What is the ELISPOT assay and how does it detect immune responses?

ELISPOT (Enzyme-linked Immunospot) is a method that detects and quantifies immune cell activation by measuring secreted proteins like cytokines. The assay uses a microplate coated with capture antibodies that immediately immobilize proteins secreted by live cells, preventing dilution or degradation. This high-accuracy approach allows detection of single activated cells, even within small subpopulations, making it ideal for studying cellular-level immune responses.

How does the capture and detection process work in a cytokine-based ELISPOT assay?

A capture antibody specific to the target cytokine coats the microplate wells. When T-cells are stimulated and secrete cytokines, the capture antibody immediately immobilizes them. A biotinylated detection antibody then binds to the captured cytokine, followed by streptavidin-conjugated horseradish peroxidase. Adding the AEC substrate produces a dark precipitate marking each secretory cell as a visible spot.

Can ELISPOT be used to measure antibody-secreting B cells?

Yes, ELISPOT can quantify memory B-cells after infection or vaccination by analyzing their antibody production. In antibody-based ELISPOT, a specific antigen replaces the antibody in either the capture or detection step. This variation allows researchers to assess antigen-specific memory B-cell responses, which are important for rapid protective antibody responses following pathogen re-exposure.

What is the purpose of serial dilution in the ELISPOT protocol?

Serial dilution creates decreasing cell concentrations across the plate wells, allowing researchers to establish a dose-response relationship. By plating cells at multiple concentrations and observing how spot numbers decrease with lower cell density, scientists can determine the frequency of activated cells within the total population and validate assay linearity.

Why is blocking with cell culture medium an important step in ELISPOT?

After coating the plate with capture antibody, blocking with cell culture medium prevents non-specific binding of cells and proteins to the plate surface. This step ensures that only the target cytokine captured by the specific antibody contributes to spot formation, improving assay specificity and reducing background noise during the detection phase.

How are ELISPOT spots counted and what do they represent?

After the AEC substrate produces dark precipitate spots, an automated plate reader or microscope counts them. Each spot represents one activated secretory cell, and spot size correlates with the amount of protein secreted from that cell. Results are typically expressed as spot counts per number of cells plated, indicating the frequency of activated cells within the population.

What are the key advantages of ELISPOT compared to other immune detection methods?

ELISPOT offers simplicity with straightforward protocols requiring minimal technical expertise, exceptional sensitivity detecting single cells among 300,000 cells, and quantitative functionality data on immune responses. Unlike flow cytometry, ELISPOT requires very few cells and provides direct enumeration of protein-secreting cells, making it a gold standard for measuring antigen-specific T cell immunity in clinical trials.

فحص ELISPOT: الكشف عن إفراز IFN-γ لخلايا الطحال

0 مشاهدة11:53 دقيقة

1. الإعداد

المخازن المؤقتة والكواشف

محلول ملحي معقم مخزن بالفوسفات (PBS) بدون كالسيوم أو مغنيسيوم
عازلة الطلاء - إما PBS معقم أو عازلة كربونات
مخفف الفحص - مصل بقري جنين 10٪ (FBS) في PBS
وسط زراعة الخلايا - RPMI 1640 مع 10٪ FBS ، البنسلين / الستربتومايسين ، و L-الجلوتامين
المخزن المؤقت للغسيل - PBS يحتوي على 0.05٪ Tween20
الماء المقطر المزدوج (ddH₂O)
ركيزة الكشف - 100 مجم AEC (3-أمينو-9-إيثيل كاربازول) في 10 مل DMF (N ، N ، ثنائي ميثيل فورماميد).

< p class = "jove_content" > المعدات

غطاء التدفق الصفحي
حاضنة مرطب (ضبط عند 37 درجة مئوية ، 5٪ ثاني أكسيد_{الكربون 2})
قارئ ELISPOT الآلي أو مجهر تشريح

المواد

لوحات ELISPOT
خزانات معقمة وغير معقمة
الماصات والنصائح
الماصات المصلية المعقمة
أنابيب بولي بروبلين معقمة ومخروطية
زجاجتان للضغط لغسل الأطباق

