Name: يعيش تصوير الدماغ الجنينية اسماك الزرد بواسطة الميكروسكوب متحد البؤر (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-04-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 11 s
Description: تعلم تقنية التصوير الحي للدماغ الجنيني في أسماك الزرد باستخدام الميكروسكوب متحد البؤر بدقة خلية واحدة. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة تطور الدماغ الفقاري والتغيرات الخلوية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

جزيل الشكر للدكتور جنيفر Gutzman الذين طوروا الاولى من هذا الأسلوب في مختبر SIVE. أيضا بفضل الخضراء JB في بوسطن دانا فاربر معهد السرطان ، MA الذين قدموا يرجى الترميز البلازميد CAAX - GFP مرنا. أجري التصوير مبائر في مرفق WM مؤسسة كيك التصوير البيولوجي في وايتهيد. معتمد من قبل النظام المنسق NIHMH70926. معتمد من قبل المصري الزمالة بعد الدكتوراه قبل جبهة الخلاص الوطني.

1. إعداد مرنا للحقن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وكتب على مرنا المستخدمة في هذا الإجراء من ترميز البلازميد CAAX - eGFP (memGFP) مرنا. يصبح خطي لأول مرة وفقا لبلازميد Gutzman آخرون ، 2008. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم نسخ مرنا memGFP باستخدام mMachine mMessage عدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع مرنا مما أدى إلى 1μg/μl ، قسامة ، وتخزينها في -80 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد قالب حقن agarose 1 ٪ مع الممرات عرض الأجنة في مرحلة خلية واحدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في اليوم قبل الحقن ، وإقامة أقفاص التزاوج فصل الذكور عن الإناث. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في يوم من الحقن ، وسحب الإبر الشعرية باستخدام مجتذب micropipette للتحضير للحقن. </li></ol> 2. حقن مرنا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في يوم من الحقن ، وأذاب an قسامة من مرنا memGFP 1μg/μl على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع 01:05 مرنا في الماء إلى التركيز النهائي لل200ng/μl ، والحفاظ على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل الإبرة الشعرية مع 1μl من مرنا memGFP أعدت في 200ng/μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان تحميل إبرة في micromanipulator تعلق على microinjector التي تعمل بالغاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط مستوى الصوت لحقن 1nl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب فواصل على الأسماك نوع البرية التي أنشئت في أقفاص التزاوج من اليوم السابق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الأجنة في أقرب وقت وضعت فيه. توجيهها في قالب حقن agarose تغطيها المتوسطة الجنين (Westerfield ، 1995) مع خلية واحدة على الجانب بعيدا عن micromanipulator. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من خلال ضخ المشيماء وصفار البيض بحيث يتم إيداع مرنا مباشرة في خلية واحدة. ضخ ما يقرب من 50 الأجنة في التجربة. لا حقن إذا كانت الخلية قد تنقسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الأجنة عند 28 درجة مئوية خلال الليل في وسط جنين </li></ol> 3. التركيب والتصوير الأجنة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحميل الصور والأجنة ، وإزالة المشيماء بالملقط من الأجنة في إطار ساعة واحدة قبل نقطة stereomicroscope الوقت للاهتمام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد شريحة متزايدة لتصل إلى 4 أجنة. <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام سيليكون الشحوم فراغ لابرام ساترة على الجانب السفلي من شريحة مصممة خصيصا 2mm وسميكة من البلاستيك مع وجود ثقب 1cm تقريبا في القطر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سد ثقب في الشريحة مع agarose 0.7 ٪ ، واسمحوا الوقوف حوالي 20 دقيقة أو حتى تصلب </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة وقد عززت agarose ، إزالة المكونات الصغيرة باستخدام ماصة 200μl نصائح لتشكيل الثقوب الأسطوانية التي لتحميل كل جنين. </li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الأجنة على الشريحة agarose مليئة تشريح تحت المجهر. إضافة 50μl من tricaine (Westerfield ، 1995) لتخدير الأجنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط لوضع الأجنة في ثقوب اسطوانية في agarose مع الدماغ أو المنطقة التي تهم ضد ساترة الكامنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغطي الأجنة في agarose مع آخر ساترة المضمون مع الشحوم فراغ السيليكون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صورة الجنين باستخدام مقلوب ، فلوري ، ليزر أو مسح القرص مبائر الغزل المجهر. الصورة في 63x أو أعلى لجمع صور عالية الدقة واحدة من الخلايا داخل الظهارة العصبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم تصدير الصور على هيئة ملفات TIFF من برنامج LSM وتحليلها باستخدام برنامج فوتوشوب. </li></ol> 4. نتائج ممثل / نتائج هو مبين في الشكل رقم 1 هو صورة من ممثل مبائر الظهارة العصبية 24 الزرد HPF بين الدماغ المتوسط ​​والبطينين الدماغ المؤخر. هو المسمى مع كل خلية غشاء محدد GFP. <img src="/files/ftp_upload/1217/1217fig1.jpg" alt="" width="450" height="449"> الشكل 1. يعيش التصوير مبائر من memGFP حقن الجنين 24 الزرد HPF. (A) الظهارة العصبية للجنين 24 HPF مع كل خلية التي حددها GFP. المنطقة تصوير الدماغ المتوسط ​​ويفصل بين البطينين الدماغ المؤخر (M ، H على التوالي) ، والتي تشكل الحدود الدماغ المتوسط ​​، الدماغ المؤخر.

