Name: تصور القلب النابض في ذبابة الفاكهة /em (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-09-28T21:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 15 s
Description: تعلم تقنيات تصور القلب النابض في ذبابة الفاكهة Drosophila للمراحل اليرقية والبالغة. تُظهر هذه الطرق كيفية فحص وظائف القلب في علم الأحياء التنموي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ويدعم KO عن طريق منحة من جمعية القلب الاميركية.

قبل أن تبدأ قلوب الكبار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعد طازجة الدملمف الاصطناعي (ه) محلول يحتوي على 108mM نا + ، 5mM K + ، 2mm وكا 2 + ، 8MM MgCl 2 ، 1MM ناه 2 ص 4 ، 4mM NaHCO 3 ، السكروز 10MM ، طرهالوز 5mm ، و HEPES 5mM (الرقم الهيدروجيني 7.1 ، كل الكواشف من كيماويات سيغما). وينبغي أن يضاف إلى السكروز وطرهالوز الهجري من الحلول الأسهم المبردة فقط قبل استخدامها من أجل منع التلوث الجرثومي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ه لتحقيق درجة حرارة الغرفة والأوكسجين الحل بواسطة فقاعات في الهواء لا يقل عن 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب الشعيرات الدموية الدقيقة عدة (مثل الزجاج الشعيرات الدموية ، 100ul ، VWR) المطلوبة لإزالة الدهون. </li></ol> اليرقات قلوب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Sylgard المغلفة coverslips : استخدام المسواك ، ونقل عن 70μl - 50 من الصعود إلى حل Sylgard ساترة 22x22mm. السماح لتتصلب Sylgard عند 65 درجة مئوية خلال الليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد Broadie والعازلة للباتي (135mM كلوريد الصوديوم ، بوكل 5mm ، و 4mM MgCl 2 ، 2mm وCaCl 2 ، TES 5mm ، و السكروز 36mM ؛ الحموضة 7.15 انظر Broadie وباتي ، 1993). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الأدوات اللازمة لتطبيق histoacryl الغراء. أولا ، سحب الشعيرات الدموية الدقيقة عدة (مثل العلوم منتجات GB100T8P). توصيل الطرف ماصة 1.5ml مع أنابيب بلاستيكية صغيرة (Tygon ، 1 / ​​32 &quot;) وذلك بإضافة أصغر في نهاية الأنبوب. إدراج الشعرية مع فتح على نطاق واسع إلى الطرف الآخر. تحميل الشعرية مع الغراء Histoacryl بواسطة غمس الشعرية في قطرة من الصمغ وطيف الامتصاص في غيض من البلاستيك. عند العمل مع الغراء ينبغي للمرء أن يكون الزجاج second الشعرية في متناول اليد لإزالة الغراء الزائد من غيض من الغراء الشعرية. الصمغ السائل حتى يلامس مخزنة المالحة حيث انها سوف تتصلب في غضون بضع ثوان. ومع ذلك ، فإنه لا يزال عادة من البلاستيك طويلة بما يكفي لإزالتها من طرف الغراء الشعرية أو إلى حين تطبيقه على العينة. </li></ol> شبه سليمة القلب من ذبابة الفاكهة ذبابة الكبار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكبار الذباب ذبابة الفاكهة وذبابة تخدير مع قيلولة (كارولينا البيولوجي شركة التموين) لمدة 2-5 دقائق. ويجب الحرص على عدم ترك الذباب يطير في قيلولة لمدة التعرض. ويمكن أيضا التعرض للبرد على المدى القصير يمكن استخدامها لتخدير الذباب ولكن لا ينصح CO 2 كما انها تعد تأثيرات دائمة على معدل ضربات القلب والنظمية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توضع الذباب تخدير الجانب الظهري أسفل ، في صحن بيتري مغلفة بطبقة رقيقة من الفازلين. إهاب مسعور في الأجنحة والجسم عكسية &quot;العصا&quot; لجيلي ولكن يمكن أن يكون repositioned الذبابة إذا لزم الأمر. هذا يصبح من المهم خصوصا خلال التلاعب اللاحقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم إجراء خفض الأولية باستخدام زوج المنحني من مقص الربيع (Roboz # 5611). توضع شفرات مقص تحت الساقين وأسفل الزاوية نحو السطح الظهري من الصدر بالقرب من الرقبة. تتم إزالة الرأس والحبل البطني العصب ، والساقين مع خفض واحد. ثم الغارقة في إعداد الدملمف ، الاوكسيجين الاصطناعي (ه) حل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقص الربيع هو إزالة غيض الخلفي من البطن (يتألف من شرائح البطن 7 و 8) مع خفض واحد. هذا يوفر وصولا لجعل التخفيضات الجانبية على طول حافتي البطن ويعمل على قطع الاتصال بين الوتر الخلفي وبشرة البطن. ثم تتم إزالة رفرف تحررت من بشرة البطن البطني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الخطوات 3 و 4 وقطعت الاتصالات الأمامي والخلفي من القناة الهضمية حتى تقام الآن في مكان أعضاء البطن فقط tracheols. ويمكن