Name: نضوب بالسكان خلية معينة من قبل استنفاد تكملة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-02-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 17 s
Description: تعلم تقنية استنفاد التكملة لعزل خلايا T المناعية بكفاءة عالية. تستخدم هذه الطريقة الأجسام المضادة وحيدة النسيلة مع نظام التكملة لتحقيق نقاوة 95-100% في عزل الخلايا المستهدفة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأود أن أشكر Sreemanti باسو لتقديم البيانات عن الشكل 1. وأيد هذا العمل في جزء من المعاهد الوطنية للصحة منح AI069358 ومؤسسة البحوث BloodCenter.

ألف أرنب المتممة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي أن تكمل الأسهم إذابة أرنب في درجة حرارة الغرفة ، وبعد ذلك في aliquoted 0.5 و / أو وحدات التخزين 1 مل -20-80 والمجمدة في درجة مئوية لمدة طويلة الأجل للتخزين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي لكل معاير الكثير من تكملة لتحديد تركيز العمل الأمثل. عادة ، والتخفيف من 1:10 حتي 1:20 هو الأمثل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لا يكمل الأرنب presterilized دائما قبل بيعها ، اعتمادا على الاستخدام النهائي للخلايا ، ينبغي تصفية تعقيم عندما تكمل aliquoted والمجمدة أو قبل بالإضافة إلى الخلايا. </li></ol> باء جسم التحديد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ليس كل الأجسام المضادة فعالة في تنشيط تكمل ، وبالتالي يجب أولا أن يتم اختبار الأجسام المضادة للنشاط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كل من الفأر والجرذ خريطة موقع فعالة في تنشيط المتممة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أضداد الغلوبولين المناعي عادة ما تكون الأكثر كفاءة لاستخدامها في استكمال تحلل الخلايا التي يسببها تلاه مفتش الحكومة. وisotypes مفتش أفضل لتفعيل تكمل تختلف بين الأنواع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي لكل معاير الضد للاستخدام الأمثل في مناطق ذات كثافة خلية من خلايا 7 10 / مل. </li></ol> جيم البروتوكول الأساسي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط خلية السكان بدأوا 5 × 10 7 خلايا / مل في المتوسط ​​تحتوي على السفح الحرارة المعطل. والحجم النهائي للخلايا يكون ضعف حجم انطلاق. تذكر لانقاذ بعض الخلايا بحيث يمكن قياسها كميا للنضوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي أن يضاف إلى كل الأضداد تعليق خلية في تركيز مناسب محدد سلفا أو التخفيف. مزيج جيد من قبل خلايا قلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب كمية تكمل الحاجة. تحسن الأسهم تكمل في درجة حرارة الغرفة. إذا لم يتم استكمال عقيمة ، تعقيم باستخدام بروتين منخفض طرف الحقنة ملزمة التصفية. إلى المحقنة ، إضافة مل العديد من المتوسط ​​قبل إضافة تكملة وتصفية مباشرة في أنبوب يحتوي على الخلايا والأجسام المضادة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط حجم النهائي في الأنبوب بحيث الخلايا هي الخلايا في 1 × 7 10 / مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الخلايا على 37 درجة مئوية لمدة ساعة ، وخلط كل 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطرد المركزي الخلايا وتجاهل طاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل مع المتوسط ​​مرتين. سوف حطام خلية العصا إلى جانب أنابيب البوليسترين. ويمكن التخلص من الخلايا الميتة والحطام باستخدام مصفاة الخلية أو عن طريق الطرد المركزي المتدرج الكثافة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التحقق من نقاء الخلية بمقارنة السكان خلية من الفائدة قبل وبعد نضوب. التدفق الخلوي والمناعية هما طرق جيدة لتحديد نقاء الخلية. </li></ol> ممثل النتائج عند استخدام خريطة موقع الذي يتم كفاءة عالية في تفعيل استنفاد تكملة الخلية ، وبعد جولة واحدة أكبر ثم 95 ٪. هذا هو مبين في الشكل 1 حيث بدأنا مع splenocytes الماوس تتألف من 32.2 ٪ في الخلايا التائية αβ الكشف عنها بواسطة التعبير عن TCRβ (eBioscience ، سان دييغو ، كاليفورنيا) التي التدفق الخلوي. نحن المنضب الخلايا التائية باستخدام خريطة موقع لThy1 محددة ، وهو بروتين التي أعربت عنها جميع الخلايا التائية ، ولكن ليس غيرها من الكريات البيض. كان الضد كنا Y - 19 فأرا IgG2c 2. ووصف الإجراء التالي ، تم تخفيض عدد السكان TCRβ إلى 1.56 ٪ ، مما يمثل انخفاضا أكبر من 95 ٪. <img src="/files/ftp_upload/1487/1487fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. نضوب thy1 + تم الحصول عليها من قبل الخلايا التائية الطحال تنشيط المتممة. splenocytes بواسطة الماوس إجمالي تجانس الطحال وتحلل من RBC. أضيفت مكافحة thy1 والطفل تكمل الأرنب بتركيزات محددة سلفا على تعليق خلية واحدة من هذه splenocytes أن تركيز الخلية النهائية 1 × 10 7 خلايا / مل. بعد حضانة لمدة 1 ساعة إلى 37 درجة مئوية ، وكانت تغسل الخلايا مرتين وتقييمها من قبل الاستبعاد التريبان الأزرق للبقاء الخلية. تم تقييم كفاءة من قبل استنفاد التدفق الخلوي مقارنة النسبة المئوية للخلايا + TCRβ قبل استنفاد (اللوحة اليسرى) وبعد استنفاد (اللوحة اليمنى). شريط أفقي يشير إلى تلطيخ إيجابية وعدد من فوق العارضة في المئة ايجابية.