<ol><li>Gutzman, J. H., Graeden, E., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+the+zebrafish+midbrain-hindbrain+boundary+constriction+requires+laminin-dependent+basal+constriction%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">Formation of the zebrafish midbrain-hindbrain boundary constriction requires laminin-dependent basal constriction.</a> Mech Dev. 125 (974), 11-12 (2008).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book%3A+a+Guide+for+the+Laboratory+Use+of+Zebrafish%22">The Zebrafish Book: a Guide for the Laboratory Use of Zebrafish</a>. , University of Oregon Press. Eugene, Oregon. (1995).</li>
</ol>

في هذا الفيديو ، ونحن يبرهن على وجود طريقة لحقن مرنا في واحد الأجنة الزرد الخلية. هنا ، فإننا نستخدم مرنا ترميز GFP غشاء استهداف لتسمية كل خلية. ثم نظهر كيفية تحميل وصورة الدماغ النامية في قرار خلية واحدة. وقد سمحت لنا هذه التقنية لدراسة نوع جديد من تغيير شكل الخلية ، وانقباض القاعدية ، المطلوبة لتشكيل الحدود الدماغ المتوسط ​​، الدماغ المؤخر (Gutzman وآخرون ، 2008). تحليل مماثل من الظواهر الأخرى لديها القدرة على التوسع بشكل كبير من فهمنا التشكل الفقاريات وبيولوجيا الخلايا الكامنة.

<table><tbody><tr><td>أجاروز SeaKem GTG</td><td >كاشف</td><td>Lonza Inc.</td><td>50027</td><td></td></tr><tr><td>إيثيل إستر حمض 3-أمينوبنزويك (تريكائين)</td><td>كاشف</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-5040</td><td></td></tr><tr><td>أنابيب شعرية</td><td>أداة</td><td>Frederick Haer and Co.</td><td>30-30-1</td><td>Borosil 1.0mmOD x 0.5mm ID/fiber 100mm</td></tr><tr><td>شحم سيليكون للتفريغ</td><td>كاشف</td><td>VWR international</td><td>W0S717</td><td></td></tr><tr><td>ملقط</td><td>أداة</td><td>Fine Science Tools</td><td>11232-20</td><td>Dumont #5 Bio Inox</td></tr><tr><td>رؤوس ماصات 1-200 &amp;mu;l</td><td>أداة</td><td>USA Scientific, Inc.</td><td>111-0806</td><td>هذه هي الحجم المناسب للأجنة بعمر 24 hpf.</td></tr><tr><td>طقم نسخ mMessage mMachine</td><td>كاشف</td><td>Ambion</td><td>AM1340</td><td>إنزيم SP6 RNA polymerase</td></tr><tr><td>مجهر Zeiss LSM 510 الماسح البؤري</td><td>مجهر</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>متحكم دقيق</td><td>أداة</td><td>Narishige International</td><td></td><td></td></tr><tr><td>محقن دقيق</td><td>أداة</td><td>Harvard Apparatus</td><td>PLI-100</td><td></td></tr><tr><td>جهاز سحب الماصات الدقيقة</td><td>أداة</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