عادة في الأمعاء وأعضاء أخرى في البطن يمكن إزالة باعتبارهم كتلة واحدة باستخدام الملقط المجوهرات (Roboz ، # 55) ولطيف التجاذبات. إزالة الأحشاء الداخلية يكشف عن أنبوب القلب النابض لا تزال تعلق على بشرة الظهرية محاطا بالجثث الدهون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الهيئات الدهون غير شفافة تماما في ضوء المجهر بالتالي فإنه غالبا ما يكون ضروريا لإزالة بعض هذه الدهون من أجل أن نرى الأنبوب القلب بشكل واضح. ويتم تحقيق هذا عن طريق شفط الدهون باستخدام تقنية الزجاج مرسوم بدقة الشعيرات الدموية. الشعيرات مصنوعة باستخدام ماصة القياسية مجتذب (مثلا سوتر P - 97 الماصة بولير) ويتم إدراجها بعد ذلك في أنابيب بلاستيكية (Tygon ، 1 / ​​16 &quot;) المرفق مصدر فراغ. ويستخدم هذا النظام لشفط الدهون الزائدة من خارج الأنبوب حول القلب. قوة الشفط يتناسب مع القطر تلميح لذلك ينبغي ألا ماصات مع نصائح أكبر من 40 ميكرون في القطر يتم استخدامها. يجب توخي الحذر الشديد لتجنب لمس القلب نفسه ، ولأن الجزء الخلفي من القلب لا يزال هشا للغاية وينبغي تجنب المنطقة تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتعرض الآن للقلب الكبار أنبوب ذبابة الفاكهة ، وينبغي أن يكون الضرب. إذا لزم الأمر يمكن أن يكون repositioned قلب بشرة والتي توليها رفع بلطف إهاب من الفازلين وتدك بعناية أسفل الظهر ، وتجنب مجددا وجود أي اتصال مع أنسجة القلب. في روينبغي أن يكون محل وجهة نظره في حل الاستحمام مع إعداد AHL الطازجة. وينبغي أن يسمح هذا الإعداد للتوازن لمدة 20-30 دقيقة مع الأوكسجين قبل أي تلاعب. وينبغي إذا إعداد أن تستمر لفترة أطول من 60 دقيقة يكون perfused مع AHL الطازجة. </li></ol> يرقات ذبابة الفاكهة شل حركة لتسجيل البصرية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع قطرة من الصمغ Histoacryl على مقربة من كل ركن من أركان coverslips Sylgard. إضافة 50μl من B &amp; B العازلة إلى قطرات الغراء التي من شأنها أن تزيد على الفور. ملء الفراغ بين بقع لصقها مع B &amp; B -- الغراء سيبقي عازلة على الشريحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أخذ يتجول يرقة L3 وضعه على قطعة من المناديل الورقية المبللة على الجليد لمدة 2 دقيقة. هذا وسوف تبطئ حركتها. ثم نقل اليرقة إلى العازلة وتوجيهه مع الجانب الظهري حتى (وهذا هو جانب من اليرقة التي تفتقر إلى أحزمة سنينة). بسرعة تطبيق بعض الغراء بين منطقة الرأس وSylgard و. سوف الغراء تتصلب بسرعة كبيرة ، ومنع رئيس اليرقة من التحرك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الملقط انتزاع بعناية من قبل الحيوان spiracles الخلفي وتمتد برفق. إصلاح يرقة في هذا الموقف من خلال تطبيق الغراء على طول جانبي يرقة في النصف الخلفي. للحد من حركة مزيد من إهاب من عضلات جدار الجسم ، وإضافة المزيد من الغراء في جنباته من الحيوان. هو ثابت الآن يرقة في هذا الموقف. يمكن وضعها في ساترة طبق بيتري صغيرة مليئة AHL أو برنامج تلفزيوني. ويمكن الآن أن تسجل دقات القلب دون تدخل من الحركات جدار الجسم. </li></ol> ممثل النتائج : وشبه سليمة القلب ذبابة الفاكهة الكبار فاز إيقاعي لعدة ساعات بعد تشريح عند الاحتفاظ بها في ه ، طازجة الاوكسيجين (انظر البيانات إضافي ، Ocorr ، وآخرون ، 2007). ويرد في الفيلم الممثل سبيل المثال 1. قلوب من 3 يرقة الذباب طور مرحلي الثالثة والشباب (1 -- 3 أسابيع eclosion آخر) يحمل عموما ضربات القلب منتظمة في معدلات بين 1 -- 3 هرتز. الذباب مضى عليها أكثر من 3 أسابيع ، عادة ، أكثر عدم اتساق نبضات القلب ، ومع ذلك ، فإن هذه القلوب لا تزال قادرة على ضرب عفويا لساعات في AHL الاوكسيجين. الذباب في قلوب الكبار التي تضررت نتيجة لإجراء تشريح عادة ما تظهر مناطق المترجمة من انقباض المتطرفة التي هي غير قادرة على الاسترخاء. ونادرا ما لاحظت معدلات ضربات القلب أبطأ من 1 هرتز في الذباب الأصغر سنا من 3 أسابيع من العمر ، وبالتالي تعتبر هذه الأعمال التحضيرية للتلف ويتم التخلص منها. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1425/MOVIE1.avi">انقر هنا لتحميل الفيلم 1.</a> -- A أسبوع واحد البالغين من العمر wildtype ذبابة (ث سلالة المختبرية 1118) تبين تعرض أنبوب القلب البطن (الأمامية إلى اليسار). علما العادية ، والانقباضات الإيقاعية. مناطق معتمة في الزاوية اليمنى العليا هي ما تبقى من هيئات الدهون في منطقة البطن ؛ الخلايا جولة على جانبي من القلب هي خلايا التامور.

