Name: انتشار الخلايا الجنينية البشرية (ES) الجذعية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 52 s
Description: تعلم تقنيات زراعة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية باستخدام خطوط H1 وH9. استكشف طرق التمدد والحفاظ على الخلايا باستخدام الكولاجيناز لضمان نمو صحي ومستقر.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+midbrain+dopaminergic+neurons+from+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Induction of midbrain dopaminergic neurons from ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Neuron. 28, 31-40 (2000).</li>
<li>Perrier, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+midbrain+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Derivation of midbrain dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 12543-12548 (2004).</li>
<li>Pruszak, J., Isacson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human embryonic stem cells into dopaminergic neurons.</a> , John Wiley and Sons. (2007).</li>
<li>Pruszak, J., Sonntag, K. C., Aung, M. H., Sanchez-Pernaute, R., Isacson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+and+methods+for+cell+sorting+of+human+embryonic+stem+cell-derived+neural+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Markers and methods for cell sorting of human embryonic stem cell-derived neural cell populations.</a> Stem Cells. 25, 2257-2268 (2007).</li>
<li>Sonntag, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+yield+of+neuroepithelial+precursors+and+midbrain-like+dopaminergic+neurons+from+human+embryonic+stem+cells+using+the+bone+morphogenic+protein+antagonist+noggin%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Enhanced yield of neuroepithelial precursors and midbrain-like dopaminergic neurons from human embryonic stem cells using the bone morphogenic protein antagonist noggin.</a> Stem Cells. 25, 411-418 (2007).</li>
<li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+dopaminergic+neurons+and+pigmented+epithelia+from+primate+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Generation of dopaminergic neurons and pigmented epithelia from primate ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 1580-1585 (2002).</li>
<li>Ko, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cell-derived+neural+precursors+as+a+continuous%2C+stable%2C+and+on-demand+source+for+human+dopamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cell-derived neural precursors as a continuous, stable, and on-demand source for human dopamine neurons.</a> J Neurochem. 103, 1417-1429 (2007).</li>
<li>Hong, S., Kang, U. J., Isacson, O., Kim, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+precursors+derived+from+human+embryonic+stem+cells+maintain+long-term+proliferation+without+losing+the+potential+to+differentiate+into+all+three+neural+lineages%2C+including+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Neural precursors derived from human embryonic stem cells maintain long-term proliferation without losing the potential to differentiate into all three neural lineages, including dopaminergic neurons.</a> J Neurochem. , (2007).</li>
<li>Zhang, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+subtype+specification+from+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Neural subtype specification from embryonic stem cells.</a> Brain Pathol. 16, 132-142 (2006).</li>
<li>Pankratz, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+neural+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+via+an+obligated+primitive+anterior+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Directed neural differentiation of human embryonic stem cells via an obligated primitive anterior stage.</a> Stem Cells. 25, 1511-1520 (2007).</li>
<li>Lazzari, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+derivation+of+neural+rosettes+from+cloned+bovine+blastocysts%3A+a+model+of+early+neurulation+events+and+neural+crest+specification+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Direct derivation of neural rosettes from cloned bovine blastocysts: a model of early neurulation events and neural crest specification in vitro.</a> Stem Cells. 24, 2514-2521 (2006).</li>
<li>Pomp, O., Brokhman, I., Ben-Dor, I., Reubinoff, B., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+peripheral+sensory+and+sympathetic+neurons+and+neural+crest+cells+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Generation of peripheral sensory and sympathetic neurons and neural crest cells from human embryonic stem cells.</a> Stem Cells. 23, 923-930 (2005).</li>
</ol>

