Name: جيل وحيدة الخلية معلقات من الأنسجة العصبية ماوس (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-07T19:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: تعلم إعداد معلقات وحيدة الخلية من أنسجة الدماغ الفأري باستخدام جهاز جنتلماكس ديسوسياتور. تحافظ هذه الطريقة على حيوية الخلايا والبروتينات السطحية للتحليل الدقيق.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

على العمل تحت ظروف معقمة ، فمن المستحسن لتنفيذ كافة الخطوات في تدفق الصفحي هود. 1. المواد <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأنسجة العصبية التفكك كيت (P) (المكونات : الحل 1،2 و 3 و 4 ، والتخزين الاحتياطي) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل فصل فلاتر </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> (اختياري) الخرز إزالة المايلين </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيتا المركابتويثانول </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> gentleMACS Dissociator </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> C أنابيب </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> MACSmix الأنبوب الدوار </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> HBSS (ث / س) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> HBSS (ث) </li></ul><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الحلول التالية قبل بداية البروتوكول : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هانكس "محلول الملح التخزين المؤقت دون كاتيونات الكالسيوم ثنائي التكافؤ 2 + أو Mg 2 + (HBSS (ث / س) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> HBSS ، ومعيار ، أي مع الكالسيوم والمغنيسيوم 2 + 2 + (HBSS (ث) </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اعتمادا على حاتمة مستضد الفائدة في التطبيقات اللاحقة ، إما استخدام غراء المستندة إلى الأنسجة العصبية التفكك كيت (P) أو التربسين المستندة إلى الأنسجة العصبية التفكك كيت (T). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الحلول التالية من أدوات الأنسجة العصبية التفكك : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحل 2 : إضافة بيتا المركابتويثانول إلى 0.067 ملي </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحل 4 : مسحوق يذوب في 0.7 مل مخزن تخزين (المقدمة في المجموعة) ، ومزيج بلطف (لا الدوامة) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ميكس انزيم 1 : 1.9 مل من محلول الماصة 2 و 50 ميكرولتر الحل 1 (كلاهما من المجموعة) في أنبوب جيم واحتضان لمدة 10-15 دقيقة عند 37 درجة مئوية. هذه هي كافية لفصل 400 ملغ من أنسجة المخ. </li></ol></li></ol> 2. عدم الربط بين الأنسجة العصبية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن أنسجة المخ في أنبوب يحتوي على 1 مل HBSS (ث / س) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل مخ الفأر في أنبوب C تحتوي على 1950 ميكرولتر من أنزيم ميكس محمى 1. (ملاحظة : كتب هذا البروتوكول ل≤ 400 ملغ ، ولكن يمكن تحجيمها وحدات التخزين حل لتستوعب ما يصل إلى 1600 ملغ من نسيج المخ في الأنبوب C) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع أنبوب C على لDissociator gentleMACS وتشغيل برنامج "m_brain_01". </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان مع التناوب (4 دورة في الدقيقة باستخدام أنبوب MACSmix الدوار) لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع أنبوب C على لDissociator gentleMACS وتشغيل برنامج "m_brain_02". </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال الخطوة تعد تفارق 30 ميكرولتر من أنزيم ميكس 2 في 400 ملغ من النسيج من خلال مزج بلطف 20 ميكرولتر من محلول 3 و 10 ميكرولتر من الحل 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة أنزيم ميكس 2 إلى C أنبوب عبر الحاجز كاب مختومة والمزيج بلطف دون vortexing. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الانبوب C مع التناوب لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية في حاضنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع أنبوب C على لDissociator gentleMACS وتشغيل برنامج "m_brain_03". </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الانبوب C مع التناوب لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية في حاضنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع عينة في الجزء السفلي من الأنبوب. </li></ol> 3. تصفية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختيار مرشح كبيرة بما يكفي للسماح للمرور على خلايا الفائدة. على سبيل المثال ، خلايا بركينيي كبيرة جدا لتمر من خلال تصفية 30 ميكرون ، ولكن سوف Prominin - 1 + الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ماصة suitable1000 ميكرولتر لإزالة الخلايا تشكل أنبوب C من خلال كاب الحاجز مختومة وتطبيقه على تصفية ما قبل الفصل في أنبوب جمع 15 مل. (ملاحظة : لأحجام أكبر عينة استخدام أنبوب جمع 50 مل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل فلتر مع 10 مل من HBSS (ث). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطرد المركزي الخلايا التي تمت تصفيتها في 300 x ج لمدة 10 دقيقة في RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend supernatent والمتوسطة في المخزن الخاص أو في الاختيار للتطبيقات اللاحقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإزالة الحطام الميلين ، واستخدام الخرز إزالة الميالين. </li></ol> 4. ممثل النتيجة : يرجى الاطلاع على الأرقام 1-3 <img src="/files/ftp_upload/1267/Fig_1.png" alt="الشكل 1"> الرقم. (1) أدى تفكك المخ مع Dissociator gentleMACS في خلايا قابلة للحياة بنسبة 97 ٪ ، كما يظهر تحليل تدفق cytometric. <img src="/files/ftp_upload/1267/1267fig2.png" alt="الشكل 2"> الرقم. 2 صورة المجهر ضوء تشكيل خلية neurosphere بعد فرز المغناطيسي استخدام الألغام المضادة للProminin MicroBeads - 1 بعد 7 أيام من زراعتها في MACS ® NeuroMedium تستكمل مع PLUS MACS B27 الملحق. وأعدت خلايا من مخ الفأر CD1 (P3) باستخدام الأنسجة العصبية التفكك كيت (P). <img src="/files/ftp_upload/1267/1267fig4.jpg" alt="الشكل 3.5"> الرقم. 3 المايلين في الحطام وحيدة الخلية تعليق يضعف إلى حد كبير بمعزل عن الخلية ، وإزالة الأنقاض التي الخرز إزالة النخاعين المايلين الزيادات فصل الخلايا الكفاءة. لفصل MACS استخدام الألغام المضادة للProminin MicroBeads - 1 ، وكان P22 مخ الفأر فصلها باستخدام الأنسجة العصبية التفكك كيت (P). وكانت الخلايا من التعليق وحيدة الخلية تستخدم إما مباشرة للانفصال ، أو قدمت إلى استنفاد المايلين باستخدام الخرز إزالة الميالين. مقارنة عينات من دون الانفصال عن ومع إزالة النخاعين ، يدل على أن نقاء أعلى للعينات مع إزالة النخاعين السابقة.