<ol><li>Ocorr, K., Reeves, N., Wessells, R. J., Fink, M., Chen, H. -S. V., Akasaka, T., Yasuda, S., Metzger, J., Giles, W., Posakony, J. W., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KCNQ+potassium+channel+mutations+cause+cardiac+arrhythmias+in+Drosophila+that+mimic+the+effects+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">KCNQ potassium channel mutations cause cardiac arrhythmias in Drosophila that mimic the effects of aging.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 3943-3948 (2007).</li>
<li>Broadie, K. S., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+embryonic+neuromuscular+synapse+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Development of the embryonic neuromuscular synapse of Drosophila melanogaster.</a> J Neurosci. 13, 144-166 (1993).</li>
</ol>

لقد أثبت نموذج ذبابة الفاكهة إلى أن تكون أداة قوية الجينية التي تم استخدامها لمعالجة مجموعة متنوعة من الأسئلة العلمية التي تتراوح بين التنمية الجنينى على التعلم والذاكرة. وقد تم مؤخرا استخدام هذا النموذج الحي تنوعا للتحقيق في علم الوراثة وظيفة القلب في الطيران. وقد اعتمد عدد من المحاولات لتحديد فسيولوجيا القلب في ذبابة الفاكهة الكبار على الملاحظات التي أبديت في الذباب سليمة من خلال بشرة البطن. وقد اعتمد معظم هذه المناهج على الملاحظة البصرية أو تسجيلات للتغيرات في الارسال شدة الضوء...