كواشف فحص محددة

الخلايا- الخلايا الأولية أو خطوط الخلايا (هنا ، تم استخدام خلايا الطحال من الفئران C57BL / 6)
المنشطات - ميتوجين أو مستضد (هنا ، تم استخدام فوربول 12-ميريستات 13-أسيتات (PMA ، 50 نانوغرام / مل) والأيونومايسين (1 ميكرومتر)
الجسم المضاد الأساسي- الجسم المضاد للكشف عن السيتوكين المضاد للبيوتينيل (مخفف إلى 2 ميكروغرام / مل في مخفف الفحص)
الأجسام المضادة الثانوية - ستربتافيدين - بيروكسيداز الفجل (SAv-HRP)

< p class = "jove_title" >2. الإجراء

فئة

طلاء

مع الحفاظ على الظروف معقمة وداخل غطاء التدفق الرقائقي ، قم بتخفيف الجسم المضاد المضاد للسيتوكين المنقى إلى تركيز نهائي من 0.5-4.0 ميكروغرام / مل في مخزن مؤقت للطلاء المعقم. (ملاحظة: بالنسبة ل IFN- γ و IL-6 ، استخدم 5 ميكروغرام / مل).
انقل محلول الأجسام المضادة الملتقطة ، 100 ميكرولتر / بئر ، إلى لوحة ELISPOT.
قم بتغطية اللوحة بغطاء لوحة وأغلقها لمنع التبخر.
احتضن الطبق طوال الليل عند 4 درجات مئوية.

Blocking

في اليوم التالي ، اكشف الغطاء عن لوحة ELISPOT في غطاء التدفق الرقائقي. اقلب اللوحة بسرعة على مناديل معقمة لإزالة محلول الأجسام المضادة الملتقطة من كل بئر.
ثم أضف 200 ميكرولتر من وسط زراعة الخلايا إلى كل بئر. ستؤدي هذه الخطوة إلى منع الربط غير المحدد أثناء الفحص.
استبدل غطاء اللوحة واحتضان اللوحة لمدة ساعتين عند 37 درجة مئوية.

طلاء وتنشيط الخلايا

أثناء احتضان اللوحة ، قم بإعداد محلول ميتوجين 2X يحتوي على 50 نانوغرام / مل PMA و 1 ميكرومتر من الأيونوميسين في وسط زراعة الخلايا.
بعد ذلك ، قم بإعداد المعلقات الخلوية المستهدفة بتركيز مخزون 2 × 10⁶ خلايا / مل.
بعد اكتمال الحضانة ، قم بإزالة وسط زراعة الخلايا من كل بئر عن طريق قلب اللوحة بسرعة على مناديل معقمة داخل غطاء التدفق الرقائقي.
بعد ذلك ، قم بإنشاء تخفيف تسلسلي 2X لمحلول تعليق خلية المخزون. للقيام بذلك ، أضف أولا 200 ميكرولتر من محلول مخزون التعليق الخلوي المحضر إلى الآبار الموجودة في الصف العلوي من لوحة ELISPOT.
ثم أضف 100 ميكرولتر من وسط زراعة الخلية العادية إلى الصفوف الخمسة التالية من اللوحة أسفل الصفوف التي تحتوي على محلول مخزون خلوي.
بعد ذلك ، قم بإجراء تخفيف تسلسلي 2X عن طريق سحب 100 ميكرولتر من التعليق الخلوي من الصف العلوي إلى الصف أدناه مباشرة. تأكد من الخلط الصحيح عن طريق سحب هذا المحلول برفق لأعلى ولأسفل لضمان توزيع الخلايا بشكل متساو.
كرر هذه العملية للصفوف الأربعة المتبقية.
اترك الصف السادس مع وسيط الثقافة فقط. سيكون بمثابة تحكم تجريبي.
بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من محلول الميتوجين المحضر إلى الآبار التجريبية للصفوف الخمسة الأولى من اللوحة. في آبار التحكم والصف السادس ، أضف 100 ميكرولتر من وسط زراعة الخلية بدون الميتوجين.
استبدل غطاء اللوحة واحتضان اللوحة عند 37 درجة مئوية ، 5٪ ثاني أكسيد الكربون₂ في حاضنة لمدة 20-48 ساعة. (ملاحظة: عادة ما تكون 20-24 ساعة كافية للكشف عن IL-2 و TNF- α ، في حين أن 48 ساعة هي الأمثل ل IL-4 و IFN-γ).