<ol><li>Janeway, C., Travers, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Immune+System+in+Health+and+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Immunobiology%22%5BJournal%5D)">The Immune System in Health and Disease.</a> Immunobiology. , Current Biology Limited; Garland Pub. Inc. London; San Francisco; New York. (1994).</li>
<li>Jones, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+activities+of+antibodies+against+brain-associated+T+cell+antigens+II.+Stimulation+of+T+cell-induced+B+cell+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Functional activities of antibodies against brain-associated T cell antigens II. Stimulation of T cell-induced B cell proliferation.</a> Eur J Immunol. 12, 30-37 (1982).</li>
</ol>

عملية تنقية للسكان الخلية هو إجراء المشتركة اللازمة لدراسة وظائفها. نحن هنا وصف طريقة سريعة وفعالة للأوزون السكان الخلية باستخدام مستضد محددة الأضداد ونقص المتممة. لا يمكن أن يتحقق استنفاد أية مجموعة من السكان الخلية إذا كان الضد - تكمل تفعيل متاح للعلامة محددة النسب. وأعرب بروتين هنا أثبتنا استنفاد الخلايا التائية باستخدام خريطة موقع لThy1 محددة ، وذلك أساسا جميع السكان الخلايا التائية. المنضب لدينا أكثر من 95 ٪ من الخلايا التائية αβ وزيدت splenocytes المتبقية من 68 ٪ إلى 98 ٪. هذا المستوى من النقاء الخلية استراتيجيات مماثلة لتنقية الأخرى بما في ذلك نظام مراقبة الأصول الميدانية والانفصال حبة المغناطيسي. نضوب تكمل هي تقنية السريعة التي يمكن أن يؤديها في 1.5 ساعة مرة واحدة يتم الحصول على السكان خلية البداية. ميزة أخرى لاستنفاد تكملة هو أن أي مختبر يمكن أن تؤدي هذه التقنية لأنها لا تتطلب معدات باهظة الثمن والكواشف. القطع الكبير الوحيد المعدات المطلوبة هي حمام الماء وأجهزة الطرد المركزي ملف. يمكن شراؤها يكمل الأرنب من مجموعة متنوعة من الباعة بتكلفة معقولة (انظر الجدول الكواشف) ويمكن شراؤها من العديد من خريطة موقع ATTC والمنتجة محليا للسيطرة على التكاليف. في المقابل ، FACS يتطلب تدفق عداد الكريات مع قدرة على فرز الخلية التي ستكلف في الأرقام الستة ومكلفة خريطة موقع الموسومة fluorescently. الفصل المغناطيسي هو حبة بأسعار معتدلة ، ولكن يتطلب شراء المغناطيس والخرز المغناطيسي ، والتي يمكن أن تكون مكلفة. بالإضافة إلى ذلك ، بعض