Name: بوغ زقي zeae Gibberella الإنتاج والتحصيل للتجارب ميكروأري. (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 24 s
Description: استكشف عملية تطور الأبواغ الزقيّة في فطر Gibberella zeae باستخدام بروتوكول التجميع المعقم. يوفر هذا البروتوكول قابلية تكرار عالية للتجارب الميكروأرية وتحليل التعبير الجينومي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

المؤلفان بالشكر كارين Hilburn حصول على الدعم الفني الممتاز. وقد أيد هذا المشروع من قبل مبادرة القومي للبحوث التعاونية للدولة وزارة الزراعة الأميركية للتعليم والبحوث والإرشاد (جائزة 2004-35604-14327 #). معتمد من قبل ماتياس باسكوالي برانكو فايس الزمالة. ومن المسلم به أيضا الولايات المتحدة والقمح والشعير والجلبة مبادرة للدعم المتواصل من البحوث.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> آغار الجزرة (Klittich ويزلي ، 1988) وقد أعدت في 9 سم ، وقطرها أطباق بتري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم تطبيق مكعب من 2 ملم تحتوي على أجار أفطورة جديدة نمت على أجار دكستروز البطاطس الى وسط كل طبق بتري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقد نمت الثقافات عند 25 درجة مئوية والإضاءة 12 ساعة لمدة 96 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طبق واحد مل من توين مائي 2.5 ٪ من 60 إلى السطح من الثقافة (تريل والمشتركة عام 2000 ،) والمنتشرة في الثقافة بقضيب من البلاستيك ، عن طريق الضغط بلطف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Perithecia اطلاق النار ascospores المتقدمة 7-10 أيام بعد هذا العلاج التعريفي عندما أبقى في بيئة الرطوبة العالية في 25 درجة مئوية مع الإضاءة نفسها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تنفيذ جمع بوغ عن طريق تغيير غطاء صحن بيتري ، وترك perithecia لاطلاق النار لفترة محدودة (على سبيل المثال 12 ساعة) في الظلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يضاف الماء المعقم إلى غطاء ، وتعليق ascospores برفق عن طريق تحريك المياه على السطح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم جمع Ascospores في أنابيب معقمة الصقر ، وغسلها واستخدامها لمزيد من التحليل. </li></ol>

<ol><li>Beyer, M., Verreet, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germination+of+Gibberella+zeae+ascospores+as+affected+by+age+of+spores+after+discharge+and+environmental+factors%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Germination of Gibberella zeae ascospores as affected by age of spores after discharge and environmental factors.</a> , (2005).</li>
<li>Francl, L., Shaner, G., Bergstrom, G., Gilbert, J., Pedersen, W., Dill-Macky, R., Sweets, L., Corwin, B., Jin, Y., Gallenberg, D., Wiersma, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Daily+inoculum+levels+of+Gibberella+zeae+on+wheat+spikes.+Plant+Disease+83%2C662-666%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Daily inoculum levels of Gibberella zeae on wheat spikes. Plant Disease 83,662-666.</a> , (1999).</li>
<li>Goswami, R. S., Kistler, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heading+for+disaster%2C+Fusarium+graminearum+on+cereal+crops.+Molecular+Plant+Pathology+5%2C515%26%23x2013%3B525%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Heading for disaster, Fusarium graminearum on cereal crops. Molecular Plant Pathology 5,515&#x2013;525.</a> , (2004).</li>
<li>Klittich, C. J. R., Leslie, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitrate+reduction+mutants+in+Fusarium+moniliforme+%28Gibberella+fujikuroi%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Nitrate reduction mutants in Fusarium moniliforme (Gibberella fujikuroi.</a> Genetics. 118, 417-2013 (1998).</li>
<li>Trail, F., Common, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perithecium+development+in+Gibberella+zeae%2C+a+light+microscopy+study%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Perithecium development in Gibberella zeae, a light microscopy study.</a> , (2000).</li>
<li>Tschantz, A. T., Horst, R. L., Nelson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+substrate+for+uniform+production+of+perithecia+in+Gibberella+zeae%5BTitle%5D)+AND+%22Mycologia%22%5BJournal%5D)">A substrate for uniform production of perithecia in Gibberella zeae.</a> Mycologia. , 67-1101 (1975).</li>
<li>Tschanz, A. T., Horst, R. K., Nelson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+environment+on+sexual+reproduction+of+Gibberella+zeae%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The effect of environment on sexual reproduction of Gibberella zeae.</a> , (1976).</li>
</ol>

ويستند البروتوكول المقدمة هنا على الإجراءات السابقة المستخدمة لإنتاج perithecial لSPP الفيوزاريوم. (Klittich ويزلي ، 1988 ؛ تريل والمشتركة عام 2000 ،). وتوحيد الإجراءات التي تم إنشاؤها على كميات كبيرة من ascospores (تكفي لتحليل ميكروأري) ضروري لاستنساخ التجربة. وقد أفيد أن العوامل البيئية ، والعمرية والركيزة الاختلافات يمكن تغيير الطابع البيولوجي للascospores (باير وVerreet ، 2005). ولذلك فإن استخدام الفيديو تسليط الضوء على التفاصيل الصغيرة في الطريقة التي تنتج جراثيم وينبغي أن يسهل جمعها استنساخ. على...

