواسطة LN2. عندما تتحول الأنسجة إلى اللون الأبيض ، يتم إزالتها من 2-ميثيل بيوتان ، ووضعها في عبوات معقمة ، ثم توضع مباشرة في LN2.
1. التحضير
2. حصاد الأنسجة
تتطلب العديد من التجارب جمع الخلايا من الأنسجة المستقاصة. في مثل هذه الحالات ، من الضروري إجراء عملية حصاد الأنسجة بطريقة معقمة. يسمح استخدام خطوط الخلايا ومزارع الأنسجة التي تنشأ من الأبحاث بإجراء العديد من التجارب في المختبر ، مما يقلل بدوره من استخدام في البحث.
في هذا الفيديو ، سنناقش الطريقة المعقمة لحصاد الأعضاء المستخرجة بشكل شائع من المختبر. وسيتبع ذلك مراجعة قصيرة لبعض الأمثلة على التجارب التي تستخدم هذه التقنية المعقمة لتحقيق أهداف بحثية مختلفة.
لنبدأ بخطوات التحضير المطلوبة لضمان عقم المساحة والأدوات والأفراد أثناء حصاد الأنسجة الحيوانية.
يتم تنفيذ هذا الإجراء في غطاء التدفق الصفيحي. قبل العملية ، يجب أن تعمل مروحة غطاء المحرك لمدة 15 دقيقة على الأقل ويجب تطهير المنطقة بالكحول بنسبة 70٪. بعد ذلك ، ضع بعض المناشف الورقية في الغطاء وبللها بنسبة 70٪ من الإيثانول. بعد ذلك ، قم بتحميل المعدات المعقمة وتنظيمها حسب الترتيب الذي سيتم به استخدام كل أداة ، عادة من اليسار إلى اليمين. هذا يسمح بسير العمل بطريقة أحادية الاتجاه ، مما يمنع التلوث العرضي من جثة.
يوصى بوجود فني غير معقم لمساعدة الفني المعقم. يجب على كلا المشغلين ارتداء قناع ومنتفخ. يجب أن يرتدي الفني المعقم ثوبا معقما وزوجين من القفازات الجراحية المعقمة. لاحظ أن الثوب والقفازات يجب أن يغطيا الرسغين لمنع تساقط خلايا الجلد في تجويف الجسم المفتوح أو أطباق بتري أو الوسائط المعقمة.
يفتح الشخص غير المعقم حزمة الأدوات المعقمة دون لمس السطح الداخلي ، بحيث يمكن للشخص المعقم إزالة الأداة بشكل معقم. أخيرا ، يقوم الفني غير المعقم بالقتل الرحيم للحيوان ، ووضع الذبيحة على المناشف الورقية ونقعها بالكامل بنسبة 70٪ من الكحول ، حتى يتمكن الشخص المعقم من بدء الحصاد.
أولا ، سنراجع استخراج أعضاء البطن ، بما في ذلك الطحال والكبد والكلى والمبيضين والخصيتين.
باستخدام مجموعة من المقصات والملقط المعقم ، قم بعمل قطع أفقي في الجلد أمام القلفة عند الذكور وعظم الحوض عند الإناث. تجنب قطع عضلات البطن. بعد ذلك ، ضع إبهامك تحت القطع وامسك حافة الجمجمة للقطع. باستخدام اليد الأخرى ، أمسك الأطراف الخلفية والذيل بإحكام ، مع سحب الجلد نحو الرأس. سوف يتمزق الجلد بعيدا عن الجسم فوق الأطراف الخلفية مباشرة ، ويمكن قلبه من الداخل إلى الخارج فوق الرأس والساقين الأمامية. هذا يزيل بشكل فعال ملوثات الشعر التي قد تتداخل مع حصاد الأعضاء المعقمة. ثم انقع الجسم مرة أخرى بنسبة 70٪ من الكحول وقم بإزالة القفازات السطحية التي لم تعد معقمة. تخلص أيضا من جميع الأدوات التي تم استخدامها على الجلد.
لحصاد الطحال ، ضع الجسم في الاستلقاء الجانبي الأيمن. يجب أن يكون الطحال مرئيا من خلال عضلة البطن. استخدم المقص لعمل قطع مباشرة فوق الطحال ، وسحب العضو برفق من تجويف الجسم. قم بقص جميع المرفقات بين الطحال والمعدة وأنسجة البنكرياس ، ولكن تجنب ثقب العضو أو تمزيقه.