<ol><li>Hardt, O., Scholz, C., Küsters, D., Yanagawa, Y., Pennartz, S., Cremer, H., Bosio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+analysis+defines+differences+between+region-specific+GABAergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Gene expression analysis defines differences between region-specific GABAergic neurons.</a> Mol Cell Neurosci. 39, 418-428 (2008).</li>
<li>Lee, J. K., McCoy, M. K., Harms, A. S., Ruhn, K. A., Gold, S. J., Tansey, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulator+of+G-protein+signaling+10+promotes+dopaminergic+neuron+survival+via+regulation+of+the+microglial+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Regulator of G-protein signaling 10 promotes dopaminergic neuron survival via regulation of the microglial inflammatory response.</a> J Neurosci. 28, 8517-8528 (2008).</li>
<li>Környei, Z., Gócza, E., Rühl, R., Orsolits, B., Vörös, E., Szabó, B., Vágovits, B., Madarász, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astroglia-derived+retinoic+acid+is+a+key+factor+in+glia-induced+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Astroglia-derived retinoic acid is a key factor in glia-induced neurogenesis.</a> FASEB J. 21, 2496-2509 (2007).</li>
<li>Meylan, F., Davidson, T. S., Kahle, E., Kinder, M., Acharya, K., Jankovic, D., Bundoc, V., Hodges, M., Shevach, E. M., Keane-Myers, A., Wang, E. C., Siegel, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+TNF-family+receptor+DR3+is+essential+for+diverse+T+cell-mediated+inflammatory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The TNF-family receptor DR3 is essential for diverse T cell-mediated inflammatory diseases.</a> Immunity. 29, 79-89 (2008).</li>
<li>Skog, J., Würdinger, T., van Rijn, S., Meijer, D. H., Gainche, L., Sena-Esteves, M., Curry, W. T. Jr, Carter, B. S., Krichevsky, A. M., Breakefield, X. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma+microvesicles+transport+RNA+and+proteins+that+promote+tumour+growth+and+provide+diagnostic+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma microvesicles transport RNA and proteins that promote tumour growth and provide diagnostic biomarkers.</a> Nat Cell Biol. 10, 1470-1476 (2008).</li>
</ol>

