خلق الفئران التجريبية تمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني مع إيلاستاز

تبدأ هذه العملية الجراحية المستخدمة لإنشاء تمدد الأوعية الدموية في الشريان الأورطي البطني بعمل شق جراحي في خط منتصف البطن. يتم إزاحة محتويات البطن جانباً وربط جميع فروع الشريان الأورطي، ثم يتم ربط الجزأين الداني والقاصي من الشريان الأورطي.

يتم ثقب القلب باستخدام إبرة وتوصيل كمية وافرة من إنزيم elastase عبر أنبوب بولي إيثيلين مدبب حرارياً. وعند اكتمال عملية التوصيل، يتم إغلاق قطع الشريان الأورطي (AOR autotomy). ثم تُزال الربطات، ويمتلئ الشريان الأورطي بالدم ويُغلق التجويف البطني.

يُترك الفأر بعد ذلك ليتعافى، وسيتوسع تمدد الأوعية الدموية بشكل كامل خلال 14 يوماً. مرحباً، أنا جوليان أسما من مختبر الخلايا الجنينية في قسم طب القلب والأوعية الدموية بجامعة ستانفورد. سأعرض لكم اليوم إجراء تحفيز تمدد الأوعية الدموية الأبهرية البطنية التجريبي الجديد عن طريق حقن elastase.

نستخدم هذا الإجراء في مختبركم لدراسة تمددات الأوعية الدموية (PEs) في الشريان البطني. لذا، لنبدأ العمل. لبدء تجاربكم، اختاروا الفأر المطلوب، على سبيل المثال، فأر من سلالة C 57 black six، وقوموا بتخديره عن طريق استنشاق iso fluorine حتى يفقد الفأر وعيه. يرجى العلم أن سلالات الفئران المختلفة ستتباين في معدل نمو تمدد الأوعية الدموية.

أخرج الفأر المخدر من الحجرة في محطة تحضير ذات إضاءة كافية. قم بحلاقة الفراء من منطقة البطن من نهاية عظمة العجز إلى جذور الساقين. استخدم كريم إزالة الشعر لإزالة الشعر الزائد.

قم بفرك الجلد العاري باستخدام كحول بتركيز 70% حتى يتم إزالة جميع الشعيرات من المنطقة المحلوقة. بعد ذلك، قم بفرك الجلد ثلاث مرات على الأقل باستخدام Betadine، مع المسح بالكحول بين عمليات الفرك. الآن، ضع الفأر في وضعية الاستلقاء الظهري على مجال الجراحة للحفاظ على فقدان الفأر للوعي.

أثناء الجراحة، ضع أنبوباً على أنفه لإيصال iso fluorine بنفس معدل التدفق المستخدم لتحريض فقدان الوعي. يُحفظ elastase على الثلج ويُسحب في محقنة، ثم تُثبت المحقنة وتوضع بجانب الحقل الجراحي ويتم توصيل القسطرة.

من المهم أن تظل طرف القسطرة معقمة، ويتم ذلك بوضع الطرف في قارورة معقمة. وقبل البدء في فتح جسم الفأر، تأكد من استخدام تقنية تعقيم دقيقة. ابدأ بارتداء قفازات معقمة.

يجب تعقيم الأدوات الجراحية والمقصات وحوامل الإبر والملاقط قبل إجراء الجراحة. خذ لحظة لمراجعة تحضيراتك ومحاولة معالجة أي مصادر تلوث محتملة أخرى أثناء الجراحة. وفي حال اختراق التعقيم أثناء الإجراء، أعد تعقيم أداتك باستخدام جهاز التعقيم بالخرز الساخن.

بمجرد تحضير كل شيء، ابدأ الجراحة بعمل شق بطني طولي في منتصف التجويف البطني. قم بإزاحة محتويات البطن إلى مساحة بطنية فارغة أو تراجع بها خارج البطن باستخدام شاش معقم لكشف الشريان الأبهر البطني. الآن استخدم الملقط لعزل الشريان الأبهر البطني بعناية من مستوى الوريد الكلوي الأيسر وصولاً إلى نقطة التفرع.