<table><tbody><tr><td>مقصات تشريح دقيقة بنوابض (منحنية)</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5611</td><td>جيدة للقصات الكبيرة (الخطوة 3)</td></tr><tr><td>مقصات تشريح دقيقة بنوابض (مستقيمة)</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5620</td><td></td></tr><tr><td>ملقط Dumont #55</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>ملقط Dumont #5</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-10</td><td></td></tr><tr><td>شعيرات زجاجية، 100ul</td><td>VWR international</td><td>53432-921</td><td></td></tr><tr><td>شعيرات زجاجية، دقيقة</td><td>Science Products</td><td>GB100T8P</td><td></td></tr><tr><td>جهاز سحب الماصات</td><td>Sutter Equipment</td><td>P-97</td><td>يعمل كل من أجهزة سحب الماصات الأفقية والرأسية</td></tr><tr><td>أنابيب بلاستيكية</td><td>Tygon</td><td>قطر داخلي 1/16&amp;#8221;</td><td>للشعيرات سعة 100&amp;#x03BC;l</td></tr><tr><td>أنابيب بلاستيكية</td><td>Tygon</td><td>قطر داخلي 1/32&amp;#8221;</td><td>للشعيرات الصغيرة</td></tr><tr><td>لاصق الأنسجة Histoacryl&amp;#174;</td><td>B. Braun Medical</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

تصور القلب النابض في ذبابة الفاكهة</em

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

و<em&gt; ذبابة الفاكهة</emوقد برزت&gt; القلب مؤخرا كنظام نموذجا جيدا لدراسة الآليات الوراثية الخلوية والجزيئية الكامنة وراء وظيفة في قلوب عضلي. والخطوة الرئيسية في دراسة وظائف القلب في الطيران هو إيجاد وسيلة للوصول إلى قلب بطريقة تحافظ على وظيفتها عضلي في حين لا يزال يسمح لاحظ الجهاز قلب ينبض وتسجيلها. طريقتين مختلفتين لمراقبة وتسجيل القلب النابض في كل يرقة وتعليم الكبار<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; يتم وصفها هنا. لدينا شبه سليمة باستخدام الذباب إعداد تصور واضح لا أخلاقي يسمح للقلب في منطقة البطن دون تدخل من إهاب المصطبغة والمغطي الهيئات الدهون. لتسجيل ضربات القلب اليرقات من الضروري لشل حركة اليرقة ، الذي يقلل من الحركات جدار الجسم مما يقلل من الحركات القلب التي لا ترتبط مع تقلصات عضلة القلب. منهجيات لدينا انتاج مستقر وبالغ الاستعدادات القلب اليرقات التي يمكن أن تغلب على لساعات في معدلات هرتز 1-3.

التقنية اللازمة لوضع الرؤية والقلب النابض في اليرقات وتعليم الكبار<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; يتم عرض. كل مرحلة من مراحل الحياة يتطلب منهجية مختلفة.

برز قلب ذبابة الفاكهة (Drosophila) مؤخراً كنظام نموذجي جيد لفحص الآليات الجينية والخلوية والجزيئية التي ترتكز عليها الوظيفة في ...