الكتاب هم من موظفي شركة محدودة Miltenyi بيوتيك ، ألمانيا.

وDissociator gentleMACS يسهل إعداد موحدة وحيدة الخلية تعليق من الأنسجة العصبية في نظام مغلق. الأنسجة العصبية هي الأمثل للحفاظ على أطقم التفكك الحواتم المستضد اللازمة لتطبيقات أخرى مثل وimmunostainings immunomagnetic فصل الخلية 1-5. في هذا البروتوكول نظهر التفكك طيف الأنزيمية للدماغ فأر باستخدام Dissociator gentleMACS والأنسجة العصبية التفكك كيت (P) ، مما أسفر في خلايا قابلة للحياة 97 ٪. 100 ملغ من غلة الأنسجة العصبية بين 6 و 5x10 1x10 7 خلايا ، اعتمادا على عمر النسيج المضيف. وقد تم عزل المستهدفة Prominin - 1 + الخلايا باستخدام مضاد للProminin - 1 MicroBeads واقتيد بعد ذلك إلى الثقافة. يظهر بروتوكول لتكون أكثر فعالية مع استخدام إضافية من الخرز إزالة المايلين عند العمل مع الأنسجة العصبية المشتقة من P7&gt; الفئران.

جيل وحيدة الخلية معلقات من الأنسجة العصبية ماوس

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

داخل الجهاز العصبي ، وقد وصفت المئات من أنواع الخلايا العصبية والدبقية. لكل نوع من أنواع معينة من الخلايا في الدماغ أو النخاع الشوكي لديه ذخيرة من جزيئات سطح الخلية ، أو المحددات الجزيئية ، والتي يمكن من خلالها التعرف عليه ، وتميزت. حاليا ، تحديد الخلية قوية وتقنيات الفصل يتطلب أن تكون ولدت وحيدة الخلية مع الحد في الوقت نفسه الاستعدادات موت الخلايا وتدمير للبروتين سطح مميزة. يمكن للDissociator gentleMACS ، عندما تستخدم في تركيبة مع التربسين أو غراء المستندة مجموعات تفارق وفعالية وبلطف فصل أنسجة المخ مع الحفاظ الحواتم المستضد ، والحد من فقدان الخلية. ويتحقق إعداد موحدة وحيدة الخلية الايقاف باستخدام أنابيب C ، وتحسين برامج gentleMACS مسبقا. ويمكن علاج تولد مرة واحدة ، وحيدة الخلية وحيدة النسيلة تقارن مع تعليق مثل مكافحة Prominin 1 - MicroBeads ، التي تحدد الأسلاف العصبية ، أو تنقيتها باستخدام مزيد من الخرز إزالة الميالين.

الفصل بين أنواع خلايا من نسيج معين يتطلب المعلمات محددة لaggitation الأنسجة للحصول على كميات كبيرة من الخلايا ، قابلة للحياة زروع. وgentleMACS Miltenyi Dissociator يحسن هذه المهمة مع بروتوكول بسيطة وعملية. في هذا الكتاب هو شرح لاستخدام هذا الجهاز على أنسجة nerual.

وُصفت مئات الأنواع من الخلايا العصبية والدبقية داخل الجهاز العصبي. ويمتلك كل نوع محدد من الخلايا في الدماغ أو النخاع الشوكي...