في الحالة الموضحة، يوجد فرع واحد يقع فوق موقع ربط الأبهر وبالتالي لا يحتاج إلى ربط. إذا وجدت فروع أبهرية بين موقعي الربط الشرياني القاصي والداني، فقم بربط هذه الفروع على مسافة سنتيمتر واحد من نقطة التفرع باستخدام غرز جراحية من نوع 10 aut، وفي الأجزاء الدانية والقاصية من الأبهر، ضع ربطات حريرية مؤقتة مقاس 6.0 لإيقاف تدفق الدم.

قم الآن بإجراء بتر عند التفرع. ابدأ بثقب التفرع باستخدام إبرة مقاس 30 gauge. يمكن إدخال أنبوب بولي إيثيلين مستدق مسخن من خلال البتر الذاتي في AOR وتثبيته بعقدة.

استخدم الملقط لإدخال الأنبوب بعناية وبرفق في الشريان الأبهر. احذر من كشط الطبقة البطانية باستخدام ضغط قدره 100 milliliters. تم تروية الشريان الأبهر بمادة elastase من كيس محلول ملحي معلق على ارتفاع 136 centimeters.

تأكد من عدم وجود هواء في الأنبوب، وإلا فلن يكون الضغط دقيقاً. يحتوي المحلول الملحي على 4.5 وحدة لكل ملليلتر من الإيلاستاز البنكرياسي الخنزيري من النوع الأول (Type one porcine pancreatic elastase)، ويجب أن يملأ الشريان الأبهر في غضون خمس إلى 15 دقيقة.

أثناء عملية التروية، يتوسع الشريان الأورطي عادةً إلى حوالي 140% من قطره الأصلي. وعند الانتهاء، قم بإزالة جهاز التروية وإغلاق شق الشريان الأورطي باستخدام خيط جراحي من مقاس 10 aught لتجنب حدوث تضيق. وبعد إغلاق الشق، يجب أيضاً إزالة الرباط القاصي.

إذا كان النزيف من الفتحة التي تم إصلاحها قليلاً أو معدوماً، يتم إزالة الرباط الداني. أما في حالة وجود نزيف، فتوضع رباطات مؤقتة إضافية من نوع 6.0 soak عند الجزئين الداني والقاصي من الشريان الأبهر، ويُضاف غرزة واحدة أخرى لإغلاق الفتحة في الشريان الأبهر تماماً. سيمتلئ الشريان الأبهر المتوسع بالدم فور إزالة الرباط الداني.

بمجرد الانتهاء من الإجراء المتبع للشريان الأورطي، أعد الأمعاء إلى التجويف البطني. إذا كانت الأمعاء قد سُحبت للخارج، فإنها ستنزلق للداخل ككتلة واحدة ولن تكون هناك حاجة للقلق بشأن ترتيبها الهندسي. وبعد وضع جميع الأعضاء في أماكنها، يمكن الآن إغلاق الجرح الخارجي على طبقتين باستخدام ست غرز جراحية من خيوط النايلون والبولي بروبيلين.

الآن، قم بتخدير الفأر موضعياً باستخدام مخدر مثل قطرة واحدة من ICAN بتركيز 0.25% لكل سنتيمتر من الشق الجراحي. كما يجب إعطاء جرعة واحدة من مضاد الالتهاب Carin بجرعة 5 mg/kg عن طريق الحقن تحت الجلد. وبذلك تكون الجراحة قد اكتملت، ويجب وضع الفأر في منطقة دافئة حتى يستعيد وعيه.

عادة ما يحدث الإفاقة في غضون 15 دقيقة. وعندما يستعيد الفأر وعيه، يُعاد إلى قفص منفرد وتتم مراقبته بشكل دوري خلال فترة تعافيه. وبعد الإجراء، يتوسع الشريان الأورطي عادةً ليصل إلى حوالي 140 إلى 160% من قطره الأصلي.

يُلاحظ هذا التوسع الأولي مع استقرار حتى اليوم السابع. ثم يحدث توسع ثانوي سريع بين اليوم السابع واليوم 14. وفي اليوم 14، يمكن ملاحظة تمدد الأوعية الدموية في الأبهر تحت الكلوي.

لقد أوضحت لكم للتو كيفية تحفيز تمدد الأوعية الدموية في الشريان الأورطي البطني باستخدام الإيلاستاز في الفئران. عند إجراء هذه العملية، من المهم تجنب تكوين أي جلطات دموية داخل الشريان الأورطي النازل. وهذا كل شيء.

شكراً للمشاهدة، ونتمنى لكم التوفيق في تجربتكم.