يعيش تصوير الدماغ الجنينية اسماك الزرد بواسطة الميكروسكوب متحد البؤر

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

في هذا الفيديو ، ونحن لشرح طريقة مختبرنا وقد وضعت لتحليل التغييرات وإعادة ترتيب شكل الخلية المطلوبة لثني والطي الدماغ الزرد النامية (Gutzman وآخرون ، 2008). مثل هذا التحليل يعطي فهما جديدا للبيولوجيا الخلية الأساسية اللازمة لتطوير البنية 3D الفقاريات من الدماغ ، ويزيد بشكل كبير من قدرتنا على دراسة التشكل أنبوب العصبي. يتشكل الدماغ الزرد الجنينية ابتداء من الساعة 18 التسميد آخر ساعة (HPF) والبطينين داخل الظهارة العصبية تضخيم. بنسبة 24 HPF ، والخطوات الأولية التشكل الأنبوب العصبي كاملة. باستخدام الطريقة الموصوفة هنا ، يتم حقن الأجنة في مرحلة خلية واحدة مع ترميز الغشاء مرنا استهداف بروتين الفلورية الخضراء (memGFP). HPF بعد الحقن ، والحضانة ، وجنين ، وبين 18 و 24 الآن ، هي التي شنت ، مقلوب ، في agarose والتقط بواسطة الفحص المجهري متحد البؤر. ومن الجدير بالذكر أن الجنين الزرد شفافة مما يجعلها مثالية لنظام التصوير الفلورسنت. في حين ركزت تحليلاتنا على الحدود الدماغ المتوسط ​​، الدماغ المؤخر والدماغ المؤخر ويمكن تمديد هذه طريقة لتحليل أي منطقة في الزرد إلى عمق 8-10 ميكرون.

في هذا الفيديو ، ونحن يبرهن على وجود طريقة يمكن من خلالها تحليل الدماغ النامي في أجنة الفقاريات الزرد يعيش في قرار خلية واحدة بواسطة الفحص المجهري متحد البؤر. ويشمل هذا الأسلوب الذي كنا حقن الجنين الزرد وحيدة الخلية وجبل لاحقا وصورة الدماغ النامي.

نستعرض في هذا الفيديو الطريقة التي طورها مختبرنا لتحليل تغيرات شكل الخلايا وإعادة ترتيبها والمطلوبة لثني وطي...