داخل الجهاز العصبي، تم وصف المئات من أنواع الخلايا الدبقية العصبونية. ويمتلك كل نوع خلوي محدد في الدماغ أو النخاع الشوكي مجموعة من الجزيئات السطحية الخلوية أو المحددات الجزيئية التي يمكن من خلالها التعرف عليه وتوصيفه.تتطلب تقنيات تحديد الخلايا وفصلها القوية حالياً تحضير خلايا مفردة مع الحد في الوقت ذاته من موت الخلايا وتدمير البروتين السطحي المميز. ويمكن لجهاز gentle max associator، عند استخدامه بالتزامن مع مجموعات تفكيك تعتمد على trypsin أو pepane، أن يفكك أنسجة الدماغ بشكل فعال ولطيف مع الحفاظ على المستضدات المحددة (antigen epitopes) والحد من فقدان الخلايا. وبمجرد تحضير معلقات الخلايا المفردة، يمكن معالجتها بمرتبطات أحادية النسيلة مثل anti prominent one microbeads، التي تحدد الخلايا العصبية السلفية، أو تنقيتها بشكل أكبر باستخدام خرزات إزالة الميالين (myelin removal beads).مرحباً، اسمي ساندرا PeNAT. أنا مديرة مشاريع لمنتجات علوم الأعصاب في شركة Mil Biotech هنا في baggage Gabert بألمانيا. سأوضح لكم اليوم كيفية تحضير معلق خلوي أحادي من أنسجة دماغ الفأر باستخدام جهاز genix dis associator.يعتبر جهاز genix dis associator أداة يمكنها تفكيك مجموعة متنوعة من أنواع الأنسجة في بيئة معقمة ومغلقة، مما يلغي الحاجة إلى عمليات التفكيك الميكانيكي اليدوي المرهقة. لذا، فلنبدأ العمل. وبناءً على الحاتمة المستضدية (antigen epitope) المستهدفة في التطبيقات اللاحقة، استخدم إما طقم تفكيك الأنسجة العصبية القائم على البابائين أو طقم تفكيك الأنسجة العصبية القائم على التريبسين.بالنسبة لتجربة اليوم، نفضل استخدام طقم تفكيك الأنسجة العصبية P لأننا نرغب في عزل الخلايا الموجبة البارزة باستخدام خرزات anti prominent one الدقيقة. إن prominent one لا يتأثر بـ pepane ولا بـ trypsin، وفي مثل هذه الحالة، يكون طقم تفكيك الأنسجة العصبية P هو الخيار الأفضل. وقبل البدء في البروتوكول، يجب تحضير الكواشف والمحاليل الخاصة بهذا الطقم.قم بتجهيز مخزونك الخاص من محلول هانكس الملحي المتوازن HBSS الخالي من أيونات الكالسيوم وأيونات المغنيسيوم، ومحلول HBSS المحتوي على أيونات الكالسيوم والمغنيسيوم، و β-mercaptoethanol. ابدأ بتحضير المحلول الثاني والمحلول الرابع، ثم اتبع ذلك بتحضير خليط الإنزيم الأول. أولاً، أضف β-mercaptoethanol إلى المحلول الثاني ليصل إلى تركيز نهائي قدره 0.067 millimolar.يصبح المحلول الآن مستقراً لمدة تصل إلى شهر واحد عند تخزينه في درجة حرارة 4 °C. بعد ذلك، قم بإذابة المسحوق المجفف بالتجميد في القارورة التي تحمل ملصق "المحلول 4" (solution 4) باستخدام 0.7 mL من محلول التخزين المنظم، واخلطه برفق وتجنب استخدام جهاز الرج الميكانيكي (vortex).