الكشف

الجسم المضاد الأساسي

تحضير الجسم المضاد للكشف عن السيتوكين المضاد للبيوتينيل بتركيز 2 ميكروغرام / مل في مخفف الفحص.
قم بإعداد 20-25 مل من مخزن الغسيل المؤقت في هذا الوقت عن طريق خلط 0.05٪ Tween-20 في PBS.
بعد اكتمال الحضانة ، قم بفك غطاء اللوحة واقلبها بسرعة فوق الحوض لإزالة كل السوائل من الآبار. (ملاحظة: بعد هذه النقطة ، لم يعد من الضروري أن تظل اللوحة معقمة).
بعد ذلك ، اغسل الطبق بإضافة ~ 200 ميكرولتر من محلول الغسيل إلى كل بئر. طرد هذا السائل عن طريق قلب اللوحة بسرعة ونقرها فوق الحوض. كرر هذه العملية لما مجموعه خمس غسلات.
بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من محلول الأجسام المضادة للكشف عن السيتوكين المخفف إلى كل بئر. احتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة أو طوال الليل عند 4 درجات مئوية.

الجسم المضاد الثانوي

بعد اكتمال الحضانة ، قم بطرد الجسم المضاد للكشف عن طريق قلب اللوحة ونقرها فوق الحوض.
كما كان من قبل ، اغسل الطبق 5 مرات باستخدام ~ 200 ميكرولتر عازلة غسيل ، وطرد السائل بين كل غسلة.
بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من محلول الستربتافيدين والفجل المخفف بيروكسيداز إلى كل بئر (مخفف إلى تركيزه الأمثل المحدد مسبقا في مخفف الفحص).
استبدل غطاء اللوحة واحتضنه في درجة حرارة الغرفة لمدة 1.5-2 ساعة عند 37 درجة مئوية.

فئة

الركيزة

بعد الحضانة ، قبل الاستخدام بأكثر من 15 دقيقة ، قم أولا بتنشيط محلول الركيزة AEC وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
بعد ذلك ، تخلص من محتويات الآبار واغسل الطبق خمس مرات باستخدام عازلة الغسيل ، كما كان من قبل.
بعد ذلك ، أضف على الفور 100 ميكرولتر من محلول الركيزة AEC المحضر إلى كل بئر.
احتضان اللوحة في درجة حرارة الغرفة لمدة ~ 10-20 دقيقة أثناء مراقبة تطور البقعة.
أوقف رد الفعل عن طريق شطف اللوحة بالماء ونفض اللوحة فوق الحوض.
امسح الطبق على مناشف ورقية واترك الطبق يجف في الهواء طوال الليل أو حتى يجف تماما. ستؤدي إزالة الصينية البلاستيكية الموجودة أسفل اللوحة إلى تسهيل التجفيف.

< p class = "jove_title" >3. الحصول على البيانات وتحليلها

بعد التجفيف ، تكون البقع جاهزة للعد باستخدام قارئ لوحة آلي. هنا ، يتم استخدام قارئ CTL Immunospot ، ولكن يمكن تكييف هذا البروتوكول لأي قارئ.
قم أولا بتشغيل الأداة ، ثم الكمبيوتر. ثم افتح برنامج CTL وانقر على "فحص العد".
اضغط على "إخراج" حتى يمتد الدرج من الماكينة. بعد ذلك ، قم بإزالة المحول البلاستيكي وقم بمحاذاة الصف "A" على لوحة ومحول ELISPOT.
اختر اسم الملف وموقعا للملف المراد حفظه وقم بتحميل اللوحة على الدرج.
ثم انقر فوق "تحميل" على البرنامج وأغلق الباب على جانب الجهاز.
اضغط على "ابدأ- بعد العد". تأكد من حفظ الملف ، ثم افتح برنامج مراقبة الجودة "QC" لتحليل البيانات وحساب عدد المواقع.

ملاحظات:

< نوع = "أ">

يجب تحديد الحد الأدنى لعدد الخلايا في التجارب الأولية. العدد الأمثل للبقع هو ~ 50 / بئر. إذا تم تحميل عدد كبير جدا من الخلايا ، فسيكون من الصعب اكتشاف البقع المميزة. بالإضافة إلى ذلك ، سوف تتداخل الخلايا وقد لا تشكل طبقة أحادية على الغشاء ، وبالتالي قد ينخفض مستوى الكشف.

عند تحسين التجربة ، ضع في اعتبارك مستوى التعبير المتوقع للبروتين المستهدف. كلما انخفض التعبير ، زاد عدد الخلايا المطلوبة لكل بئر.