تبدأ هذه العملية بحقن جنين سمكة الزيبرا في مرحلة الخلية الواحدة، حيث يتم وضع الجنين في قالب حقن بحيث تكون الخلية موجهة بعيداً عن جهاز الحقن. ثم تُحقن الأجنة بـ MRNA من خلال تحريك الإبرة عبر المح، وصولاً إلى الخلية. وفي اليوم التالي.تُملأ شريحة تثبيت بلاستيكية بمادة aros. بعد ذلك، يتم وضع جنين مخدّر بشكل مقلوب في فتحة داخل مادة aros ويتم تصويره باستخدام المجهر البؤري. مرحباً، أنا غراهام من مختبر الدكتورة هازل سيف في معهد وايت هيد للأبحاث الطبية الحيوية وقسم الأحياء في معهد ماساتشوستس للتكنولوجيا (MIT).سنعرض لكم اليوم إجراءً لحقن أجنة أسماك الزيبرا في مرحلة الخلية الواحدة، وما يلي ذلك من تصوير حي للدماغ باستخدام المجهر البؤري (confocal microscopy). نستخدم في مختبرنا هذا الإجراء لدراسة تشكل دماغ الفقاريات بدقة الخلية الواحدة. لذا، فلنبدأ.يتم نسخ mRNA المستخدم في هذا الإجراء من بلازميد يشفر لبروتين GFP المرتبط بالغشاء C-A-X-E-G-F-P-R-N-A-A. أولاً، يتم تخطيط البلازميد عن طريق الهضم بإنزيم NotI، ثم نسخ mRNA الخاص بـ GFP المرتبط بالغشاء من البلازميد المخطط باستخدام طقم M message m RNA. بعد نسخ mRNA، يتم قياس كميته وتخفيف mRNA الناتج بالماء ليصل تركيزه إلى 1 µg/1 µL، ثم يُحفظ في درجة حرارة -80 °C حتى وقت الاستخدام. في اليوم السابق للحقن، يتم تجهيز أقفاص التزاوج، مع فصل الذكور عن الإناث في يوم الحقن. استخدم جهاز سحب الماصات (setter instrument micropipet puller) لسحب الإبر الشعرية المستخدمة في الحقن.قم بتجهيز قالب حقن من مادة 1%AGA rose بفتحات تتناسب مع عرض الأجنة في مرحلة الخلية الواحدة في يوم الحقن، ثم قم بإذابة جزء من mRNA الخاص بـ membrane GFP بتركيز 1 µg/µL على الثلج. خفف الـ mRNA بنسبة واحد إلى خمسة بالماء للوصول إلى تركيز نهائي قدره 200 ng/µL واحفظه على الثلج. املأ الإبرة الشعرية بـ 1 µL من mRNA membrane GFP المُجهز بتركيز 200 ng/µL.نقوم هنا بإضافة 0.05% من الأحمر الفينولي (phenol red) إلى mRNA لجعله مرئياً عند الحقن. ضع الإبرة المُحمّلة في المِتلاعب الدقيق (micro manipulator) المتصل بحاقن دقيق يعمل بالغاز. اضبط حجم الحقن على 1 nanoliter.بعد ذلك، اسحب الحواجز من مجموعة أسماك النوع البري التي وُضعت في أقفاص التزاوج في اليوم السابق. اجمع الأجنة بمجرد وضعها. املأ قالب حقن AGA rose بالوسط المخصص للأجنة، وقم بتوجيه الأجنة في القالب بحيث تكون الخلية الواحدة في الجانب البعيد عن الميكرومانيبوليتور (micro manipulator).يتم الحقن عبر الغشاء الكوريوني والمح (yolks) بحيث يتم إيداع mRNA مباشرة في الخلية الواحدة. يتم حقن ما يقرب من 50 جنيناً في كل تجربة. ومع ذلك، إذا انقسمت الخلية، فلا يتم الحقن؛ وبعد الانتهاء من حقن الأجنة، تُحضن عند درجة حرارة 28 °C طوال الليل في وسط نمو الأجنة.بعد فترة الحضانة طوال الليل، تصبح الأجنّة المحقونة جاهزة للتثبيت والتصوير. لبدء هذا الإجراء، قم بإزالة الغشاء السلوي (corion) من الأجنّة باستخدام الملاقط تحت مجهر ستيريو قبل ساعة واحدة من النقطة الزمنية المستهدفة، ثم قم بتجهيز شريحة لتثبيت ما يصل إلى أربعة أجنّة. بعد ذلك، املأ الشريحة بـ 0.7% aros حتى الحافة العلوية للشريحة، وانتظر لمدة 20 دقيقة تقريبًا أو حتى يتصلب الـ aros.بمجرد أن يتصلب الـ aros، اصنع ثقباً صغيراً في الـ aeros باستخدام طرف ماصة سعة 200 µL لتكوين ثقوب أسطوانية يتم فيها تثبيت كل جنين. قم بإزالة سدادات الـ aros باستخدام الملاقط قبل التثبيت. ضع الأجنة على الشريحة المملوءة بالـ aeros تحت مجهر تشريحي.أضف 50 µL من التريكا (trica) لتخدير الأجنة. استخدم الملقط لتوجيه الأجنة بوضع مقلوب داخل الثقوب الأسطوانية في الأجار، بحيث يكون الدماغ أو المنطقة المستهدفة مواجهةً لشريحة التغطية الموجودة بالأسفل.يتم تغطية الأجنة في AGA بغطاء زجاجي آخر وتثبيته باستخدام شحم الفراغ السيليكوني. الآن أصبحت الأجنة جاهزة للتصوير. قم بتصوير الجنين باستخدام مجهر بؤري مسحي ليزري فلوري مقلوب كما هو موضح هنا، أو مجهر بؤري ذو قرص دوار بتكبير 63x أو أعلى لجمع صور عالية الدقة للخلايا المفردة داخل الظهارة العصبية.يتم تصدير الصور كملفات TIF من برنامج LSM ويتم تحليلها باستخدام برنامج Photoshop. هذه صورة مجهرية بؤرية ممثلة لجنين سمكة الزيبرا في عمر 24 ساعة، وتظهر الظهارة العصبية بين بطيني الدماغ المتوسط والدماغ الخلفي. يشير الحرف M إلى بطين الدماغ المتوسط، ويشير الحرف H إلى بطين الدماغ الخلفي.تم وسم كل خلية ببروتين GFPE المرتبط بالغشاء. لقد استعرضنا للتو تقنية تسمح لك بتحليل دماغ سمكة الزيبرا النامي بدقة الخلية الواحدة. وقد مكنتنا هذه التقنية من دراسة نوع جديد من تغير شكل الخلايا يسمى التضييق القاعدي BA.كما يمكن استخدامه لتحليل أنواع أخرى من الظواهر وتوسيع فهمنا بشكل كبير لعملية تكوين أعضاء الفقرات، فضلاً عن البيولوجيا الخلوية الكامنة وراءها. هذا كل شيء. شكراً للمشاهدة وبالتوفيق في تجاربكم.