استراتيجيات الفصل المغناطيسي حبة يتطلب أيضا شراء من الأعمدة. وحجر العثرة الاساسي هو لاستخدام تكملة لنضوب الخلية هو توافر تكمل تفعيل خريطة موقع مع خصوصية المستضد اللازمة. على الرغم من أن الإنسان ، والفأر والجرذان الأضداد جميعا القدرة على استكمال الإصلاح ، وبعض isotypes هي أفضل من غيرها. على الرغم من الغلوبولين المناعي من جميع الأنواع الثلاثة هي فعالة للغاية في تحديد تكمل isotypes مفتش تختلف. يجب أولا ومن ثم يتم اختبار كل خريطة موقع في دراسة تجريبية لتحديد مدى فعاليته. عن الأجسام المضادة التي ليست ذات كفاءة عالية ، يمكن إجراء جولتين من استنفاد تكملة دون التأثير على سلامة السكان الخلايا المتبقية. كما وفورات في التكاليف ، ينبغي معاير الأجسام المضادة للفعالية المثلى. بالإضافة إلى ذلك ، أن الأجسام المضادة المستخدمة لا تحتاج إلى تنقية. supernatants ورم هجين واستسقاء السوائل فقط العمل بشكل فعال ، وهو أمر مريح خصوصا للأضداد الغلوبولين المناعي ، والتي هي صعبة لتنقية. كما هو الحال مع الأضداد ، فمن المحتم أن يكون مكملا معاير في الدراسة التجريبية. وهناك تركيز عال جدا يؤدي الى فقدان قابلية للسكان الخلية غير المستهدفة. المهم أيضا هو أن فترة حضانة لا تتجاوز 60 دقيقة. في بروتوكول لدينا ، فقد شاركنا في احتضان هذه الأضداد وتكمل معا. ومع ذلك ، يمكن أن توصف الخلايا مع الأجسام المضادة لل15-30 دقيقة ويغسل قبل إضافة متممة. عند استخدام هذه الاستراتيجية ، للتأكد من تنفيذ حضانات الأضداد على الجليد لمنع فقدان الخلية المستضد على سطح الخلية ، كما يحدث مع بعض البروتينات التي ترميم وتغطية أو استيعاب مستقبلة. على الرغم من كفاءة عالية ، والعيب الرئيسي لاستكمال استنزاف بالمقارنة مع الأساليب الأخرى هو أنه لا يمكن استخدامها لاختيار ايجابية. وبالتالي فمن الصعب الحصول على مجموعات سكانية فرعية من الخلايا. على سبيل المثال ، سيكون من الصعب تطهير المنطقة الهامشية خلايا من خلايا B B الجريبي ، والتي من الأفضل أن يقوم به نظام مراقبة الأصول الميدانية. في هذه الحالة ، يمكن أن تستخدم لتنشيط تكملة تستنفد خلايا تي للحد من عدد الخلايا التي تم فرزها. وهذه الاستراتيجية تقليل الوقت الفرز ، التي من شأنها توفير المال وستكون أقل قسوة على الخلايا. منذ تنقية خلية معينة من السكان هو مطلب مشترك وضعت عددا من الاستراتيجيات. المزايا الرئيسية للاستراتيجية مكملة لها القدرة على تحمل التكاليف ونضوب ، بساطة التقنية وتوفير الوقت.