لحصاد جميع أعضاء البطن الأخرى ، ضع الجسم في الاستلقاء الظهري. بعد ذلك ، ارفع عضلة البطن واقطعها تاركة فتحة بيضاوية مباشرة فوق تجويف البطن. لحصاد الكبد ، اعكس العضو ذيليا بعيدا عن الحجاب الحاجز. استخدم الآن المقص لقطع أي أغشية بين الهيكلين بعناية. بعد ذلك ، قم بعمل قطع عمودي على العمود الفقري من خلال الأوعية الدموية. ثم ارفع الكبد وعكسه باتجاه الحجاب الحاجز لتصور المرفقات الموجودة تحته. ستكون هناك أغشية رقيقة تربط فصوص الكبد الأصغر بالمعدة والأمعاء الدقيقة. أمسك العقدة الليفية في وسط الكبد على الجانب السفلي وارفع العضو للعثور على جميع المرفقات. الآن افصل العضو عن الأنسجة الأساسية. لاحظ أن الكبد هش ويمكن ثقبه بسهولة مما يؤدي إلى الإفراط في إطلاق الدم. لذلك ، يجب التعامل معها بعناية.
لحصاد الكلى ، ادفع الأمعاء إلى اليسار لكشف الكلية اليمنى أو إلى اليمين لكشف الكلية اليسرى. استخدم الآن شفرات الملقط للإمساك بها تحت الكلى واستخدام المقص المقطوع تحت الملقط ، وإزالة العضو من الجسم.
لحصاد المبيضين ، حرك الأمعاء في الجمجمة لتصور الرحم. اتبع قرني الرحم الأيمن والأيسر إلى المبايض. هذه أعضاء صغيرة وفي الأكبر سنا قد تكون مغروسة في الدهون. حرك الملقط تحت المبيض لعزله عن الجسم وقطعه من الدهون وقناة فالوب.
في الذكور ، لإزالة الخصيتين ، أمسك بلطف وسادة الدهون الأربية واسحب إلى الأمام. سيؤدي ذلك إلى سحب الخصية من كيس الصفن. بمجرد أن تصبح مرئية ، قم بقص المرفقات بكيس الصفن والأسهر لتحرير هذه الهياكل من الجسم.
بعد ذلك ، دعنا نتعلم كيفية حصاد الأعضاء الصدرية ، مثل القلب والرئتين. يمكن إزالة القلب والرئتين معا بسهولة. لفتح التجويف الصدري ، ابدأ بوضع في الاستلقاء الظهري. أولا ، أمسك عملية الخنجري وارفعها. ثم قم بعمل قطع في عضلة البطن فقط الذيلية إلى الأضلاع. قم بتمديد القطع على طول المنحنى السفلي للقفص الصدري على كلا الجانبين ، مع تعريض الحجاب الحاجز.
بعد ذلك ، قم بثقب الحجاب الحاجز عن طريق عمل قطع صغير في القفص الصدري عند أقصى نقطة جانبية ممكنة على كل جانب. ثم اقطع الحجاب الحاجز بعيدا عن الأضلاع. الآن ارفع الأضلاع عند الخنجري لتصور الأعضاء الصدرية قم بتمديد القطع الجانبي إلى الجزء العلوي من القص على كلا الجانبين لفتح الصدر. ثم ضع الملقط بشكل عمودي على القصبة الهوائية وامسك القصبة الهوائية بإحكام. الآن ، باستخدام المقص ، قم بعمل قطع عمودي أمام الملقط. يجب أن يقطع هذا القصبة الهوائية والمريء. دون فك قبضة القصبة الهوائية ، ارفعها ذيليا وقص أي ملحقات للرئتين على سطح العمود الفقري في القفص الصدري. استمر حتى تتمكن من رفع القلب والرئتين من تجويف الصدر.
لإزالة القلب فقط ، ارفع العضو واقطع كيس التامور بعناية. بعد ذلك ، أمسك الشريان الأورطي بالملقط وقم بعمل قطع بعيد عن الملقط. ثم قطع الوريد الأجوف الأمامي والشرايين الرئوية والأوردة. بعد ذلك ، يجب أن تكون قادرا على رفع القلب من التجويف الصدري.
الآن ، دعنا نراجع إجراء حصاد الدماغ باستخدام تقنية التعقيم. في الحالات التي يكون فيها الدماغ هو العضو الوحيد الذي يتم جمعه ، تكون خطوات التحضير هي نفسها.