سيتم عرض تقنيتين هنا لتصوير قلب نابض في ذبابة Drosophila من أجل تشريح قلب الذبابة البالغة. أولاً، يتم إزالة الرأس والصدر عن طريق قطع واحد على طول الخط الموضح. بعد ذلك، يتم إزالة الأعضاء التناسلية وفتح تجويف الجسم البطني باستخدام الملاقط، ثم يتم إزالة الأمعاء، وفي حالة أنثى الذبابة، يتم إزالة المبيضان.يتم شفط الجسم الدهني البطني في القطعتين البطنيتين الثالثة والرابعة بعناية للكشف عن قلب الحشرة البالغة من أجل تثبيت قلب اليرقة. يتم تثبيت يرقة واحدة موضوعة في محلول منظم عن طريق وضع غراء histo acral أولاً حول منطقة رأس اليرقة. تُمد اليرقة بلطف ويُوضع المزيد من الغراء على النهاية الخلفية، ثم على جانبي جدار جسم اليرقة.مرحباً، أنا جي فلير. ومرحباً، أنا كارين إير. نحن عضوان في برنامج التطور والشيخوخة في معهد بيرنهام للأبحاث الطبية.سنعرض لكم اليوم الإجراءات التي طورناها لتصوير القلب النابض ليرقات وذباب الفاكهة البالغ من نوع drosophila. نستخدم كلا التحضيرين كوسيلة لتصوير وفحص وقياس معايير ضربات القلب في ذبابة الفاكهة Drosophila. وقبل البدء، نقوم أولاً بتحضير محلول لمف دموي اصطناعي.يحتوي هذا المحلول على مادة السكروز، والتي يجب إضافتها إلى اللمف الدموي الاصطناعي من المحاليل المخزنة المبردة مباشرة قبل الاستخدام. ومن أجل منع التلوث البكتيري، يتم رفع درجة حرارة اللمف الدموي الاصطناعي إلى درجة حرارة الغرفة وأكسجة المحلول عن طريق فقاعات الهواء لمدة 15 دقيقة على الأقل. بعد ذلك، يتم سحب عدة شعيرات دقيقة باستخدام جهاز سحب الماصات القياسي، والتي ستكون مطلوبة لإزالة الأجسام الدهنية في الذبابة.بمجرد تحضير كل شيء، يجب تخدير الذباب البالغ. يمكن القيام بذلك عن طريق تعريض الذباب لمادة fly nap لفترة وجيزة تتراوح من دقيقتين إلى خمس دقائق، مع الحرص على عدم ترك الذباب في fly nap لأكثر من خمس دقائق. يمكن أيضاً استخدام التعرض قصير المدى للبرد لتخدير الذباب، ولكن لا يُنصح باستخدام ثاني أكسيد الكربون نظراً لآثاره طويلة الأمد على معدل ضربات القلب والقدرة.بعد ذلك، توضع الذباب المخدرة بحيث يكون الجانب الظهري لأسفل في طبق بتري مغطى بطبقة رقيقة من الفازلين. يجب أن تلتصق القُطَيْعة الكارهة للماء الموجودة في الأجنحة والجسم بالفازلين بشكل عكسي، ولكن يمكن إعادة وضع الذبابة إذا لزم الأمر. يتم إجراء قطع أولي باستخدام مقص زنبركي منحني.يتم ذلك عن طريق وضع شفرات المقص تحت أرجل الذبابة وبزاوية مائلة للأسفل باتجاه السطح الظهري بالقرب من الرقبة. يتم إزالة الرأس والحبل العصبي البطني والأرجل بقطعة واحدة بمجرد القص. ثم يتم غمر التحضير في محلول الهيموليمف الاصطناعي المؤكسج باستخدام مقصات زنبركية.يتم إزالة الطرف الخلفي للبطن، والذي يتكون من القطعتين البطنيتين السابعة والثامنة، بقطع واحد. يوفر هذا الإجراء إمكانية إجراء قطوع جانبية على طول كلتا حافتي البطن، ويعمل على قطع الاتصال بين المعي الخلفي والكيوتيكل البطني. أدخل شفرات المقص في الفتحة الصغيرة الموجودة في طرف البطن وقم بقص الكيوتيكل جانبياً.