live-imaging-of-the-zebrafish-embryonic-brain-by-confocal-microscopy

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

يصف هذا البروتوكول التصوير من الخلايا العصبية الفردية أو الخلايا العصبية في قمة العيش الأجنة الزرد. ويستخدم هذا الأسلوب لدراسة سلوكيات الخلوية والتوطين أكتين باستخدام مضان مبائر الوقت الفاصل بين المجهري.

يعيش التصوير في القدرة على الحركة والهيكل الخلوي أكتين خلية من الخلايا العصبية الفردية والخلايا العصبية في الأجنة كريست اسماك الزرد

المفتاح لفهم العمليات التي تشكل تخلقية الجنين في وقت مبكر هو القدرة على الخلايا في صورة عالية الدقة. نحن هنا وصف تقنية لوضع العلامات خلايا مفردة أو مجموعات صغيرة من الخلايا في الأجنة الزرد كله مع غشاء استهداف بروتين الفلورية الخضراء.

التوسيم وخلايا الدماغ المؤخر التصوير في اسماك الزرد

يوضح هذا الفيديو طريقة تستفيد من الجمع بين التثقيب الكهربائي والمجهر البؤري لإجراء تصوير حي لخلايا عصبية سلفية فردية في الدماغ الأمامي لسمكة الزيبرا النامية. ويمكن من خلال هذه الطريقة إجراء تحليل In vivo لتطور الخلايا العصبية السلفية في الدماغ الأمامي على مستوى استنساخي.

الوقت الفاصل بين التصوير حية من خلايا ذات صلة Clonally السلف العصبية في الدماغ المقدم اسماك الزرد النامية

يوصف التصوير التنمية الدماغية في الزرد اليرقات. كما يتم توفير التقنيات اللازمة لتسهيل 3D التصوير وتعديل وضع الدماغية باستخدام العلاجات الكيميائية.