لبدء الحصاد ، قم بتشبع الجسم بالكحول ، وقم بتجريد الجلد من الجسم كما كان من قبل – لأعلى وفوق الجمجمة. هذا يسمح لكل شيء بأن يكون معقما من هذه النقطة فصاعدا. بعد ذلك ، قم بتشبع مرة أخرى بالكحول ، وقم بإزالة القفازات الخارجية وتخلص من الأدوات المستخدمة على الجلد. الآن قم بعمل قطع في مؤخرة العنق وقم بتمديده على طول خط الوسط من منطقة عنق الرحم الظهرية إلى طرف الأنف.
الآن ، باستخدام زوج مخصص من مقص حصاد الدماغ المعقم ، قم بعمل قطع في العمود الفقري عند قاعدة الجمجمة. لفتح الجمجمة ، ضع نقطة المقص في الثقبة الماغنوم واقطعها على طول خط الوسط. لاحظ أنه خلال إجراء حصاد الدماغ هذا ، تعتبر إحدى اليدين غير معقمة لأنها تمسك الجلد من الجمجمة المنعكسة أسفل الذقن لتثبيت الرأس ، بينما يتم استخدام اليد المعقمة لقطع الجمجمة. بعد ذلك ، استخدم الحافة المسطحة لشفرة المقص لرفع العظام الجدارية بعيدا عن الدماغ. وباستخدام الملعقة ، قم بتعطيل الملحقات العصبية بعناية في جذع الدماغ والتصلب البصري تحت الدماغ. أخيرا ، حرك الملقط المغلق للأمام وكسر المرفقات في المصابيح الشمية. ويمكن بعد ذلك إسقاط الدماغ من الجمجمة مباشرة إلى الوسط المعقم.
الآن بعد أن راجعنا أساسيات حصاد الأنسجة المعقمة ، دعنا نناقش بعض الاستخدامات العديدة لهذا الإجراء في البحوث الطبية الحيوية.
يستخدم باحثو الجذع العصبي تقنية الحصاد المعقم لاستخراج الأنسجة من دماغ الفئران حديثي الولادة ، لتنمية هذه الخلايا في المختبر . هذا يسمح لهم بدراسة دور الخلايا الجذعية العصبية في التطور وتطور السرطان.
مجال آخر نشط للبحث يتضمن حصاد الأنسجة هو التنميط الأيضي ، والذي يتضمن دراسة فسيولوجيا الأنسجة من خلال تحليل المستقلبات المختلفة في العينة. في هذا المثال ، قام العلماء ، باستخدام تقنية التعقيم ، بجمع خزعات الكبد من الفئران البرية والخالية من الجراثيم واستخدموا التحليل الطيفي بالرنين المغناطيسي النووي ، أو الرنين المغناطيسي النووي ، لتوضيح الاختلاف في المظهر الأيضي للكبد بين مجموعتين من.
أخيرا ، غالبا ما يقوم علماء المناعة بحصاد الأنسجة المعقمة لدراسة انتشار العدوى. في هذه التجربة بالذات ، أجرى الباحثون حقنة بكتيريا الزائفة الزنجارية للحث على عدوى الرئة المزمنة. بعد ذلك ، تم القتل الرحيم للحيوانات واستخلاص الرئتين باستخدام تقنية معقمة لتحديد الحمل البكتيري بعد 3 و 7 و 14 و 28 يوما بعد الإصابة.
لقد شاهدت للتو فيديو JoVE حول حصاد الأنسجة من المختبر باستخدام تقنية التعقيم. يجب أن يكون لديك الآن إحساس أفضل بالخطوات التي تحتاج إلى اتخاذها لضمان الحفاظ على العقم طوال فترة الحصاد. ويجب أن تكون قادرا على استخراج أعضاء البطن والصدر والأدمغة من هذه دون التسبب في أي ضرر للأنسجة. كما هو الحال دائما ، شكرا على المشاهدة!
Although many of the procedures for sterile organ harvest are similar to a standard necropsy, the use of sterile technique is imperative for tissues to be of value for experimental procedures, which include harvesting cells from the excised tissues. Profiling or collecting RNA from tissues can be compromised if sterility is not maintained.