<table><tbody><tr><td>أطباق بتري بقطر 9 cm</td><td>أداة</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tween 60 (20%)</td><td>كاشف</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>آجار الجزر (20% w/v جزر عضوي و 1.5% w/v آجار)</td><td>كاشف</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

بوغ زقي zeae gibberella الإنتاج والتحصيل للتجارب ميكروأري.

Gibberella zeae Ascospore Production and Collection for Microarray Experiments.

فيوزاريوم graminearum شواب (teleomorph Gibberella zeae) هو الممرض مصنع يسبب مرض الجرب على القمح والشعير الذي يقلل من المحصول وجودة الحبوب. F. graminearum يتسبب أيضا في ساق والأذن وتتعفن من الذرة هو منتج للسموم الفطرية مثل trichothecenes التي تلوث الحبوب ومضرة للانسان والماشية (جوسوامي وكيستلر ، 2004). الفطريات تنتج نوعين من الجراثيم. Ascospores ، وبطرق الزراعه الناتجة عن التكاثر الجنسي ، هي المصدر الرئيسي لنقل العدوى الأولية. يتم تفريغها قسرا من هذه الجراثيم perithecia ناضجة ومشتتة بفعل الرياح (Francl وآخرون 1999). هي سبب رئيسي العدوى الثانوية macroconidia التي تنتجها وسائل اجنسي على سطح المصنع. لدراسة العمليات التنموية للascospores في هذا الفطر ، وكان المطلوب إجراء لجمع كمية كبيرة في ظل ظروف معقمة. لدينا بروتوكول تم تصويره من أجل توليد أكبر قدر من المعلومات لفهم واستنساخ ، والجوانب الحاسمة عندما يتم إنشاؤها بالكامل ملامح التعبير الجيني الجينوم وتفسيرها. على وجه الخصوص ، تقلب بوغ زقي الإنبات والنشاط البيولوجي تعتمد على التلاعب مسبقة من المواد. ويقترح استخدام الفيديو لتوثيق كل خطوة من خطوات الإنتاج بوغ زقي من أجل زيادة التوحيد القياسي ، والامتثال للمتطلبات الصارمة المتزايدة للتحليل [ميكروأري. الإجراء يتطلب معدات المختبرات فقط القياسية. تظهر الخطوات اللازمة لمنع التلوث وصالح تزامن وقت ascospores.

لدراسة العمليات التنموية في ascospores zeae Gibberella ، وهو إجراء لجمع تحت ظروف معقمة تم تصويره من أجل توليد أكبر قدر من المعلومات لوصف البروتوكول. هذا يجب تسهيل استنساخ التجربة ، جانبا حاسما عندما تنفذ بالكامل الاختبارات الشخصية الجينوم التعبير.

بوغ زقي zeae Gibberella الإنتاج والتحصيل للتجارب ميكروأري.

يُعد فطر *Fusarium graminearum* Schwabe (والذي يُعرف في طوره الجنسي باسم *Gibberella zeae*) ممرضاً نباتياً يسبب مرض لفحة السنابل في القمح والشعير، مما يؤدي إلى خفض إنتاجية المحاصيل وجودة الحبوب...

gibberella-zeae-ascospore-production-collection-for-microarray

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

في هذا البروتوكول التعبير الجيني ، في الخميرة...

تحليل لميكروأري السكيراء الجعوية</em

ودفع الدمار الذي محاصيل الحبوب من قبل الفطريات بذرة اصابة العديد من الجهود البحثية من أجل فهم أفضل النباتات الممرض التفاعلات. لدراسة بذور للفطريات التفاعلات في إعداد مختبر، طورنا طريقة قوية لالكمي للاستنساخ الفطرية، والكتلة الحيوية، وتلوث بالسموم الفطرية باستخدام اختبارات بيولوجية على نواة.

الكمي للاستعمار الفطرية، تولد الأبواغ، وإنتاج السموم الفطرية عن طريق اختبارات بيولوجية على النواة

الصلبان الجنسي والعزلة من ذرية المؤتلف هي أدوات هامة لبحث الفطريات...

