Name: الخلايا الظهارية الثديية شكل الماوس Mammospheres خلال التمايز المولد للبن (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-06T16:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 51 s
Description: اكتشف بروتوكول تحفيز التمايز المولد للبن في خلايا HC11 الظهارية الثديية للفأر من خلال تكوين كرات الثدي. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة تنظيم تمايز الغدد الثديية في المختبر.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

يؤيد إخراج الأموال من الكونغرس للبحوث الطبية منحة الصندوق (DAMD17 - 01-0264) إلى كاتلر ML والولايات المتحدة العسكرية لمعهد السرطان كاتلر ML العمل.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ونمت الخلايا HC11 لالتقاء لمدة 6 أيام في المتوسط ​​1640 RPMI تستكمل مع 10 ٪ مصل العجل الجنين ، 5μg/ml الأنسولين ، 10 HEPES مم ، 10ng/ml عامل نمو البشرة (EGF) لتأسيس اختصاصها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم غسلها مع الخلايا والحفاظ عليها في برنامج تلفزيوني وسائط النمو دون EGF لمدة 24 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للحث على تمايز المولد للبن وحضنت الخلايا في التمايز وسائل الإعلام ، أي RPMI مع ديكساميثازون (10 -6 م) ، والانسولين (5 ميكروغرام / مل) ، والبرولاكتين (5 ميكروغرام / مل) على النحو المشار إليه DIP. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بالإضافة إلى ذلك ذكرت في مجمع دبي للاستثمار بعد مرة ، وصورت mammospheres تعداد بواسطة المجهر النقيض من المرحلة باستخدام المجهر IX71 أوليمبوس مع كاميرا رقمية. </li></ol> ممثل النتائج : وتظهر انخفاض قوة التكبير العادية الثديية monolayers الخلايا الظهارية وmammospheres متعددة ، فضلا عن ارتفاع تضخم السلطة التي يتمتع بها mammosphere واحد في الشكل رقم 1 ، على التوالي. <img src="/files/ftp_upload/1265/1265fig1.jpg" alt="" /> الشكل 1. Mammospheres. (أ) ينبغي أن يكون عرض عادي الثديية monolayers الخلايا الظهارية كطبقة مسطحة من الخلايا متموجة. (ب) بعد 3-5 أيام من DIP التحفيز mammospheres متعددة تظهر. صورة التقطت 5 أيام آخر DIP الإضافة. (ج) التكبير العالي من حقل واحد يحتوي على mammospheres في 5 أيام آخر DIP الإضافة.

<ol><li>Blatchford, D. R., Hendry, K. A., Turner, M. D., Burgoyne, R. D., Wilde, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vectorial+secretion+by+constitutive+and+regulated+secretory+pathways+in+mammary+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Epithelial+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Vectorial secretion by constitutive and regulated secretory pathways in mammary epithelial cells.</a> Epithelial Cell Biol. 4, 8-16 (1995).</li>
<li>Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucocorticoid+induced+expression+of+connective+tissue+growth+factor+contributes+to+lactogenic+differentiation+of+mouse+mammary+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Glucocorticoid induced expression of connective tissue growth factor contributes to lactogenic differentiation of mouse mammary epithelial cells.</a> J Cell Physiol. 214, 38-46 (2008).</li>
</ol>

من أجل هذه التقنية لتكون ناجحة وأفضل نوعية ، ويجب المحافظة على الخلايا الظهارية في التقاء قبل أن يسببها مع الهرمونات المولد للبن. قد تكون هناك حالات حيث توجد العديد من mammospheres ، مما يجعل من الصعب تقدير. وهكذا ، لأغراض الكمية فمن الأفضل لتصوير mammospheres في نقطة الوقت الذي كان فيه عدد من mammospheres قادرة على أن تحسب. في حين أن هناك علامات الجزيئية المختلفة المستخدمة لتحديد درجة تمايز الخلايا الظهارية من ا...