قم الآن بتحضير خليط الإنزيم الأول عن طريق سحب 1900 microliters من المحلول الثاني و 50 microliters من المحلول الأول ونقلهما إلى أنبوب C. هذه الكمية من المحلول تكفي لتفكيك 400 milligrams من الأنسجة، لذا إذا كنت ستقوم بتفكيك كمية أكبر، فقم بتحضير خليط إنزيم أول إضافي. يمكن معالجة حد أقصى قدره 1600 milligrams من أنسجة الدماغ في أنبوب C.يتم بعد ذلك تحضين مزيج الإنزيمات الأول في الأنبوب C عند درجة حرارة 37 °C لمدة تتراوح بين 10 إلى 15 دقيقة. ولبدء عملية التفكك، يتم سحب 1 mL من محلول HBSS الخالي من أيونات الكالسيوم والمغنيسيوم ونقله إلى الأنبوب. يوضع الأنبوب على الميزان، ثم تُضاف أنسجة الدماغ ويتم تسجيل كتلتها.يزن دماغ الفأر في اليوم الرابع من عمر ما بعد الولادة (P four) حوالي 0.2 جرام. بينما يزن دماغ الفأر البالغ حوالي 0.4 جرام، وذلك لجميع عينات الأنسجة التي تقل كتلتها عن 400 مليجرام. لذا فإن أحجام المحاليل التي سنستخدمها اليوم كافية.إذا كان وزن النسيج لديك يتجاوز 400 milligram، فقم بزيادة أحجام جميع الكواشف وفقاً لذلك، حيث يمكن معالجة ما يصل إلى 1600 milligram من النسيج في أنبوب C واحد. انقل دماغ الفأر إلى أنبوب C المجهز الذي يحتوي على 1,950 microliters من الإنزيم المسخن مسبقاً. اخلط المزيج وأغلق الغطاء بإحكام.الآن، ضع الأنبوب C على جهاز gen max associator بحيث يكون الغطاء لأسفل، وتأكد من وجود النسيج في منطقة العضو الثابت (stator). اختر البرنامج MCO brain O one وقم بتشغيل البرنامج. هذا هو البرنامج الأول من بين ثلاثة برامج ستقوم بتشغيلها أثناء عملية الفصل، وعندما ينتهي البرنامج.أزل الأنبوب C واحضن العينة لمدة 15 دقيقة عند 37 °C مع التدوير المستمر والبطيء. وباستخدام جهاز تدوير أنابيب max mix، يتم ضبط وضع تشغيل الجهاز على 4 RPM. بعد عملية الاحتضان الأولى، أعد الأنبوب إلى جهاز التفكيك (dissociation) مقلوباً وقم بتشغيل البرنامج M brain O2. وخلال مرحلة الارتباط التالية، قم بتحضير 30 µL من مزيج الإنزيم اثنين لكل 400 mg من النسيج عن طريق إضافة 20 µL من المحلول ثلاثة و10 µL من المحلول أربعة.عندما تنتهي دورة المزاوج الثانية، أضف 30 µL من مزيج الإنزيم الثاني إلى الأنبوب C مباشرةً عبر الفتحة المختومة بالحاجز الموجودة في مركز الغطاء. ولضمان التعقيم، اقلب الأنبوب C برفق للمزج ولا تستخدم جهاز الرج vortex. ثم أعد الأنبوب C إلى جهاز تدوير أنابيب max mix وقم بحضن العينة لمدة 10 دقائق عند 37 °C مع المزج بسرعة 4 RPM.بعد ذلك، يُعاد وضع أنبوب الطرد المركزي (CTU) في جهاز التفكيك GentleMax للمرة الثالثة والأخيرة، ويتم تشغيل البرنامج M brain oh three. وعند اكتمال البرنامج الثالث، توضع أنابيب الطرد المركزي على جهاز الدوران وتُحضن لمدة 10 دقائق إضافية عند 37 °C. الآن، يتم إجراء طرد مركزي للعينة لفترة وجيزة لتجميع الخلايا في قاع الأنبوب.