Name: مدفع الجينات ترنسفكأيشن من الخلايا العصبية قرن آمون (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: تعلم عزل قرن آمون من الدماغ الكامل باستخدام منصة تقطيع نظيفة وتقنية المدفع الجيني. يوضح هذا البروتوكول خطوات دقيقة لتحضير الأنسجة العصبية لدراسات وظائف الذاكرة والتعلم.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ليس لدى المؤلفين أي تضاربات مصالح للإفصاح عنها.

مدفع الجينات ترنسفكأيشن من الخلايا العصبية قرن آمون

Gene-gun Transfection of Hippocampal Neurons

مرحباً، أنا Kma. أعمل في مختبر Case بجامعة براون. مرحلة التقطيع النظيف باستخدام 70% ethanol. ضع قطعة الغرس في ستة.ضع الوسط في طبق الآبار وحضنه عند 37 درجة، ثم استخدم الملاقط لفصل الدماغ كاملاً بين الدماغ المتوسط والدماغ الرباعي. اعزل الحصين من جانب واحد، ثم اعزل الحصين من الجانب الثاني. ضع الحصينات فوق قطرة من PBS.قم بسحب محلول PBS، ثم اصنع مقاطع سهمية باستخدام أداة تقطيع الأنسجة. كرر العملية ونقل المقاطع إلى طبق بتسريبها مع الغسل بمحلول PBS، وذلك عن طريق إضافة محلول PBS والوسط الغذائي وسحبهما برفق. افصل المقاطع باستخدام الملقط.اغسل المقاطع باستخدام PBS والوسط الغذائي. مرة أخرى، انقل المقاطع إلى الطبق وأدخلها. قم بشفط الوسط الغذائي من المقاطع باستخدام الملاقط.قم بتوصيل خرطوم مدفع الجينات بأسطوانة الهيليوم. ثم قم بتركيب الماسورة في مدفع الجينات، واملأ المخزن بالطلقات.أدخل المخزن في مسدس Jing. اضبط الضغط في صمام خزان الهيليوم. قم بقذف الخرزات المغلفة بـ EGFP على المقاطع.والآن.

gene-gun-transfection-of-hippocampal-neurons

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

نحن تصف طريقة لإعداد الرصاص الحمض النووي الذهب المطلي وشرح استخدام هذه الرصاصات لtransfect biolistically الخلايا العصبية في قرن آمون شرائح المثقفين.

إعداد نقطي غون جين وترنسفكأيشن Biolistic من الخلايا العصبية في الثقافة شريحة

التصوير الخلية الحية ذات فائدة خاصة عند دراسة ديناميات الاتجار عضية. نحن هنا وصف بروتوكول لحية كثيفة التصوير الأساسية الحويصلات في الخلايا العصبية مثقف واسع باستخدام الحقل المجهري مضان. هذا البروتوكول هو مرن ، ويمكن أن تتكيف مع العضيات صورة أخرى مثل الميتوكوندريا ، الإندوسومات وperoxisomes.

يعيش تصوير الكثيفة الأساسية الحويصلات في الخلايا العصبية الأولية الحصين مثقف

هذا البروتوكول يحدد الخطوات المطلوبة لتشريح ، transfect electroporation عبر الماوس والخلايا العصبية قرن آمون والثقافة القشرية. يمكن استخدامها على المدى القصير للدراسات الثقافات ثمرة محوار والتوجيه ، في حين يمكن استخدامها على المدى الطويل للدراسات الثقافات synaptogenesis وتحليل شجيري العمود الفقري.

Nucleofection والثقافة الأولية من الخلايا العصبية الجنينية الماوس الحصين والقشرية

المصدر: Keener، D.G.، et al. التثقيب الكهربائي أحادي الخلية عبر ثقافة شرائح النمط العضوي المختلفة للخلايا العصبية المثبطة للحصين والحصين الخاصة بالطبقة. J. Vis. Exp. (2020).يوضح هذا الفيديو عملية التثقيب الكهربائي أحادي الخلية لإدخال الحمض النووي البلازميدي في الخلايا العصبية داخل مزارع شرائح الحصين الفئرانية. يتضمن الإجراء وضعا دقيقا للماصة ، وتعديلات الضغط ، ونبضات التثقيب الكهربائي لاختراق الغشاء العصبي بشكل عابر ، مما يسهل نقل الجينات. بعد التثقيب الكهربائي ، يتم احتضان الشريحة لتمكين...