انتشار الخلايا الجنينية البشرية (es) الجذعية

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

انتشار الخلايا الجنينية البشرية (ES) الجذعية

نعم، أنا لورين ديون. أنا المسؤولة عن مرفق استزراع الخلايا الجذعية البشرية Amgen في MGH. نعم، أنا لورين، أنا المسؤولة عن مرفق استزراع الخلايا الجذعية البشرية AM في MGH.لقد كنت أعمل مع الخلايا الجذعية البشرية Amgen لسنوات الآن منذ أن كنت باحثاً ما بعد الدكتوراه في مختبر George De قبل أربع سنوات. ولدينا حالياً خطان خلويان، H1 وH9، وكلاهما من Y cell. وبناءً على ذلك، فإن الطريقة التي نقوم بها بتوسيع أو الحفاظ على هذه الخلايا في المزرعة هي، أو على الأقل الطريقة التي نقوم بها بتقسيم هذه الخلايا، هي استخدام collagenous.لذا، ما أقوم به عادةً في الممرات القليلة الأولى بعد استزراع الخلايا هو استخدام تقنية التقاط المستعمرات. وبذلك، يمكنني التحقق تحت المجهر من المستعمرات الجيدة والمتمايزة ذات الشكل المناسب، وسأقوم بجمع هذه المستعمرات فقط وتقطيعها إلى قطع صغيرة وإعادتها إلى طبق جديد. أما المستعمرات التي تبدو غير متمايزة، فأتركها كما هي.تتمثل الطريقة الأخرى لنقل الخلايا في استخدام التريبسين، لذا فإنني لا أستخدم هذه التقنية هنا. أعتقد أن الكولاجيناز أكثر أماناً بقليل لأن الخلايا الجذعية البشرية لا تفضل أن تكون منفردة أو معزولة.لذلك، إذا استخدمت التريبسين لفترة طويلة قليلاً، أي لمدة ثلاث إلى أربع دقائق تقريباً، وهو الأسلوب الذي نتبعه مع أنواع أخرى من الخلايا، فإن الخلايا الجذعية البشرية ستنفصل عن بعضها وقد تموت معظمها، أو تتمايز، أو لن تلتصق بالسطح. لذا، تكمن الفكرة في ضرورة الحفاظ على الخلايا في شكل تكتلات؛ إذ لا نريد لها أن تكون منفردة داخل الدورق.لذلك، فإن الميزة من استخدام الكولاجيناز هي الحفاظ على الخلايا ككتل خلوية. أما عند استخدام طريقة التشيبس (chipsy)، فإنك تقوم فقط باختيار الخلايا التي ستنجو من هذه العملية القاسية جداً من عملية الأوبسنة (opsonization). لذا، عادة ما تكون هذه الخلايا ذات قدرة تكاثرية عالية جداً.وبذلك، يمكنك تكييف خلاياك مع عملية التريبسين هذه. تكمن المشكلة في وجود خلايا تسلك سلوكاً مختلفاً، حيث تنقسم بشكل أسرع بكثير. ومن المخاطر المحتملة حدوث بعض التشوهات الكروموسومية نتيجة لعملية الانقسام السريعة جداً هذه.إذًا أنت تقول إن عملية الـ ization يمكن أن تؤدي إلى اختيار خلايا معينة في المزرعة بالنسبة لمعظم الخلايا التكاثرية. صحيح. تكون أكثر نشاطًا وربما تكون معدلات بقائها أعلى من الخلايا الأخرى. لذا، فبعد التكاثر، وبشكل أساسي بعد الزراعة عقب التكاثر في tripsin، وبعد عدة ممرات (passages)، تصبح المزرعة مختلفة، وتكتسب هذه الخصائص المختلفة.لذا، من الصعب تحديد ما إذا كانت متطابقة تماماً. فإذا أجريت الاختبار، الاختبار المعتاد، لنقل أنك تفحص العلامات، العلامات المعتادة للخلايا المتمايزة نهائياً مثل OC four و nano one 60 SC four C و C3، فقد تظل كل هذه الجزيئات مُعبَّراً عنها. وإذا أجريت تكوين TER، فقد تتمايز هذه الخلايا وتتشكل مثل الخلايا الطبيعية.إذا نظرت إلى النمط النووي، فقد تجد بعض التشوهات، ولكن قد يظل النمط النووي طبيعيًا. إن الميزة الانتقائية قد تكون ناتجة ببساطة عن طفرة لا يمكنك رؤيتها من خلال فحص النمط النووي. لذا، فإن حقيقة نموها بشكل أسرع بكثير هي في حد ذاتها، في رأيي، أمر أكثر سوءًا بعض الشيء.وإذا أردنا استخدام هذه الخلايا لعملية زرع في مرحلة ما، فإنني بالتأكيد لن أستخدم هذا النوع من الخلايا. حسناً، هل تود أن تخبرني ما هي المشكلات التقنية الرئيسية المتمثلة في استخدام هذه التقنية في تمرير الخلايا؟ أي باستخدام S، نعم.إن الأمر يستغرق وقتاً أطول قليلاً، وبما أن الخلايا لا تنمو بالسرعة نفسها، فإن الحصول على عدد كبير من الخلايا لإجراء بعض التجارب يتطلب وقتاً أطول بكثير. لذا، يمكنني القول إنها أقل ملاءمة. هل تود أن تخبرني بكلمات قليلة عن أهداف تجربتك؟كيف تستخدم خلايا CS؟ حسنًا، مشروعي الرئيسي هنا هو الحصول على خلايا بطانية من خلايا جذعية بشرية AB. والفكرة هي القدرة على تصنيع الدم.ونحن نعمل بشكل مكثف مع مختبرات هندسة الأنسجة الحيوية، وأحد أهدافهم هو تصنيع أنسجة في المختبر (in vitro). ولكن إحدى العقبات التي تواجه ذلك هي نقص الأوعية الدموية التي تخترق هذه الأنسجة. لذا، إذا تمكنا من جلب الخلايا البطانية أو وضعها في هذه الأنسجة، فسنحصل على نمو أفضل لهذا النسيج.لذا، فإن الفكرة تكمن في أنه من المعروف وجود مصادر قليلة للخلايا البطانية، مثل الدم البارد أو الدم تحت الضغط، ولكن سيكون من المثير للاهتمام الحصول على مصدر آخر للخلايا مثل الأذنين البشرية. وتكمن الميزة في أنه نظراً لإمكانية توسيع الخلايا المستمدة من الأذنين البشرية بشكل شبه نهائي، يمكنك تعديل هذه الخلايا، وإنشاء نظام تحريضي والقدرة على استخدامه. ومن ثم، يتم تطبيق ذلك في منتجك النهائي، أي الخلايا المكونة لمادتك في هذه الحالة.