<table><tbody><tr><td>RPMI</td><td>Invitrogen</td><td>21870076</td><td></td></tr><tr><td>مصل جنين البقر</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11550</td><td></td></tr><tr><td>إل-جلوتامين</td><td>GIBCO، المقدمة من Life Technologies</td><td>25030</td><td></td></tr><tr><td>البنسلين والستريبتوميسين (PenStrep)</td><td>GIBCO، من إنتاج Life Technologies</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>هيبس (Hepes)</td><td>Quality Biological, Inc.</td><td>118089060</td><td></td></tr><tr><td>عامل نمو البشرة (EGF)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td></td></tr><tr><td>إنسولين</td><td>GIBCO، من إنتاج Life Technologies</td><td>12585-014</td><td></td></tr><tr><td>ديكساميثازون</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1756</td><td></td></tr><tr><td>المجهر</td><td>شركة أوليمبوس (Olympus Corporation)</td><td>IX71</td><td></td></tr><tr><td>كاميرا رقمية</td><td>QImaging</td><td>Retiga 2000RV Fast 1394</td><td></td></tr></tbody></table>

الخلايا الظهارية الثديية شكل الماوس mammospheres خلال التمايز المولد للبن

Mouse Mammary Epithelial Cells form Mammospheres During Lactogenic Differentiation

قياس المظهري تستخدم عادة لتحديد درجة التمايز المولد للبن الثدي في الخلايا الظهارية الماوس الثقافات هو تشكيل خلية على شكل قبة هياكل ويشار إلى mammospheres<sup&gt; 1</sup&gt;. واستخدمت خط خلية HC11 كنظام نموذج لدراسة تنظيم تمايز المولد للبن الثدي سواء<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في الجسم الحي</em<sup&gt; 2</sup&gt;. الخلايا HC11 التفريق وتوليف بروتينات الحليب في الاستجابة للعلاج مع الهرمونات المولد للبن. في أعقاب نمو خلايا فأر HC11 الثدي الظهارية للالتقاء ، وبفعل تمايز المولد للبن من خلال إضافة مجموعة من الهرمونات بما في ذلك المولد للبن ديكساميثازون ، الانسولين ، والبرولاكتين ، كما أشار إلى مجمع دبي للاستثمار. صورت الخلايا HC11 يسببها للتمييز في بعض الأحيان تصل إلى 120 ساعة من الحث آخر تمايز وعدد mammospheres التي ظهرت في كل ثقافة كان تعداد. حجم mammospheres الفرد يرتبط مع درجة التمايز ويتم تصوير هذه الصور في الخلايا التفريق.

ويمكن وصف HC11 تمايز المولد للبن من تشكيل هياكل القبة ويشار إلى mammospheres. ويمكن تعداد هياكل بواسطة المجهر النقيض من المرحلة للمساعدة في قياس تمايز المولد للبن.

الخلايا الظهارية الثديية شكل الماوس Mammospheres خلال التمايز المولد للبن

إن أحد المقاييس المظهرية الشائعة لتحديد درجة التمايز المكون للحليب في مستنبتات الخلايا الظهارية للثدي في الفئران هو تكوين ...