تتطلب العديد من التجارب جمع الخلايا من الأنسجة المستقاصة. في مثل هذه الحالات ، من الضروري إجراء عملية حصاد الأنسجة بطريقة معقمة. يسمح استخدام خطوط الخلايا ومزارع الأنسجة التي تنشأ من الأبحاث بإجراء العديد من التجارب في المختبر ، مما يقلل بدوره من استخدام في البحث.
في هذا الفيديو ، سنناقش الطريقة المعقمة لحصاد الأعضاء المستخرجة بشكل شائع من المختبر. وسيتبع ذلك مراجعة قصيرة لبعض الأمثلة على التجارب التي تستخدم هذه التقنية المعقمة لتحقيق أهداف بحثية مختلفة.
لنبدأ بخطوات التحضير المطلوبة لضمان عقم المساحة والأدوات والأفراد أثناء حصاد الأنسجة الحيوانية.
يتم تنفيذ هذا الإجراء في غطاء التدفق الصفيحي. قبل العملية ، يجب أن تعمل مروحة غطاء المحرك لمدة 15 دقيقة على الأقل ويجب تطهير المنطقة بالكحول بنسبة 70٪. بعد ذلك ، ضع بعض المناشف الورقية في الغطاء وبللها بنسبة 70٪ من الإيثانول. بعد ذلك ، قم بتحميل المعدات المعقمة وتنظيمها حسب الترتيب الذي سيتم به استخدام كل أداة ، عادة من اليسار إلى اليمين. هذا يسمح بسير العمل بطريقة أحادية الاتجاه ، مما يمنع التلوث العرضي من جثة.
يوصى بوجود فني غير معقم لمساعدة الفني المعقم. يجب على كلا المشغلين ارتداء قناع ومنتفخ. يجب أن يرتدي الفني المعقم ثوبا معقما وزوجين من القفازات الجراحية المعقمة. لاحظ أن الثوب والقفازات يجب أن يغطيا الرسغين لمنع تساقط خلايا الجلد في تجويف الجسم المفتوح أو أطباق بتري أو الوسائط المعقمة.
يفتح الشخص غير المعقم حزمة الأدوات المعقمة دون لمس السطح الداخلي ، بحيث يمكن للشخص المعقم إزالة الأداة بشكل معقم. أخيرا ، يقوم الفني غير المعقم بالقتل الرحيم للحيوان ، ووضع الذبيحة على المناشف الورقية ونقعها بالكامل بنسبة 70٪ من الكحول ، حتى يتمكن الشخص المعقم من بدء الحصاد.
أولا ، سنراجع استخراج أعضاء البطن ، بما في ذلك الطحال والكبد والكلى والمبيضين والخصيتين.
باستخدام مجموعة من المقصات والملقط المعقم ، قم بعمل قطع أفقي في الجلد أمام القلفة عند الذكور وعظم الحوض عند الإناث. تجنب قطع عضلات البطن. بعد ذلك ، ضع إبهامك تحت القطع وامسك حافة الجمجمة للقطع. باستخدام اليد الأخرى ، أمسك الأطراف الخلفية والذيل بإحكام ، مع سحب الجلد نحو الرأس. سوف يتمزق الجلد بعيدا عن الجسم فوق الأطراف الخلفية مباشرة ، ويمكن قلبه من الداخل إلى الخارج فوق الرأس والساقين الأمامية. هذا يزيل بشكل فعال ملوثات الشعر التي قد تتداخل مع حصاد الأعضاء المعقمة. ثم انقع الجسم مرة أخرى بنسبة 70٪ من الكحول وقم بإزالة القفازات السطحية التي لم تعد معقمة. تخلص أيضا من جميع الأدوات التي تم استخدامها على الجلد.
لحصاد الطحال ، ضع الجسم في الاستلقاء الجانبي الأيمن. يجب أن يكون الطحال مرئيا من خلال عضلة البطن. استخدم المقص لعمل قطع مباشرة فوق الطحال ، وسحب العضو برفق من تجويف الجسم. قم بقص جميع المرفقات بين الطحال والمعدة وأنسجة البنكرياس ، ولكن تجنب ثقب العضو أو تمزيقه.