<table><tbody><tr><td>متمم من أرنب صغير بعمر 3-4 أسابيع</td><td>Pel-Freez Biologicals</td><td>31061-3</td><td></td></tr><tr><td>حمام مائي</td><td>متنوع</td><td>متنوع</td><td>يمكن أيضاً استخدام حاضنة مضبوطة عند 37 &amp;#x00B0;C.</td></tr></tbody></table>

نضوب بالسكان خلية معينة من قبل استنفاد تكملة

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

مطلوب في كثير من الأحيان لتنقية الخلايا المناعية للسكان من أجل دراسة وظائفها الفريدة. في النهج ، ولا سيما الجزيئية مثل PCR الوقت الحقيقي وتحليل [ميكروأري تتطلب عزل السكان الخلية مع نقاء عالية. استراتيجيات تشمل تنقية استخداما الفلورسنت الفرز تنشيط الخلية (FACS) ، والفصل المغناطيسي حبة ونقص المتممة. من الاستراتيجيات الثلاث ، واستنفاد تكملة يوفر مزايا يجري بسرعة ، وغير مكلفة ، لطيف على الخلايا والخلايا عالية الغلة. ويتألف النظام من استكمال عدد كبير من بروتينات البلازما أنه عندما يشرع في تنشيط بروتين تتالي بلغت ذروتها في تشكيل مجمع غشاء الهجوم الذي يشكل المسام على سطح الخلية مما يؤدي إلى موت الخلايا<sup&gt; 1</sup&gt;. يتم تنشيط المسار الكلاسيكي بواسطة أضداد IgM و IgG و كان أول وصف كآلية لقتل البكتيريا. مع جيل من الاجسام المضادة (ماب) ، يمكن استخدام سلسلة مكملة لأية مجموعة من السكان ليز الخلية بطريقة مستضد محدد. ويتحقق استنفاد الخلايا التي تكمل سلسلة بإضافة أضداد تحديد تكمل محددة مستضد ويكمل الأرنب للسكان خلية البداية. يتم تحضين هذه الخلايا لمدة ساعة في وقت لاحق تتم إزالة 37 درجة مئوية ، والخلايا التي lysed جولتين من الغسيل. ماب مع الكفاءة العالية لاستكمال تثبيت تستنزف عادة 95-100 ٪ من السكان الخلية المستهدفة. اعتمادا على استراتيجية تنقية للسكان الخلية المستهدفة ، ويمكن استخدام استنفاد تكملة لتنقية الخلية أو لإثراء سكان الخلية التي يمكن تنقيته ثم مزيدا من طريقة لاحقة.

لدراسة فعالية وظيفة الخلايا المناعية للسكان هو مطلوب في كثير من الأحيان لتنقية بهم. نضوب تكمل هي تقنية سريعة وغير مكلفة لعزل السكان الخلايا المناعية مع درجة نقاوة عالية.

غالباً ما تكون تنقية مجموعات الخلايا المناعية مطلوبة من أجل دراسة وظائفها الفريدة. وبوجه خاص، فإن النهج الجزيئية مثل...