يؤدي ذلك إلى تحرير إحدى حواف القشيرة البطنية. أمسك بالطية باستخدام الملقط واصنع قطعاً مماثلاً على طول الحافة الجانبية المقابلة للبطن. يمكن الآن إزالة الطية المتحررة من القشيرة البطنية.يمكن عادةً إزالة الأمعاء والأعضاء البطنية الأخرى ككتلة واحدة باستخدام ملاقط الجواهر والشد اللطيف. ويكشف إزالة الأعضاء الداخلية عن أنبوب القلب النابض، والذي لا يزال متصلاً بالكيوتيكل الظهري بواسطة عضلات شريانية صغيرة ومحاطاً بأجسام دهنية. يتم إدخال الشعيرات المسحوبة في أنبوب بلاستيكي بقطر 1/16 بوصة متصل بمصدر تفريغ.تتناسب قوة الشفط طردياً مع قطر الطرف، لذا يجب عدم استخدام الماصات ذات الأطراف التي يزيد قطرها عن 40 ميكرون بمجرد إعدادها. يُستخدم نظام الشفط هذا لسحب الدهون الزائدة من حول أنبوب القلب، كما يمكن استخدامه أيضاً لإزالة الفقاعات الهوائية التي تتراكم حول القشيرة وأي شوائب.يجب توخي الحذر الشديد لتجنب لمس القلب نفسه، وبما أن الجزء الخلفي من القلب هش للغاية، فيجب تجنب تلك المنطقة أيضاً. أصبح أنبوب قلب ذبابة الفاكهة البالغة مكشوفاً الآن ويجب أن يكون نابضاً إذا لزم الأمر. يمكن إعادة وضع القشيرة والقلب المتصل بها عن طريق رفع القشيرة برفق من الفازلين ثم ضغطها لأسفل مرة أخرى بعناية.تجنب أي تلامس مع أنسجة القلب. في هذه المرحلة، يجب استبدال المحلول الذي يغمر العينة بدم لمفاوي اصطناعي جديد. يجب ترك هذه العينة لتصل إلى حالة التوازن لمدة تتراوح بين 20 إلى 30 دقيقة مع التزويد بالأكسجين قبل إجراء أي عمليات.إذا كان من المقرر الحفاظ على التحضير لفترة تزيد عن 60 دقيقة، فيجب إعادة ترويته بدم ليمفاوي اصطناعي طازج. هذا التحضير جاهز الآن للاستخدام في التسجيل الضوئي، ويمكن استخدامه أيضاً للتسجيل الفيزيولوجي الكهربائي أو للمعالجات النسيجية. ثمة تقنية مختلفة مطلوبة لتصوير نبض القلب داخل اليرقات.أولاً، قم بتجهيز شرائح التغطية في اليوم السابق للإجراء. يتم ذلك باستخدام عود أسنان لنقل حوالي 50 إلى 70 µL من محلول Sard إلى شريحة تغطية مقاس 22 by 22 millimeter. اترك syl guard ليتصلب عند درجة حرارة 65 °C طوال الليل.بعد ذلك، قم بتحضير محلول Brody and Bates المنظم؛ وبمجرد تحضيره، يمكن تخزين الأجزاء في درجة حرارة 20- درجة مئوية وإذابتها عند الحاجة. أخيرًا، قم بتجهيز الأدوات اللازمة لوضع غراء histo acral. أولاً، اسحب عدة شعيرات دقيقة.بعد ذلك، قم بتوصيل طرف ماصة سعة 1.5 مل بأنبوب بلاستيكي صغير بقطر حوالي 1/32 بوصة. ومن خلال إدخال الطرف الأصغر في الأنبوب، أدخل أنبوبًا شعريًا بحيث تكون فتحته الواسعة باتجاه الطرف الآخر. وبمجرد إتمام الإعداد، قم بتعبئة الأنبوب الشعري بصمغ الأنسجة (histo glue) عن طريق غمس الأنبوب الشعري في قطرة من الصمغ وسحبه برفق نحو الطرف البلاستيكي.