لحصاد جميع أعضاء البطن الأخرى ، ضع الجسم في الاستلقاء الظهري. بعد ذلك ، ارفع عضلة البطن واقطعها تاركة فتحة بيضاوية مباشرة فوق تجويف البطن. لحصاد الكبد ، اعكس العضو ذيليا بعيدا عن الحجاب الحاجز. استخدم الآن المقص لقطع أي أغشية بين الهيكلين بعناية. بعد ذلك ، قم بعمل قطع عمودي على العمود الفقري من خلال الأوعية الدموية. ثم ارفع الكبد وعكسه باتجاه الحجاب الحاجز لتصور المرفقات الموجودة تحته. ستكون هناك أغشية رقيقة تربط فصوص الكبد الأصغر بالمعدة والأمعاء الدقيقة. أمسك العقدة الليفية في وسط الكبد على الجانب السفلي وارفع العضو للعثور على جميع المرفقات. الآن افصل العضو عن الأنسجة الأساسية. لاحظ أن الكبد هش ويمكن ثقبه بسهولة مما يؤدي إلى الإفراط في إطلاق الدم. لذلك ، يجب التعامل معها بعناية.
لحصاد الكلى ، ادفع الأمعاء إلى اليسار لكشف الكلية اليمنى أو إلى اليمين لكشف الكلية اليسرى. استخدم الآن شفرات الملقط للإمساك بها تحت الكلى واستخدام المقص المقطوع تحت الملقط ، وإزالة العضو من الجسم.
لحصاد المبيضين ، حرك الأمعاء في الجمجمة لتصور الرحم. اتبع قرني الرحم الأيمن والأيسر إلى المبايض. هذه أعضاء صغيرة وفي الأكبر سنا قد تكون مغروسة في الدهون. حرك الملقط تحت المبيض لعزله عن الجسم وقطعه من الدهون وقناة فالوب.
في الذكور ، لإزالة الخصيتين ، أمسك بلطف وسادة الدهون الأربية واسحب إلى الأمام. سيؤدي ذلك إلى سحب الخصية من كيس الصفن. بمجرد أن تصبح مرئية ، قم بقص المرفقات بكيس الصفن والأسهر لتحرير هذه الهياكل من الجسم.
بعد ذلك ، دعنا نتعلم كيفية حصاد الأعضاء الصدرية ، مثل القلب والرئتين. يمكن إزالة القلب والرئتين معا بسهولة. لفتح التجويف الصدري ، ابدأ بوضع في الاستلقاء الظهري. أولا ، أمسك عملية الخنجري وارفعها. ثم قم بعمل قطع في عضلة البطن فقط الذيلية إلى الأضلاع. قم بتمديد القطع على طول المنحنى السفلي للقفص الصدري على كلا الجانبين ، مع تعريض الحجاب الحاجز.
بعد ذلك ، قم بثقب الحجاب الحاجز عن طريق عمل قطع صغير في القفص الصدري عند أقصى نقطة جانبية ممكنة على كل جانب. ثم اقطع الحجاب الحاجز بعيدا عن الأضلاع. الآن ارفع الأضلاع عند الخنجري لتصور الأعضاء الصدرية قم بتمديد القطع الجانبي إلى الجزء العلوي من القص على كلا الجانبين لفتح الصدر. ثم ضع الملقط بشكل عمودي على القصبة الهوائية وامسك القصبة الهوائية بإحكام. الآن ، باستخدام المقص ، قم بعمل قطع عمودي أمام الملقط. يجب أن يقطع هذا القصبة الهوائية والمريء. دون فك قبضة القصبة الهوائية ، ارفعها ذيليا وقص أي ملحقات للرئتين على سطح العمود الفقري في القفص الصدري. استمر حتى تتمكن من رفع القلب والرئتين من تجويف الصدر.
لإزالة القلب فقط ، ارفع العضو واقطع كيس التامور بعناية. بعد ذلك ، أمسك الشريان الأورطي بالملقط وقم بعمل قطع بعيد عن الملقط. ثم قطع الوريد الأجوف الأمامي والشرايين الرئوية والأوردة. بعد ذلك ، يجب أن تكون قادرا على رفع القلب من التجويف الصدري.
الآن ، دعنا نراجع إجراء حصاد الدماغ باستخدام تقنية التعقيم. في الحالات التي يكون فيها الدماغ هو العضو الوحيد الذي يتم جمعه ، تكون خطوات التحضير هي نفسها.