يعد استنفاد المتممة طريقة سريعة وفعالة وغير مكلفة لتنقية مجموعات الخلايا المناعية. يبدأ استنفاد المتممة عند إضافة أجسام مضادة أحادية النسيلة من نوع IGM أو IgG إلى مجموعة خلوية، حيث تستهدف هذه الأجسام نوعاً محدداً من الخلايا. في هذا المثال، سنستهدف الخلايا التائية (T-cells) لغرض الاستنفاد.تتم بعد ذلك إضافة النظام المتمم لتحفيز سلسلة من التفاعلات التحللية البروتينية، مما يؤدي إلى موت الخلايا التائية. ثم يتم غسل مجتمع الخلايا بواسطة الطرد المركزي وترشيحه للتخلص من الخلايا الميتة والحطام الخلوي. وعادةً ما تؤدي طريقة الاستنزاف المتمم هذه إلى التخلص من 95 إلى 100% من مجتمع الخلايا المستهدف.مرحباً، أنا بوني ديتل، باحثة في معهد أبحاث الدم في مركز الدم في ويسكونسن بمدينة ميلووكي. سأعرض لكم اليوم تقنية استنزاف المتممة، وهي طريقة سريعة وغير مكلفة لاستنزاف مجموعات خلوية محددة.نستخدم هذه التقنية في مختبري لإثراء مجموعات الخلايا المناعية بشكل كبير، والتي نستخدمها لاحقاً في عدد من المقايسات الحيوية، بما في ذلك تلك التي تتضمن تنشيط الخلايا وتحليل التعبير البروتيني. لذا، لنبدأ العمل. قبل البدء في التجربة، قم بتحضير حصص قدرها 0.5 أو 1 mL من المتممة الأرنبية (rabbit complement) واحفظها في مجمد عند درجة حرارة -20 أو -80 °C.تأكد من معايرة المتمم للوصول إلى تخفيف أمثل يتراوح بين 1 إلى 10 و1 إلى 20. أحد المصادر التجارية الممتازة للمتمم التي نستخدمها بشكل روتيني في هذا الإجراء هي Pereze biologicals؛ وبشكل عام، تكون الأجسام المضادة أحادية النسيلة للفئران والأرانب فعالة في تنشيط المتمم، ولكن ليست كل الأجسام المضادة ستكون مناسبة. وتعد الأجسام المضادة من نوع IgM هي الأكثر كفاءة عموماً في تحلل الخلايا الناجم عن المتمم.تُعد أجسام IgG المضادة هي الأكثر كفاءة في المرتبة الثانية، وعادةً ما تُستخدم لأن معظم الأجسام المضادة أحادية النسيلة من نوع IgG؛ لذا يتم معايرة كل جسم مضاد لتحقيق الاستخدام الأمثل عند كثافة خلوية تبلغ 10⁷ خلية/مل، والتي يتم تحديدها تجريبياً. وتُستخدم معظم الأجسام المضادة في نطاق يتراوح بين 0.1 إلى 10 µg/mL. أما لاستنفاد الخلايا التائية الطحالية، فإننا نستخدم جسماً مضاداً أحادي النسيلة متخصصاً لـ TH1.لبدء عملية استنزاف المتممة، قم بتخفيف الخلايا في وسط زراعة خلايا يحتوي على 5% من مصل العجل الجنيني المعطل حرارياً، بحيث يكون تعداد الخلايا الأولي 2 × 10⁷ خلية/ملل. على سبيل المثال، يجب تخفيف 5 × 10⁷ خلية في 2.5 ملل من الوسط. يمثل هذا الحجم من الخلايا نصف الحجم النهائي، وبالتالي فهو ضعف تركيز الخلايا المستخدم أثناء الاستنزاف، والذي سيكون 1 × 10⁷ خلية/ملل.