التصوير والإعمار 3D من الهياكل الدماغية في الجنينية اسماك الزرد

يمكن أن يلقي تصوير السلوك الديناميكي للعضيات والهياكل الخلوية الأخرى في الجسم الحي الضوء على وظيفتها في الظروف الفسيولوجية والمرضية. هنا ، نقدم طرقا لوضع علامات وراثية على عضيتين ، الجسيمات المركزية والميتوكوندريا ، وتصوير ديناميكياتها في أجنة الزرد الحية باستخدام الفحص المجهري واسع المجال ومتحد البؤر.

التصوير الهياكل التحت خلوية في الأجنة الحية اسماك الزرد

هنا ، نقدم طريقة تركيب متعددة الاستخدامات تسمح بالتصوير بفاصل زمني طويل الأمد لنمو الجسم الخلفي لأجنة أسماك الزرد الحية دون الإخلال بالتطور الطبيعي.

تنوعا تصاعد الطريقة على المدى الطويل التصوير التنمية الزرد

في التصوير الحي هو أداة قوية يمكن استخدامها للتحقيق في الآليات الخلوية الكامنة وراء تطوير الجهاز العصبي. هنا نحن نصف تقنية لاستخدام الوقت الفاصل الكونستوب المجهري لتصور أعداد كبيرة من الخلايا متعددة الألوان بقوس قزح المسمى في الوقت الحقيقي داخل الجهاز العصبي حمار وحشي النامية.

تصور الدماغ النامية في سمك الحمار الوحشي المعيشة باستخدام Brainbow والوقت الفاصل Confocal التصوير

يصف هذا البروتوكول نهجا لوضع العلامات في توتو والتصوير متعدد الأبعاد لسمك الحمار الوحشي في وقت مبكر من نمو العين. نحن نصف وضع العلامات والتضمين والتصوير رباعي الأبعاد (4D) باستخدام المجهر confocal المسح بالليزر ، واعتبارات لتحسين الحصول على مجموعات البيانات لتشريح آليات مورفوجينيسيس كوب البصرية.

4-التصوير الأبعاد من زيبرافيش كأس البصرية Morphogenesis

يظهر هنا بروتوكول لتصوير الدماغ بالكامل في الجسم الحي ليرقات الزرد باستخدام المجهر الفلوري ثلاثي الأبعاد. يتضمن الإجراء التجريبي إعداد العينات والحصول على الصور والتصور.

في الجسم الحي تصوير الدماغ بالكامل ليرقات الزرد باستخدام المجهر الفلوري ثلاثي الأبعاد

نوضح طريقة تستفيد من الفحص المجهري متحد البؤر للمسح السريع لإجراء تصوير مباشر لخلايا الخلايا الدبقية الصغيرة في القفص البصري لسمك الزرد النامي ، مما يسمح بتحليل ديناميكيات هذه الخلايا في الجسم الحي.

التصوير الحي وتوصيف ديناميكيات الخلايا الدبقية الصغيرة في جنين الزرد

نقدم هنا بروتوكولا مفصلا لفحص النشاط العصبي في مناطق الدماغ لأسماك الزرد المعدلة وراثيا التي تعبر عن مؤشرات الكالسيوم GCaMP باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر.

في الجسم الحي التصوير الفلوري متحد البؤر للنشاط العصبي الناجم عن التحفيز الحسي في يرقات الزرد المقيدة جزئيا

تعلم تقنية التصوير الحي للدماغ الجنيني في أسماك الزرد باستخدام الميكروسكوب متحد البؤر بدقة خلية واحدة. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة تطور الدماغ الفقاري والتغيرات الخلوية.

يعيش تصوير الدماغ الجنينية اسماك الزرد بواسطة الميكروسكوب متحد البؤر

استكشف المزيد من الفيديوهات