عند العمل بالغراء، يجب أن يكون لدى الباحث أنبوب شعري زجاجي ثانٍ لإزالة الغراء الزائد من طرف الأنبوب الشعري الخاص بالغراء. يظل الغراء سائلاً حتى يتلامس مع المحلول الملحي المنظم حيث يتصلب في غضون ثانيتينين. ومع ذلك، فإنه عادةً ما يظل في حالة لدن لفترة كافية تسمح بإزالته من طرف الأنبوب الشعري للغراء أو أثناء تطبيقه على العينة.لبدء عملية تثبيت اليرقات، ضع قطرة من غراء histo acral بالقرب من كل زاوية من زوايا أغطية syl guard. أضف 50 microliters من محلول B and B buffer إلى قطرات الغراء، والتي ستتصلب على الفور، ثم املأ المساحة بين النقاط المغلّاة بمحلول b and b. سيعمل الغراء على إبقاء المحلول المنظم على الشريحة.خذ يرقة في المرحلة الثالثة (L3) في مرحلة التجوال وضعها على قطعة من ورق المناديل المبلل فوق الثلج لمدة دقيقتين؛ حيث سيؤدي ذلك إلى إبطاء حركتها. بعد ذلك، انقل اليرقة إلى المحلول المنظم وقم بتوجيهها بحيث يكون الجانب الظهري للأعلى.هذا هو جانب اليرقات الذي يفتقر إلى الأحزمة المتماثلة. ضع بعض الغراء بسرعة بين منطقة الرأس وواقي العتبة. سيتصلب الغراء بسرعة كبيرة ويمنع رأس اليرقات من الحركة.باستخدام الملقط، أمسك الحيوان بعناية من النهايات الخلفية وقم بمدّه برفق. ثبّت اليرقات في هذا الوضع بوضع الغراء على طول كلا جانبي اليرقات في النصف الخلفي. وللحد من حركة القشيرة الإضافية التي تسببها عضلات جدار الجسم، أضف المزيد من الغراء إلى جوانب الحيوان.تم الآن تثبيت اليرقة في هذا الوضع. يمكن وضع شريحة الغطاء في طبق بتري صغير مملوء بدم ليمفاوي اصطناعي أو محلول PBS، وبذلك يمكن الآن تسجيل ضربات القلب دون تداخل من حركات جدار الجسم. سيبقى قلب ذبابة الفاكهة البالغ شبه السليم ينبض بشكل إيقاعي لساعات بعد عملية التشريح عند الحفاظ عليه في دم ليمفاوي اصطناعي طازج ومؤكسج.يظهر هنا مثال تمثيلي، وكذلك في الفيديو التكميلي الأول، لقلوب يرقات في طور النجمة الثالث، والذباب اليافع الذي يتراوح عمره بين أسبوع واحد إلى ثلاثة أسابيع بعد الفقس، حيث يُظهر عموماً نبضات قلب منتظمة بمعدلات تتراوح بين 1 إلى 3 هيرتز. أما الذباب الذي يتجاوز عمره ثلاثة أسابيع فغالباً ما يكون أكثر عدم انتظام في النبض. ومع ذلك، لا تزال هذه القلوب قادرة على النبض تلقائياً لساعات في لمف دم اصطناعي مؤكسج. أما قلوب الذباب البالغ التي تتضرر نتيجة لإجراء التشريح، فعادةً ما تظهر مناطق موضعية من التضيق الشديد التي تعجز عن الارتخاء وغالباً ما تنبض بشكل غير منضبط. ونادراً ما تُلاحظ معدلات ضربات قلب أبطأ من 1 هيرتز في الذباب الذي يقل عمره عن ثلاثة أسابيع.وبناءً على ذلك، تُعتبر هذه التحضيرات تالفة ويتم التخلص منها. لقد شرحنا للتو كيفية تحضير قلوب ذباب الفاكهة في مرحلة اليرقة ومرحلة البلوغ للتصوير البصري. تذكر أنه عند إعداد التحضير شبه السليم، يجب عدم لمس القلب نفسه مطلقاً.هذا كل شيء. شكراً لكم على المشاهدة، وتمنياتنا لكم بالتوفيق في تجاربكم.