مرحباً، أنا بيثاني موريسون من مختبر الدكتورة ماري لو كاتلر في قسم علم الأمراض بجامعة الخدمات الموحدة للعلوم الصحية. سنعرض لكم اليوم إجراءً لتطوير الكرات الثديية من خلايا HC 11 الظهارية الثديية للفئران. نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا لدراسة التمايز اللبني.دعونا نبدأ. لبدء هذا البروتوكول، يتم استزراع خلايا HC 11 حتى تصل إلى مرحلة التلاقي لمدة ستة أيام في وسط RPMI 1640، المكمل بـ 10% fetal calf serum و 5 µg/mL من الإنسولين، و 10 µM Heiss، و 10 ng/mL من epidermal growth factor EGF لتحقيق الكفاءة.لقد استُخدمت هذه الخلايا على نطاق واسع في مختبرات نانسي هاينز وبيرنارد جرونر لدراسة تنظيم التمايز الجيني داخل غطاء زراعة الأنسجة. بعد ذلك، تُغسل الخلايا بمحلول PBS وتُحفظ في أوساط نمو خالية من EGF لمدة 24 ساعة. وعقب هذه الحضانة، تُحضن الخلايا في أوساط تمايز تتكون من RPMI مُدعم بالديكساميثازون والأنسولين والبرولاكتين من أجل تحفيز التمايز اللبني بعد الحضانة.في أوساط التمايز، يُستخدم مجهر Olympus IX 71 مجهز بكاميرا رقمية لتصوير وتعداد الكرات الثدية (mamo spheres). ومن خلال مجهر تباين الأطوار، يتم تصوير وتعداد الكرات الثدية عدة مرات على مدار 120 ساعة بعد الحث. تُظهر هذه الصورة تكبيراً منخفض القوة لذاكرة طبيعية.يجب الحفاظ على خلايا الطبقة الأحادية للخلايا الظهارية في حالة تلاحم لمدة ثلاثة أيام تقريبًا قبل التحفيز بالهرمونات الجينية. فيما يلي نظرة على الكرات الثديية الجديدة التي تكونت بعد ثلاثة أيام من الحث تحت تكبير منخفض، حيث تبدأ في الظهور كبنى صغيرة تشبه القباب موزعة بشكل عشوائي عبر الخلايا الظهارية.مرة أخرى باستخدام قوة تكبير منخفضة. يظهر هنا عرض لعدة كرات ثدية (mammo spheres) تكونت بعد خمسة أيام من الحث. استمرت الكرات الثدية في النمو من حيث الحجم والعدد؛ وهنا، وتحت تكبير عالٍ، يمكن رؤية الخصائص التي تشبه الفقاعة أو القبة للكرة الثدية بوضوح.لقد أظهرنا لكم للتو كيفية تحفيز الخلايا الظهارية الثديية، بحيث تشكل كرات ثديية (mammospheres)، والتي تُستخدم كعلامات على التمايز الغدي. عند تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر الحفاظ على تلاقي الخلايا (confluence) قبل التحفيز، لأنه خلال هذه الفترة، تنتج الخلايا بروتينات مصفوفية تحتاج الخلايا إلى التفاعل معها من أجل الاستجابة الكاملة للهرمونات الغدية. ومن المهم أيضاً تذكر إزالة EGF من الوسط الغذائي قبل المعالجة، لأن EGF سيثبط عملية التمايز.هذا كل شيء. شكراً للمشاهدة، وبالتوفيق في تجاربكم.

mouse-mammary-epithelial-cells-form-mammospheres-during-lactogenic

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

هذه الطريقة توضح كيفية تشريح الثدي وتقييم وتطوير الغدة ظيفة من الفئران. ويتم تقييم الغدد الثديية رفعه لدرجة تطور استخدام جبل كامل بينما يتم تقييم قذف الحليب باستخدام الأوكسيتوسين المستندة إلى انكماش الخلية myoepithelial مقايسة.

تقييم التنمية وظيفة الغدة الثديية في نماذج الماوس

وصفت طريقة بسيطة لتحليل الآثار المترتبة على الأنسجة الليفية في الخلايا الظهارية المرتبطة بها. ويمكن الجمع بين هذه الطريقة وثلاثي الأبعاد زراعة الأنسجة تسهيل تحليل الخلايا بعد العزلة من 3D. هذه التقنية قابلة للتطبيق على خلايا مختلفة المحتملة الخبيثة، مما يسمح للدراسة منهجية للآثار ورم المرتبطة سدى على الخلايا السرطانية.

عزل الخلايا الظهارية الثديية من ثلاثي الأبعاد الخلايا المختلطة الجسم الشبه الكروي ثقافة المشارك

يصف هذا الفيديو عزل الخلايا الجذعية السرطانية عن خطوط خلايا سرطان الثدي. نقوم بزراعة هذه الخلايا الجذعية السرطانية لتوليد الأشعة السينية الأولية لتقييم التجديد الذاتي وحساب كفاءة تكوين الكرة ، مما يسمح بالمقارنة عبر كثافات البذر المختلفة.

توليد الأشعة السينية الأولية: تقنية لتحديد فاعلية الخلية

ثقافة الخلية الأولية باستخدام organoids الأنسجة سليمة توفر نظام النموذج الذي يحاكي متعددة الخلايا المكروية في الجسم الحي. وضعنا الأساسي الأنسجة الطلائية الثدي نموذج ثقافة خالية من مصل أن يديم مختلطة الأنساب زراعة الخلايا والمعارض التشكل متباينة، دون انقطاع الأنسجة الأنزيمية. تبقى organoids الثدي القابل للتطبيق ل&gt; 6 أشهر.