على عكس ELISA ، من الأفضل غسل اللوحة يدويا بدلا من استخدام غسالة اللوحة. تعتبر ألواح ELISPOT أكثر حساسية ويجب على المرء تجنب ثقب غشاء PVDF.

يجب على المرء أن يحد من حركة اللوحة خلال فترة الحضانة لأنها يمكن أن تتسبب في تلطخ البقع.

يجب تخزين الألواح في الظلام ، لأن التعرض للضوء المباشر يؤدي إلى تلاشي البقع.

اختبار البقعة المناعية المرتبطة بالإنزيم ، أو ELISPOT ، هي طريقة لتحليل الاستجابة المناعية لمسببات الأمراض أو تلف الخلايا. يسمح بالقياس الكمي لتنشيط الخلايا المناعية المختلفة عن طريق الكشف عن بروتينات معينة تفرزها. على سبيل المثال ، يستخدم ELISPOT بشكل شائع لقياس استجابات الخلايا التائية عند التعرض لمستضد غريب عن طريق الكشف عن السيتوكينات المفرزة.

بالنسبة لمقايسة ELISPOT المستندة إلى السيتوكين ، تبدأ العملية بطلاء صفيحة ELISPOT المجهرية بجسم مضاد ملتقط ، وهو خاص بالسيتوكين المستهدف. بعد طلاء الجسم المضاد ، تتم إضافة الخلايا التائية إلى الآبار وتحفيزها بواسطة عامل خارجي ، مثل الجسم المضاد ل CD3 ، على سبيل المثال. ثم تفرز الخلايا السيتوكين المستهدف ، والذي يتم تجميدها على الفور بواسطة الجسم المضاد الملتقط. نظرا لأن البروتين يتم التقاطه على الفور بعد الإفراز من الخلايا الحية ، دون تخفيف أو تدهور ، فإن هذا الاختبار له دقة عالية. بعد تجميد السيتوكين المستهدف ، تتم إضافة جسم مضاد للكشف ، والذي يرتبط أيضا بالسيتوكين الملتقط.

يمكن أيضا استخدام تقنية ELISPOT لتحديد خلايا الذاكرة البائية بعد الإصابة أو التطعيم عن طريق تحليل إنتاجها لأجسام مضادة محددة. في ELISPOT القائم على الأجسام المضادة ، يتم استخدام مستضد معين بدلا من الجسم المضاد إما لخطوة الالتقاط ، حيث سيتم ربط المستضد باللوحة ، أو في خطوة الكشف ، حيث يكتشف المستضد الجسم المضاد المستهدف بعد التقاط. في جميع أشكال العملية ، بالنسبة للخلايا التائية أو الخلايا البائية ، يتم إيوتينيل الجسم المضاد أو المستضد للكشف ، مما يسمح له بالارتباط بإنزيم الكشف المترافق مع الستربتافيدين ، مثل بيروكسيداز الفجل. بعد ذلك ، عند إضافة ركيزة البيروكسيديز ، AEC ، يتم إنتاج راسب داكن غير قابل للذوبان. يشير هذا الراسب إلى موقع البروتين الملتقط ، وينتج عن كل خلية إفرازية بقعة مرئية ، والتي يمكن قياسها كميا باستخدام قارئ ELISPOT أو المجهر. حجم البقع هو تقدير نسبي لكمية البروتين التي تفرز من كل خلية. يمكن لهذا الاختبار اكتشاف الاستجابات المناعية من الخلايا المفردة ، حتى في مجموعات سكانية صغيرة نسبيا من الخلايا الإفرازية ، مما يجعله مفيدا لدراسة الاستجابات المناعية على المستوى الخلوي.

في هذا الفيديو ، سوف تتعلم كيفية إجراء اختبار ELISPOT ثم تحديد البقع التي تمثل الخلايا الإفرازية.

طوال التجربة ، تأكد من ظروف معقمة من خلال العمل في غطاء التدفق الصفحي وارتداء القفازات.

تستند جميع الحسابات في هذا البروتوكول إلى الحجم المطلوب للوحة واحدة مكونة من 96 بئرا.