الجنسي للتنمية والتفريغ في بوغ زقي فيوزاريوم graminearum</em

يوضح هذا الفيديو طريقة لتحديد العدوى الفطرية في يرقات سمك الزرد. يتم حقن الجراثيم الفطرية في البطين الخلفي لليرقات ، ويتم تحضين اليرقات للسماح بتطور العدوى. يتم حصاد اليرقات المصابة على فترات محددة ، ويتم تقييم تقدم العدوى عن طريق تعداد وحدات تكوين المستعمرات.

تقنية لتحديد العدوى الفطرية في يرقات الزرد

يوضح الفيديو تقنية جهاز جرح وانحباس أسماك الزرد لمراقبة عدوى مسببات الأمراض الفطرية المسماة بالفلورسنت في يرقات أسماك الزرد. تجذب العدوى الأولية البلاعم ، ومع استمرار العدوى ، يتقدم تجنيد العدلات في موقع الحقن.

تقنية zWEDGI لتصور يرقات الزرد المصابة بممرضات الفطريات

نقدم هنا بروتوكولا لتحليل نمو رشاشيه الخنزير وإنتاج الأفلاتوكسين في حبات الذرة معربا عن البروتينات المضادة للفطور.  استخدام سلالة الإعراب عن التجارة والنقل (أ) الخنزير نحن رصد العدوى وانتشار الفطريات في حبات ناضجة في الوقت الحقيقي. المقايسة سريعة وموثوق بها، واستنساخه.

تثبيط النمو رشاشيه الخنزير و "إنتاج الأفلاتوكسين" في "الإعراب عن الذرة المعدلة وراثيا" المانع α-الأميليز من purpureus لابلاب ل.

والاختناق في دورة "التصميم وبناء الاختبار" من الهندسة الميكروبية هو السرعة التي يمكننا أن تؤدي شاشات وظيفية من سلالات. نحن نصف طريقة عالية الإنتاجية لفحص الإجهاد المطبقة على مئات إلى آلاف خلايا الخميرة لكل تجربة تستخدم تسلسل الحمض النووي الريبي القائم على قطرات.

ارتفاع الإنتاجية الخميرة سلالة Phenotyping مع تسلسل الحمض النووي الريبي القائم على دروبليت

يصف هذا البروتوكول نموذج عدوى أسبيرغيلوس في يرقات حمار وحشي. يتم حقن جراثيم أسبيرغيلوس في الدماغ الخلفي لليرقات ، ويستخدم العلاج الكيميائي للحث على كبت المناعة. يتم رصد تطور العدوى عن طريق إعداد التصوير اليومي لمراقبة النمو الفطري والاستجابات المناعية وكذلك تعداد الجراثيم الحية عن طريق طلاء وحدة تشكيل المستعمرة.

عدوى يرقات حمار وحشي مع جراثيم أسبيرغيلوس لتحليل التفاعلات المضيفة الممرضة

نحن نقدم بروتوكول التصوير الحي الخالي من التسمية باستخدام تقنيات المجهر الخفيفة المرسلة لالتقاط الصور وتحليل وقياس حركة النمو للفطريات الخيطية A. nidulans في كل من الثقافات المغمورة ووسائل الإعلام الصلبة. يمكن استخدام هذا البروتوكول بالتزامن مع المجهر الفلوري.

التحليل الكمي لمعدل نمو النيدولانات Aspergillus باستخدام المجهر الحي والبرمجيات مفتوحة المصدر

هذا البروتوكول هو وسيلة فعالة وسريعة لزراعة الخمائر والعفن Aspergillus fumigatus من مجموعات كبيرة من عينات التربة في أقل من 7 أيام. يمكن تعديل الطرق بسهولة لاستيعاب مجموعة من وسائط الحضانة ودرجات الحرارة حسب الحاجة للتجارب.

عزل الخمائر والعفن القابل للزراعة عن التربة للتحقيق في التركيب السكاني الفطري

تفصل هذه المخطوطة بروتوكول التلقيح الأمثل الذي يستخدم أغماد أوراق الذرة المنفصلة للدراسات الخلوية والفسيولوجية والجزيئية القابلة للتكرار لتفاعلات الذرة مع مسببات الأمراض النباتية الفطرية. تسهل أغماد الأوراق المراقبة في الوقت الفعلي للتفاعلات الخلوية بين النبات الحي والفطريات في الأنسجة غير الثابتة.

أغماد الذرة المنفصلة لتصوير الخلايا الحية للعدوى بمسببات أمراض الذرة الورقية الفطرية

استكشف عملية تطور الأبواغ الزقيّة في فطر Gibberella zeae باستخدام بروتوكول التجميع المعقم. يوفر هذا البروتوكول قابلية تكرار عالية للتجارب الميكروأرية وتحليل التعبير الجينومي.

بوغ زقي zeae Gibberella الإنتاج والتحصيل للتجارب ميكروأري.

استكشف المزيد من الفيديوهات