لبدء الحصاد ، قم بتشبع الجسم بالكحول ، وقم بتجريد الجلد من الجسم كما كان من قبل – لأعلى وفوق الجمجمة. هذا يسمح لكل شيء بأن يكون معقما من هذه النقطة فصاعدا. بعد ذلك ، قم بتشبع مرة أخرى بالكحول ، وقم بإزالة القفازات الخارجية وتخلص من الأدوات المستخدمة على الجلد. الآن قم بعمل قطع في مؤخرة العنق وقم بتمديده على طول خط الوسط من منطقة عنق الرحم الظهرية إلى طرف الأنف.
الآن ، باستخدام زوج مخصص من مقص حصاد الدماغ المعقم ، قم بعمل قطع في العمود الفقري عند قاعدة الجمجمة. لفتح الجمجمة ، ضع نقطة المقص في الثقبة الماغنوم واقطعها على طول خط الوسط. لاحظ أنه خلال إجراء حصاد الدماغ هذا ، تعتبر إحدى اليدين غير معقمة لأنها تمسك الجلد من الجمجمة المنعكسة أسفل الذقن لتثبيت الرأس ، بينما يتم استخدام اليد المعقمة لقطع الجمجمة. بعد ذلك ، استخدم الحافة المسطحة لشفرة المقص لرفع العظام الجدارية بعيدا عن الدماغ. وباستخدام الملعقة ، قم بتعطيل الملحقات العصبية بعناية في جذع الدماغ والتصلب البصري تحت الدماغ. أخيرا ، حرك الملقط المغلق للأمام وكسر المرفقات في المصابيح الشمية. ويمكن بعد ذلك إسقاط الدماغ من الجمجمة مباشرة إلى الوسط المعقم.
الآن بعد أن راجعنا أساسيات حصاد الأنسجة المعقمة ، دعنا نناقش بعض الاستخدامات العديدة لهذا الإجراء في البحوث الطبية الحيوية.
يستخدم باحثو الجذع العصبي تقنية الحصاد المعقمة لاستخراج الأنسجة من دماغ الفئران حديثي الولادة ، لتنمية هذه الخلايا في المختبر. هذا يسمح لهم بدراسة دور الخلايا الجذعية العصبية في التطور وتطور السرطان.
مجال آخر نشط للبحث يتضمن حصاد الأنسجة هو التنميط الأيضي ، والذي يتضمن دراسة فسيولوجيا الأنسجة من خلال تحليل المستقلبات المختلفة في العينة. في هذا المثال ، قام العلماء ، باستخدام تقنية التعقيم ، بجمع خزعات الكبد من الفئران البرية والخالية من الجراثيم واستخدموا التحليل الطيفي بالرنين المغناطيسي النووي ، أو الرنين المغناطيسي النووي ، لتوضيح الاختلاف في المظهر الأيضي للكبد بين مجموعتين من.
أخيرا ، غالبا ما يقوم علماء المناعة بحصاد الأنسجة المعقمة لدراسة انتشار العدوى. في هذه التجربة بالذات ، أجرى الباحثون حقنة البكتيريا الزنجارية في القصبة الهوائية للحث على عدوى الرئة المزمنة. بعد ذلك ، تم القتل الرحيم للحيوانات واستخلاص الرئتين باستخدام تقنية معقمة لتحديد الحمل البكتيري بعد 3 و 7 و 14 و 28 يوما بعد الإصابة.
لقد شاهدت للتو فيديو JoVE حول حصاد الأنسجة من المختبر باستخدام تقنية التعقيم. يجب أن يكون لديك الآن إحساس أفضل بالخطوات التي تحتاج إلى اتخاذها لضمان الحفاظ على العقم طوال فترة الحصاد. ويجب أن تكون قادرا على استخراج أعضاء البطن والصدر والأدمغة من هذه دون التسبب في أي ضرر للأنسجة. كما هو الحال دائما ، شكرا على المشاهدة!
Related Videos
Lab Animal Research
177.9K المشاهدات
Lab Animal Research
28.4K المشاهدات
Lab Animal Research
36.2K المشاهدات
Lab Animal Research
55.6K المشاهدات
Lab Animal Research
26.0K المشاهدات
Lab Animal Research
102.5K المشاهدات
Lab Animal Research
35.6K المشاهدات
Lab Animal Research
32.1K المشاهدات
Lab Animal Research
52.8K المشاهدات
Lab Animal Research
174.3K المشاهدات
Lab Animal Research
74.8K المشاهدات
Lab Animal Research
52.1K المشاهدات
Lab Animal Research
22.8K المشاهدات
Lab Animal Research
59.8K المشاهدات
Lab Animal Research
35.2K المشاهدات