أولا ، قم بتخفيف الجسم المضاد لالتقاط السيتوكين. للقيام بذلك ، قم بنقل 10 ملليلتر من العازلة إلى أنبوب مخروطي معقم سعة 15 مل. بعد ذلك، استخدم ماصة لإضافة 10 ميكرولتر من ملليغرام واحد لكل مليلتر من الجسم المضاد أحادي النسيلة إلى المخزن المؤقت لإنشاء محلول بتركيز نهائي قدره ميكروغرام واحد لكل مليلتر. بعد ذلك ، اسكب محلول الأجسام المضادة الملتقطة في خزان معقم ، وباستخدام ماصة متعددة القنوات ، وزع 100 ميكرولتر في كل بئر من لوحة ELISPOT المكونة من 96 بئرا.

قم بتغطية اللوحة بغطاء لوحة ، وأغلقها لمنع التبخر ، واحتضانها طوال الليل عند أربع درجات مئوية. في اليوم التالي ، اكشف الغطاء عن لوحة ELISPOT في غطاء التدفق الرقائقي. اقلب اللوحة بسرعة على مناديل معقمة لإزالة محلول الأجسام المضادة الملتقطة من كل بئر. بعد ذلك ، استخدم ماصة متعددة القنوات لإضافة 200 ميكرولتر من وسط زراعة الخلايا إلى كل بئر. ستؤدي هذه الخطوة إلى منع الربط غير المحدد أثناء الفحص. استبدل غطاء اللوحة واحتضنه في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة ساعتين.

أثناء احتضان اللوحة ، قم بإعداد محلول ميتوجين 2X عن طريق إضافة ميكرولتر واحد من PMA و 20 ميكرولترا من الأيونوميسين إلى 10 مل من وسط زراعة الخلايا لتحقيق تركيز نهائي يبلغ 15 نانوغرام لكل مليلتر PMA وأيونوميسين ميكرومولار.

يجب أيضا تحضير المعلقات الخلوية لخلايا الطحال في الفئران في هذا الوقت في غطاء معقم. باستخدام المجهر ومقياس الدم ، قم بقياس تركيز الخلايا وضبط الحجم الكلي حتى يتم الوصول إلى تركيز مخزون يبلغ مليوني خلية لكل مليلتر.

بعد اكتمال الحضانة ، اقلب اللوحة بسرعة على مناديل معقمة لإزالة وسط زراعة الخلايا من كل بئر. بعد ذلك ، أضف 200 ميكرولتر من محلول مخزون التعليق الخلوي المحضر إلى الآبار الموجودة في الصف العلوي من لوحة ELISPOT. قم بإعداد التجربة في ثلاث نسخ ، بحيث يتم طلاء كل نوع خلية تم اختباره في مجموعة من ثلاثة أعمدة مجمعة. تحت هذا ، أضف 100 ميكرولتر من وسط زراعة الخلايا العادية إلى الصفوف الخمسة التالية من اللوحة ، أسفل الصفوف التي تحتوي على محلول مخزون خلوي.

بعد ذلك ، قم بإجراء تخفيف تسلسلي عن طريق سحب 100 ميكرولتر من تعليق الخلية من الصف العلوي إلى الصف السفلي مباشرة ، مع سحب المحلول برفق لأعلى ولأسفل لتوزيع الخلايا بالتساوي. كرر هذه العملية للصفوف المتبقية ، مع تحريك 100 ميكرولتر من الصف السابق إلى الصف أدناه في كل خطوة ، واستمر حتى يتم تخفيف الصف الخامس بشكل متسلسل. اترك الصف السادس مع وسط زراعة الخلايا فقط ، ليكون بمثابة عنصر تحكم. لتحفيز الخلايا في الآبار التجريبية للوحة ، أضف 100 ميكرولتر من محلول الميتوجين المحضر إلى المعلقات الخلوية في كل بئر من الصفوف من واحد إلى خمسة. تأكد من ترك الصف السادس ، الذي سيكون بمثابة عنصر تحكم ، دون تحفيز. استبدل الغطاء واحتضن اللوحة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 24 إلى 48 ساعة.

تحضير الجسم المضاد المخفف للكشف عن السيتوكين المضاد للسيتوكين. أولا ، قم بإعداد 50 مل من مخفف الفحص عن طريق إضافة 5 ملليلتر من مصل الأبقار الجنيني بنسبة 10٪ إلى 45 مل من PBS. بعد ذلك ، قم بتخفيف الجسم المضاد للكشف إلى تركيز 2 ميكروغرام لكل مليلتر في مخفف الفحص. أيضا ، قم بإعداد 20 إلى 25 مل من مخزن الغسيل المؤقت في هذا الوقت ، عن طريق خلط .05٪ Tween-20 و PBS.