visualizing-the-beating-heart-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

نحن هنا وصف بروتوكول الأساسية لوصفها الفلورسنت من عناصر مختلفة من الأنابيب القلب من اليرقة وتعليم...

بطاقات المواد الفلورية ذبابة الفاكهة</emهياكل القلب>

قمنا بتطوير شبه الآلي التحليل البصري نبضات أسلوب (سهى) لتحليل تسجيلات عالية السرعة الضوئية...

شبه الآلي التحليل البصري نبضات القلوب الصغيرة

نقدم وسائل مختلفة لمراقبة وظيفة القلب في...

رصد وظيفة القلب في اليرقات ذبابة الفاكهة السوداء البطن للدراسات فسيولوجية

نحن تصف عملية لترسيخ وتثبيت ، sectioning ، والتصوير من مرحلة...

إعداد الأجنة المجهري للإلكترون من ذبابة الفاكهة أنبوب القلب الجنينية

hemocytes ذبابة الفاكهة تفريق أكثر من مجمل الجنين النامية. هذا البروتوكول يوضح كيفية تحميل الصور وهذه الهجرات استخدام الاجنة مع hemocytes fluorescently المسمى.

يعيش تصوير ذبابة الفاكهة السوداء البطن هجرات كرية دموية الجنينية

نحن تصف الإجراء الذي قام...

التصور الجهاز العصبي الجنينية في جبل لالجامع ذبابة الفاكهة الأجنة

يصف هذا الفيديو قلب الذبابة البالغ ، أو يسمى الوعاء الظهري ذبابة الفاكهة. يوضح البروتوكول المميز إجراء تشريح لمستحضرات القلب الحي.

تحضير ذبابة الفاكهة القلب: تقنية لدراسة فسيولوجيا القلب في الذبابة البالغة

هنا ، يتم وصف البروتوكولات التجريبية لإعداد ذبابة الفاكهة في مراحل نمو مختلفة وإجراء التصوير البصري الطولي لذبابة الفاكهة بنبضات القلب باستخدام نظام مجهري التماسك البصري المخصص (OCM). يمكن تمييز التغيرات المورفولوجية والديناميكية القلبية كميا من خلال تحليل المعلمات الهيكلية والوظيفية للقلب من صور OCM.

إعداد ذبابة الفاكهة والتصوير الطولي من وظيفة القلب في فيفو باستخدام البصرية بالاتساق المجهري (OCM)

نحن نصف الأدوات المحسنة لدراسة قلب حمار وحشي في الجسم الحي مع المجهر مضان ورقة الضوء. على وجه التحديد، نقترح خطوط القلب المعدلة وراثيا مشرق وتقديم تقنيات جديدة لطيف تضمين وشل الحركة التي تجنب عيوب النمو والقلب. كما يتم توفير خط أنابيب محتمل للحصول على البيانات وتحليلها يتكيف مع تصوير القلب.

المجهر ورقة خفيفة من ديناميات القلب السريع في أجنة حمار وحشي

يصف هذا البروتوكول جيل ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر التي تعبر عن eNpHR2.0 أو ReaChR opsins في القلب لتصوير OCT وسرعة القلب البصرية الوراثية. تم الإبلاغ عن تعليمات مفصلة لتصوير ذبابة الفاكهة OCT وتعديل ضربات القلب ، بما في ذلك محاكاة السكتة القلبية القابلة للاستعادة ، وبطء القلب ، وعدم انتظام دقات القلب في الحيوانات الحية في مراحل النمو المختلفة.

تطوير نماذج ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر للتصوير والتحكم البصري الوراثي لوظيفة القلب

ذبابة الفاكهة يبسط بروتوكول تقطيع القلب والتصوير الفلوري دراسة بنية القلب وأمراضه. يتضمن هذا النهج التقسيم المباشر والتلوين والتصوير ، متجاوزا الخبرة الفنية اللازمة للتشريح التقليدي. إنه يعزز إمكانية الوصول ، مما يجعل ذبابة الفاكهة نموذجا قابلا للاستخدام على نطاق واسع للأبحاث المتعلقة بالقلب داخل المجتمع العلمي الأوسع.

طريقة جديدة وفعالة لتلطيخ ذبابة الفاكهة مضان القلب بالتقطيع بالتبريد

تعلم تقنيات تصور القلب النابض في ذبابة الفاكهة Drosophila للمراحل اليرقية والبالغة. تُظهر هذه الطرق كيفية فحص وظائف القلب في علم الأحياء التنموي.

تصور القلب النابض في ذبابة الفاكهة

استكشف المزيد من الفيديوهات