في هذه المرحلة، يتم حفظ ما يصل إلى 1×10⁶ من الخلايا لتمكين قياس كمية النضوب في نهاية التجربة. بالإضافة إلى ذلك، يتم إذابة الكمية المطلوبة من المتممة في درجة حرارة الغرفة. وقد وجدنا أن التخفيف بنسبة 1 إلى 15 يكون مناسباً عند استخدام Pereze Biologicals rabbit complement لـ 5×10⁷ خلية، وتكفي كمية 1.5 milliliter من Eloqua المجمدة.أضف الآن الكمية المناسبة من الجسم المضاد إلى معلق الخلايا واخلطهما. ومن أجل تعقيم المتممة، استخدم مرشح طرف حقنة منخفض الارتباط بالبروتين. املأ الحقنة بـ 1 إلى 2 ملي لتر من الوسط.قبل إضافة المتممة إلى خمسة × 10⁷ خلية، سنحتاج إلى 340 ملليلتر من المتممة لتحقيق تخفيف بنسبة 1 إلى 15. بعد ذلك، قم بترشيح المتممة مباشرة في الأنبوب الذي يحتوي على الخلايا والأجسام المضادة. الآن، اضبط الحجم النهائي في الأنبوب بحيث يكون تركيز الخلايا 1 × 10⁷ خلية/ملليلتر.بعد ذلك، اترك الخلايا لتحضن عند 37 درجة مئوية في حمام مائي لمدة ساعة واحدة. تذكر خلط الخلايا كل 15 دقيقة عن طريق القلب اللطيف. بعد التحضين، قم بطرد الخلايا مركزياً بسرعة لا تؤثر على الحيوية.بعد ذلك، قم بالتخلص من السائل الطافي داخل كبينة التدفق الصفحي. بعد ذلك، اغسل الخلايا مرتين باستخدام 10 milliliters من الوسط الغذائي. لاحظ كيف تتجمع بقايا الخلايا مع التصاق بعضها بجوانب أنابيب البوليسترين.بعد الغسلة الأخيرة، قم بترشيح الخلايا عبر مصفاة خلايا نايلونية معقمة بمسامية 70 ميكرون. وأخيرًا، تحقق من نقاء الخلايا، وذلك من خلال مقارنة مجموعة الخلايا المستهدفة قبل وبعد عملية الاستنزاف التدفقي.تعد قياس التدفق الخلوي والكيمياء النسيجية المناعية من الطرق المفضلة المستخدمة لتحديد نقاء الخلايا قبل البدء بالتجربة. عند استخدام جسم مضاد أحادي النسيلة فعال للغاية في تنشيط المتممة، فإن الجولة الأولى من استنزاف المتممة ستؤدي إلى استنزاف الخلايا بنسبة تزيد عن 95%. على سبيل المثال، عند استخدام قياس التدفق الخلوي لقياس النسبة المئوية لخلايا alpha beta T في تحضير خلايا من طحال فأر، وجدنا أنها احتوت على 32.2% من خلايا alpha beta T بعد استنزاف المتممة باستخدام anti five one، والذي يتم التعبير عنه بواسطة جميع خلايا T، ولكن ليس بواسطة الكريات البيضاء الأخرى. وقد انخفض تعداد TCR beta بنسبة 95% ليصل إلى تركيز نهائي قدره 1.56%.لقد عرضتُ لكم للتو طريقة سريعة وفعالة لاستنفاد مجموعات خلوية محددة باستخدام أجسام مضادة متخصصة للمستضد في عملية استنفاد المتممة. عند إجراء هذا البروتوكول، تذكر اختبار فعالية كل جسم مضاد ومعايرة المتممة في تجربة استطلاعية قبل البدء. هذا كل شيء.شكراً لمشاهدتكم، ومع تمنياتنا لكم بالتوفيق في تجاربكم.