بعد اكتمال الحضانة ، قم بفك غطاء اللوحة واقلبها بسرعة لإزالة كل السوائل من الآبار. اغسل الطبق بإضافة حوالي 200 ميكرولتر من محلول الغسيل إلى كل بئر. طرد هذا السائل عن طريق قلب اللوحة بسرعة ونقرها فوق الحوض. كرر هذه العملية أربع مرات أخرى ليصبح المجموع خمس غسلات. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من محلول الجسم المضاد المخفف للكشف إلى كل بئر ، واستبدل الغطاء ، واحتضنه في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين. بعد الحضانة ، قم بطرد محلول الجسم المضاد للكشف من آبار اللوحة عن طريق قلب اللوحة ونقرها فوق الحوض.

كما كان من قبل ، اغسل الطبق خمس مرات باستخدام عازلة الغسيل ، وطرد السائل بين كل غسلة. بعد الغسيل النهائي ، قم بإعداد محلول الستربتافيدين والفجل بيروكسيداز عن طريق تخفيفه وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. بعد ذلك ، مع إفراغ آبار اللوحة ، أضف 100 ميكرولتر من محلول الستربتافيدين المخفف - بيروكسيداز الفجل إلى كل بئر. ضع الغطاء مرة أخرى على الطبق واحتضنه في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين.

بعد الحضانة ، قبل الاستخدام بأكثر من 15 دقيقة ، قم بتنشيط محلول الركيزة AEC الجاهز. تخلص من محتويات الآبار واغسل الطبق خمس مرات بمحلول غسيل ، كما كان من قبل. بعد ذلك ، أضف على الفور 100 ميكرولتر من محلول الركيزة AEC المحضر في كل بئر. اترك اللوحة في درجة حرارة الغرفة لتتطور لمدة 10 إلى 20 دقيقة تقريبا ، مع مراقبة تطور البقعة. ستظهر هذه البقع على شكل دوائر صغيرة مظلمة على سطح الآبار. ثم أوقف التفاعل عن طريق شطف الطبق بالماء ونفضه فوق الحوض. امسح الطبق على مناشف ورقية واتركه يجف في الهواء طوال الليل أو حتى يجف تماما. ستؤدي إزالة الصينية البلاستيكية الموجودة أسفل اللوحة إلى تسهيل التجفيف. بعد التجفيف ، تكون البقع جاهزة للعد باستخدام قارئ لوحة آلي.

هنا ، يتم استخدام قارئ CTL ImmunoSpot ، ولكن يمكن تكييف هذا البروتوكول لأي قارئ. ثم افتح برنامج CTL وانقر على Scan Count. اضغط على الإخراج حتى يمتد الدرج من الماكينة. بعد ذلك ، قم بإزالة المحول البلاستيكي وقم بمحاذاة الصف A على لوحة ومحول ELISPOT. اختر اسم الملف وموقعه للملف المراد حفظه وقم بتحميل اللوحة والمحول على الدرج. انقر فوق تحميل على البرنامج وأغلق الباب الموجود على جانب الجهاز. ثم اضغط على ابدأ بعد العد. تأكد من حفظ الملف ثم افتح برنامج مراقبة الجودة لتحليل البيانات وحساب عدد المواقع. تصدير هذه البيانات كملف Excel. بمجرد اكتمال التحليل ، انقر فوق إخراج لاسترداد اللوحة.

في هذه التجربة ، تم طلاء الخلايا من الفئران البرية والحاملة للورم وتحليلها بحثا عن IFN gamma. لاحظ أن عدد البقع يتناقص مع انخفاض تركيز الخلايا. عادة ، يتم تقديم بيانات ELISPOT على أنها عدد الأعداد الموضعية لكل عدد من الخلايا المطلية. في هذا المثال ، تم عرض عدد البقع في رسم بياني شريطي ، مع إدراج كل تركيز خلوي على المحور x. لاحظ أن عدد البقع يشير إلى عدد الخلايا المنشطة لكل عدد إجمالي للخلايا في مجموعة سكانية معينة.

المصدر: تونيا ج. ويب¹
¹ قسم علم الأحياء الدقيقة والمناعة ، كلية الطب بجامعة ميريلاند ومركز مارلين وستيوارت جرينيباوم الشامل للسرطان ، بالتيمور ، ماريل…