نحن الآن مستعدون لترشيح الخلايا. اختر مصفاة خلايا بناءً على حجم نوع الخلايا المستهدفة. إذا كان قطر الخلايا التي ترغب في جمعها أكبر من 30 micrometers مثل خلايا kinji، فيجب أن يكون حجم المسام كبيراً بما يكفي لمرور أجسام الخلايا بهذا القطر.بالنسبة للخلايا الموجبة البارزة، سيكون استخدام مرشح سعة 30 ميكرومتر فعالاً. قم بإزالة النسيج المفكك من الأنبوب C باستخدام رؤوس ماصات سعة 1000 ميكرولتر التي يمكن إدخالها عبر فتحة الحاجز الملحومة في غطاء الأنبوب C. ثم ضع معلق الخلايا على مرشح الفصل المسبق الموضوع فوق أنبوب تجميع سعة 15 ميليلتر.قد تتطلب أحجام العينات الأكبر استخدام أنبوب سعة 50 ملليلتر. اترك معلق الخلايا يمر عبر المرشح، ثم اغسل المرشح بإضافة 10 ملليلتر من محلول HBSS المحتوي على أيونات الكالسيوم والمغنيسيوم.عند العمل مع كميات من الأنسجة تزيد عن 400 milligrams، استخدم ما يصل إلى 30 milliliters من HBSS الذي يحتوي على أيونات الكالسيوم والمغنيسيوم لغسل المرشح. الآن، قم بترسيب الخلايا في أنبوب التجميع عن طريق الطرد المركزي عند 300 Gs لمدة 10 minutes في درجة حرارة الغرفة، ثم اسحب السائل الطافي تماماً وأعد تعليق كتلة الخلايا المترسبة في المنظم أو الوسط المختار. في هذه المرحلة، يمكنك اختيار إزالة أي بقايا من الميالين لأنها قد تعيق عملية عزل الخلايا وتلوين الأجسام المضادة.لإزالة حطام الميالين، نقترح استخدام حبيبات إزالة الميالين. وخلاف ذلك، تكون الخلايا جاهزة للتطبيقات اللاحقة. يشير هذا المخطط النقطي القائم على صبغ يوديد البروبيديوم إلى أن 97% من الخلايا الموجودة في معلق خلوي مفرد من التواء فأر منزلي، مثل المعلق الذي تم إنتاجه في هذا الفيديو، هي خلايا حيوية.يمكن تنقية هذه الخلايا بشكل أكبر باستخدام حبيبات مغناطيسية مضادة لـ prominent لإنتاج خلايا عصبية سلفية، والتي يمكنها تكوين كرات عصبية عند زراعتها في وسط max neuro المكمل بـ B 27 plus، كما يظهر في هذه المخططات النقطية. وتتجلى فائدة معالجة المعلقات بحبيبات إزالة المايلين في الحصول على نسبة أعلى بكثير من الخلايا العصبية السلفية التي تعبر عن prominent 1 عن طريق عملية max separation بعد استنزاف المايلين من معلق الخلايا المفردة.لقد أظهرتُ لكم للتو كيفية تحضير معلق خلايا مفردة من أنسجة دماغ الفأر باستخدام عملية التفكيك الجينية وطقم تفكيك الأنسجة العصبية. عند تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تحضير جميع المحاليل بشكل مناسب وفقاً للخيار الصحيح من طقم تفكيك الأنسجة العصبية، سواء كان T أو P. يرجى الرجوع إلى الملحوظة التطبيقية لـ NDK أو ورقة البيانات. باستخدام هذه الطريقة، يمكن معالجة المقاطع النسيجية للجنين وكذلك الأنسجة D أو الدماغ الكامل تحت ظروف معقمة وبطريقة موحدة وموفرة للوقت.شكراً لكم على المشاهدة، مع تمنياتنا لكم بالتوفيق في تجاربكم.