غير الأنزيمية، خالية من مصل زراعة الأنسجة من آفات الثدي ما قبل الغازية لتوليد عفوية من Mammospheres

يمكن لمقايسات الماموسفير العائم التحقيق في مجموعة فرعية من خلايا سرطان الثدي الشبيهة بالجذع والتي تعيش في ظروف التعليق وتظهر تكوين الأورام المحسنا عند زرعها في الفئران.  يوفر هذا البروتوكول مقياسا مناسبا في المختبر لقدرة تكوين الكرة ، وهو وكيل لتكوين الأورام في الجسم الحي ، مع تسهيل تحليل مشهد النسخ المرتبط بالساق.

Mammosphere تشكيل الفحص من الثدي البشري سرطان الأنسجة وخطوط الخلايا

بروتوكول المناعي غير المباشر الموضحة في هذه المقالة يسمح للكشف وتوطين البروتينات في الغدة الثديية الماوس. ويرد طريقة الكامل لتحضير عينات الغدة الثديية، لأداء المناعية، لصورة أقسام الأنسجة بواسطة المجهر مضان، وإعادة بناء الصور.

المناعي غير المباشر على أقسام المجمدة من الماوس الغدة الثديية

يصف هذا البروتوكول طرق لتنقية، كوانتيتاتينغ، وتوصيف الحويصلات خارج الخلية (إيفس) / إكسوسوميس من غير ملتصقة / الوسيطة الخلايا الظهارية الثديية واستخدامها لنقل الثديية تشكيل الغدة القدرة على الخلايا الطلائية الثديية اللمعية. إيف / إكسوسوميس المستمدة من الخلايا الظهارية الثديية الجذعية يمكن نقل هذه الخاصية الخلية إلى الخلايا التي تستوعب إيفس / إكسوسوميس.

نقل الغدة الثديية تشكيل القدرة بين الخلايا الظهارية الثديية القاعدية والخلايا اللمعية الثديية عن طريق الحويصلات خارج الخلية / إكسوسوميس

نحن نصف تقنيات الاستقراء التمايز من اثنين من خطوط الظهارية الثدي، HC11 و EpH4. في حين أن كلا تتطلب مصل ربلة الساق الجنين, الأنسولين, والبرولاكتين لإنتاج بروتينات الحليب, خلايا EpH4 يمكن أن تفرق تماما في الغلاف الشعاعي للثدي في ثقافة ثلاثية الأبعاد. وهذه النماذج التكميلية مفيدة لدراسات نقل الإشارات عن التمايز والأورام.

التمايز من الثدي الماوس HC11 وخلايا EpH4

هنا ، ونحن وصف تنفيذ وتفسير نتائج الفحص الكمي في المختبر ماموسفيري الذاتي تجديد.

القياس الكمي للتجديد الذاتي في ثقافات Murine ماموسفيري

الغدة الثديية هي بنية ثنائية الطبقات ، تتألف من الخلايا الظهارية الداخلية والداخلية. قدم هو بروتوكول لإعداد organoids باستخدام التربسينات التفاضلية. تسمح هذه الطريقة الفعالة للباحثين بالتلاعب بشكل منفصل مع هذين النوعين من الخلايا لاستكشاف الأسئلة المتعلقة بأدوارهم في شكل الغدة الثديية ووظيفتها.

جيل من الأرغن مامري الفسيفساء عن طريق التربسينات التفاضلية

يصف هذا البروتوكول طريقة إعداد اختبار تكوين الغلاف المابوسيري لدراسة جذع السرطان الناتج عن مثبط الاستماتة 5 (Api5) في الخلايا الظهارية للثدي غير المسببة للأورم. يتم تحليل الليزاتات المجمعة من الماموسفيرات من الجيل الأولي للبحث عن مؤشرات جذع مختلفة لتقييم تحفيز خصائص شبيهة بالخلايا الجذعية.

اختبار الماموسفير يكشف عن الجذع الناتج عن API 5 في خطوط خلايا ظهارية الثدي غير المسببة للورم

اكتشف بروتوكول تحفيز التمايز المولد للبن في خلايا HC11 الظهارية الثديية للفأر من خلال تكوين كرات الثدي. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة تنظيم تمايز الغدد الثديية في المختبر.

الخلايا الظهارية الثديية شكل الماوس Mammospheres خلال التمايز المولد للبن

استكشف المزيد من الفيديوهات