propagation-of-human-embryonic-stem-es-cells

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

قدرة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية لتجديد الذات وتميز في جميع أنواع الخلايا في الجسم يشير إلى أن لديهم وعدا كبيرا للتطبيقات الطبية والبحوث كأداة لمعالجة المسائل الأساسية في التنمية والمرض. هنا ، ونحن نقدم موجزة ، خطوة بخطوة بروتوكول لاشتقاق خلايا جذعية جنينية من أجنة من جراء العزلة immunosurgical من كتلة الخلايا الداخلية.

اشتقاق الخلايا الجذعية الجنينية البشرية التي Immunosurgery

التفريق بين ESC يتزامن مع خلية من نوع تغييرات معينة في بنية وتركيبة لونين. الكشف عن هذه التغييرات يقدم أفكارا قيمة حول الآليات التي تحدد stemcellness وتمايز الخلايا. مناعي لونين (CHIP) يمثل قيمة لأسلوب تشريح الآليات الجزيئية الكامنة وراء تمايز الخلايا الجذعية.

مناعي لونين من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية

هذا الفيديو يوضح كيفية الحفاظ على نمو خلايا المنشأ الجنينية البشرية (hESCs) في ظروف خالية من الخلايا المغذية وكيفية hESCs مرور مستمرة في تغذية الخلايا خالية من الشروط. تأكيد hESC تعدد القدرات التي تزرع في تغذية الخلايا خالية من الشروط التي المجهري المناعي ويتجلى أيضا. الجزء 3 من 3.

من MEFs لMatrigel 3 : hESCs من الركض على Matrigel Matrigel

وقد ولدت من تمايز موجهة الى خلايا محددة hESCs الكثير من الاهتمام في مجال الطب التجديدي. ونحن نقدم موجزة ، وخطوة بخطوة لتحديد...

رسم مصير الخلايا الجذعية الجنينية البشرية من خلال تكوين ورم مسخي

على الرغم من التطورات الأخيرة في التعديل الوراثي، ترنسفكأيشن من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (HESCs) لا تزال عملية متقلبة. على حد علمنا، لم أساليب منهجية وفعالة لبالنقل الجذعية المحفزة التي يسببها الإنسان خلايا (iPSCs) للأنباء. هنا، نحن تصف بروتوكولات قوية لبالنقل بكفاءة وnucleofect iPSCs الإنسان.

وبنقل العدوى إلى الإنسان Nucleofecting الجذعية المحفزة المستحثة خلايا

أقمنا على بروتوكول لتحريض مباشر من neuroblasts المحفزة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية في ظل ظروف محددة المحافظة مع الجزيئات الصغيرة ، والتي تمكن من اشتقاق كميات كبيرة من الخلايا العصبية أسلاف الإنسان وأنواع الخلايا العصبية الخلية في الجهاز العصبي المركزي النامية لإصلاح العصبية.

كفاءة اشتقاق أسلاف الإنسان متعلق بالخلايا العصبية والخلايا العصبية من افرة القوة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية التعريفي مع جزيء صغير

وهناك حاجة واحدة الجين الخلية التعبير مقايسة لفهم التغاير الخلايا الجذعية.

التنميط الفردية الخلايا الجذعية الجنينية البشرية من خلال الكمي RT-PCR

خطوط الخلايا مراسل توفر وسيلة لتصور، وتتبع وعزل الخلايا من الاهتمام من السكان غير متجانسة. ومع ذلك، باستخدام إعادة التركيب مثلي التقليدية في الخلايا الجذعية الجنينية البشرية استهداف الجين غير فعال للغاية. هنا، نحن تصف استهداف CNS محدد المخ الأوسط عامل النسخ PITX3 موضع مع EGFP باستخدام إصبع الزنك نوكلياز تعزيز إعادة التركيب مثلي.

الزنك الاصبع نوكلياز المحسن استهداف الجينات في الخلايا الجذعية الجنينية البشرية

المعروض هنا هو بروتوكول لتوليد ثقافة خليه واحده من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية والتمايز اللاحقة في خلايا السلف العصبية. البروتوكول بسيط وقوي وقابل للتطوير ومناسب للكشف عن المخدرات وتطبيقات الطب التجديدي.

كفاءه التمايز العصبي باستخدام ثقافة خليه واحده من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية

نحن هنا لشرح كيفية مختبرنا يتجمد الأشكال الجذعية الجنينية خطوط الخلايا البشرية.

تجميد الخلايا البشرية ES

تعلم تقنيات زراعة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية باستخدام خطوط H1 وH9. استكشف طرق التمدد والحفاظ على الخلايا باستخدام الكولاجيناز لضمان نمو صحي ومستقر.

انتشار الخلايا الجنينية البشرية (ES) الجذعية

استكشف المزيد من الفيديوهات