التعبير الجيني عن طريق التثقيب الكهربائي أحادي الخلية في مزارع شرائح الحصين في الفئران

المصدر: Denaxa، M.، el al.، زرع أسلاف الخلايا العصبية القشرية المعدلة كيميائيا في أدمغة الفئران المبكرة بعد الولادة. J. Vis. Exp. (2019)يوضح هذا الفيديو إجراء حقن ناقل البلازميد الذي يحمل الجين محل الاهتمام في أسلاف الخلايا العصبية الداخلية في شريحة دماغية جنينية ، متبوعا بالتثقيب الكهربائي لدخول البلازميد والتعبير الجيني. يمكن استخدام هذه الأسلاف المعدلة لاحقا لعلاج اضطرابات الدماغ.

نقل الجينات بمساعدة التثقيب الكهربائي المضمن في الأغروز في أسلاف الخلايا العصبية القشرية للفأر

هطول فوسفات الكالسيوم هو وسيلة مريحة واقتصادية لترنسفكأيشن من الخلايا المستزرعة. مع التحسين، وأنه من الممكن استخدام هذه الطريقة على الخلايا التي يصعب بالنقل مثل الخلايا العصبية الأولية. نحن هنا وصف بروتوكول مفصلة لدينا ترنسفكأيشن فوسفات الكالسيوم من الخلايا العصبية قرن آمون cocultured مع الخلايا astroglial.

الكالسيوم فوسفات ترنسفكأيشن من الخلايا العصبية الحصين الابتدائية

سمحت التحسينات الحديثة في مستحضرات شرائح الدماغ العضوية باستغلالها لتطبيقات التكنولوجيا الحيوية. تحافظ الشرائح العضوية على الخصائص الهيكلية المحلية لعلم الأحياء في الجسم الحي ، بما في ذلك الوصلات المشبكية الوظيفية. نقدم هنا طريقة تسليم بيولوجية انتقائية لتسمية هذه الشرائح ومعالجتها وراثيا.

Regioselective Biolistic استهداف عضوي في الدماغ شرائح باستخدام بندقية الجينات المعدلة

قدم هنا طريقة أنبوب اسطوانة معدلة لاستزراع وتصوير عالي الدقة متقطعة من الدماغ القوارض شرائح الأسابيع كثيرة مع إعادة تنظيم دقيق في كوفيرسليبس فوتوتشيد. كذلك يتم الاحتفاظ بصلاحية الخلايا العصبية ومورفولوجيا شريحة. يتم توفير تطبيقات هذا النظام مغلق تماما استخدام الفيروسات للتعبير نوع من الخلايا المحددة.

أسلوب أنبوب الاسطوانة المعدلة لتصوير متقطعة الذات المترجمة ومتكررة خلال ثقافة طويلة الأجل من شرائح المخ في نظام مغلق

يقدم هنا بروتوكول للكهرومporation أحادي الخلية التي يمكن أن توفر الجينات في كل من الخلايا العصبية مثير ومثبطة عبر مجموعة من الأعمار ثقافة شريحة فرس النهر في المختبر. يوفر نهجنا تعبيرا دقيقا وفعالا عن الجينات في الخلايا الفردية ، والتي يمكن استخدامها لفحص الوظائف المستقلة للخلايا وبين الخلايا.

خلية واحدة Electroporation عبر مختلف الثقافة شريحة Organotypic من الإثارة فرس النهر الماوس والخلايا العصبية المثبطة فئة محددة

يوضح هذا الأسلوب وسيلة فعالة لإعداد النسخ المتماثل أو المعيبة مخزونات فيروس ترميز الجين الورمي الإنسان ، واستخدمت لاحقا لتحريض مرض التكاثر النقيي في نموذج الفأر.

إنتاج النسخ المعيبة للفيروسات الارتدادية التي ترنسفكأيشن عابر للخلايا 293T

تعلم عزل قرن آمون من الدماغ الكامل باستخدام منصة تقطيع نظيفة وتقنية المدفع الجيني. يوضح هذا البروتوكول خطوات دقيقة لتحضير الأنسجة العصبية لدراسات وظائف الذاكرة والتعلم.

مدفع الجينات ترنسفكأيشن من الخلايا العصبية قرن آمون

استكشف المزيد من الفيديوهات