generation-of-single-cell-suspensions-from-mouse-neural-tissue

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

هذا الفيديو يصف الطريقة المستخدمة لعزل neuroprecursors من القشرة النامية من الفئران الجنينية. ويرد الإجراء لإزالة الأجنة من الرحم ، وتشريح الانسجة القشرية ، وهضم القشرة الدماغية المعزولة.

ثقافة العصبية الماوس السلائف الخلايا الجذعية

ووصف طريقة بسيطة وموثوق بها عن العزلة وثقافة من الخلايا الجذعية العصبية من أنسجة الأجنة البشرية تجاهل القشرية. ويمكن استخدام الثقافات المستمدة من الاضطرابات العصبية يعرف الإنسان المرضية لتوصيف العمليات الخلوية والجزيئية ، فضلا عن توفير منبر لتقييم فعالية العقاقير.

جيل من الخلايا الجذعية العصبية من الأنسجة الجنينية البشرية المهملة القشرية

يوضح هذا الفيديو طريقة لعزل الخلايا الجذعية من مخيخ الفأر بعد الولادة وتمايزها إلى خلايا عصبية. يتم تنقية الخلايا الجذعية من معلق الخلية المعزولة باستخدام حبات مغناطيسية مغلفة بالأجسام المضادة ويتم زراعتها لتشكيل المجالات العصبية. ثم يتم الحفاظ على المجالات العصبية في وسط تمايز لتوليد الخلايا العصبية.

عزل الخلايا الجذعية من مخيخ الفأر بعد الولادة والتمايز إلى خلايا عصبية

يوضح هذا الفيديو بروتوكولا للحصول على تعليق خلية واحدة قابل للحياة للغاية من الحصين في دماغ الفأر باستخدام مزيج من التفكك الميكانيكي الآلي ومزيج من الإنزيمات للمساعدة في الهضم الأنزيمي.

الحصول على معلق أحادي الخلية من أنسجة الحصين في الفأر

يوضح الفيديو تحضير معلق أحادي الخلية للخلايا المناعية من أنسجة دماغ الفئران. يتضمن الهضم الأنزيمي لإطلاق الخلايا من أنسجة المخ ، يليه الطرد المركزي المتدرج للكثافة لعزل الخلايا المناعية بناء على كثافتها للحصول على تعليق الخلية الواحدة.

تحضير معلق أحادي الخلية للخلايا المناعية من أنسجة دماغ الفئران

نحن هنا وصف بروتوكول مفصلة للجيل في وقت واحد من مزارع الخلايا العصبية السلائف، إما الطبقات الوحيدة ملتصقة أو neurospheres، من منطقة subventricular والتلفيف المسنن من الفئران الكبار الفردية.

ماوس واحدة، واثنين من الثقافات: العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية العصبية من المناطق العصبية اثنان من الفئران الفردية

يسمح إنشاء أنظمة ثقافة لتوسيع الخلايا الجذعية العصبية البالغة (aNSCs) بفحص وتطبيق الخلايا الجذعية العصبية البالغة للعلاج. تم التعرف مؤخرا على المنطقة تحت الثفنسية (SCZ) كمنطقة جديدة لتكوين الخلايا العصبية في الفئران البالغة. هنا ، يتم وصف طرق عزل وتوسيع وتمايز SCZ-aNSCs.

العزلة والثقافة من الخلايا الجذعية البالغة العصبية من المنطقة تحت الثفني ماوس

هنا، نحن نقدم تقنية microsurgical رواية لعزل الخلايا الجذعية العصبية من الماوس الجنين ه13 ganglionic نيافة.

العزلة والثقافة من الخلايا الجذعية الجنينية الماوس العصبية

هنا ، نصف نظام nucleofection المصمم لتعزيز كفاءة توصيل الجينات في الخلايا الجذعية العصبية الموسعة (NSCs) المعزولة من منطقة تحت البطين للفئران البالغة. تظهر النتائج أن هذه الطريقة تحسن بشكل كبير اضطراب الجينات في NSCs ، متجاوزة فعالية بروتوكولات النقل التقليدية وتعزز معدل بقاء الخلية.

عزل وتوسع ونواة الخلايا الجذعية العصبية من منطقة تحت البطين الفئران البالغة

للتحقيق في الاستجابة المناعية لاضطرابات الدماغ ، يتمثل أحد الأساليب الشائعة في تحليل التغيرات في الخلايا المناعية. هنا ، يتم توفير بروتوكولين بسيطين وفعالين لعزل الخلايا المناعية من أنسجة دماغ الفئران ونخاع عظم الجمجمة.

عزل الخلايا المناعية عن دماغ الفأر والجمجمة

تعلم إعداد معلقات وحيدة الخلية من أنسجة الدماغ الفأري باستخدام جهاز جنتلماكس ديسوسياتور. تحافظ هذه الطريقة على حيوية الخلايا والبروتينات السطحية للتحليل الدقيق.

جيل وحيدة الخلية معلقات من الأنسجة العصبية ماوس

استكشف المزيد من الفيديوهات