depletion-of-specific-cell-populations-by-complement-depletion

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

علم المناعة والعدوى

الضامة تلعب دورا محوريا في التوازن وعلم الأمراض في العديد من الأنسجة. بروتوكول المقدمة هنا يصف أساليب لاستنزاف...

نضوب وإعادة إعماره الضامة في الفئران

نحن هنا وصف اثنين من المقايسات لقياس تفعيل مكملا الناجم عن أجسام مضادة ضد خلايا الدم الحمراء. وميزة كبيرة على المقايسات الحالي الكمي وطبيعة السهل تفسير ل.

طرق للكشف الكمي للجسم التي يسببها تكملة التنشيط على خلايا الدم الحمراء.

يتم عرض المبادئ التوجيهية لتوليد القاتل الاصطناعي مستضد تقديم الخلايا، KaAPC، أداة فعالة لنضوب في المختبر من خلايا T مستضد معين الإنسان وحل بديل لالمناعي الخلوي لعلاج T-الخلية بوساطة أمراض المناعة الذاتية في antigen- الأزياء محدد دون المساس الجهاز المناعي المتبقية.

القاتل مستضد تقديم الخلايا الاصطناعي (KaAPC) للكفاءة في المختبر استنفاد خلايا T الإنسان مستضد محددة

Microglia يمكن أن تؤثر على الخلايا العصبية والخلايا الدبقية الأخرى في الثقافة من خلال آليات مختلفة مستقلة غير خلوية. هنا ، نقدم بروتوكولا لاستنفاد الخلايا الدبقية الصغيرة بشكل انتقائي من الثقافات العصبية الأولية. هذه الطريقة لديها القدرة على توضيح دور التفاعلات العصبية الدبقية الصغيرة ، مع الآثار المترتبة على الحالات التنكسية العصبية حيث يكون الالتهاب العصبي سمة مميزة.

استنفاد الانتقائي للالدبقية الصغيرة من مخيخي الحبيبة الثقافات الخلية باستخدام L-ليسين استر الميثيل

xenografts ورم الإنسان هي أوعية دموية وتسلل من قبل خلايا المنشأ الماوس أثناء مرحلة النمو في الجسم الحي. للالتفاف على التحيز الناجم عن هذه الخلايا تلويث خلال تحليل المصب، قمنا بتطوير طريقة السماح لاستنزاف شامل لجميع خلايا الماوس عن طريق فرز الخلايا المغناطيسي.

نضوب خلايا الفأر من Xenografts ورم الإنسان يحسن بشكل ملحوظ تحليل المصب من الخلايا المستهدفة

ونحن لشرح كيفية تحديد وعزل 6 مجموعات فرعية من فروعه النقوي من مورين نخاع العظام باستخدام مزيج من المغناطيسية والأسفار الفرز (أجهزة ماكينتوش ونظام مراقبة الأصول الميدانية). يمكن استخدام هذا البروتوكول في المختبر فحوصات الثقافة (الثقافات methylcellulose أو السائل) و في فيفو المتبنيين نقل التجارب وتحاليل الحمض النووي الريبي/البروتين.

تحديد وعزل أوليجوبوتينت والنسب التي ارتكبت النقوي موروث من نخاع العظام الماوس

ونحن هنا وصف تدفق الخلوية التي تستند في الجسم الحيوي قتل الفحص الذي يتيح النظر في المناعية في الاستجابات اللمفاوية T السامة للخلايا (CTL) لنموذج مستضد الورم. ونحن نقدم أمثله علي كيفيه استخدام هذا الفحص الأنيق للدراسات الميكانيكية ولاختبار فعاليه المخدرات.

الخياطة في فيفو الاختبارات الخلوية لدراسة المناعي في الأورام الخاصةCD8 + T الاستجابات الخلية

يصف هذا البروتوكول بالتفصيل جميع الخطوات التي ينطوي عليها الحصول على السلف المشتق من اللوكوفلتر CD34+ hematopoietic وتمايزها في المختبر ونضجها في الخلايا الضخمة الحاملة للصفيحات التي تكون قادرة على إطلاق الصفائح الدموية في وسط الثقافة. هذا الإجراء مفيد للتحليل المتعمق للآليات الخلوية والجزيئية التي تتحكم في الخلايا الضخمة.

Leukodepletion مرشحات المشتقة CD34 + الخلايا كمصدر الخلية لدراسة التمايز Megakaryocyte وتشكيل الصفائح الدموية

هنا ، نصف طريقة لإنشاء قطرات مستحلب مزدوجة تغلف خلية تائية واحدة وخلية مستهدفة سرطانية لفحص قتل الخلايا على مستوى الخلية الواحدة. تسمح هذه الطريقة بالقياس الكمي المزدوج لكل من الجزيئات السامة للخلايا وموت الخلايا المبرمج للخلايا المستهدفة داخل عدد كبير من الخلايا التائية.

مقايسة السمية الخلوية القائمة على القطرات لتقييم الخلايا التائية لمستقبلات المستضد الخيمري على مستوى الخلية المفردة

يتم الإبلاغ هنا عن بروتوكول للاستئصال الانتقائي للبلاعم الكلوية لدراسة تجديدها باستخدام أداة استئصال الخلايا البشرية CD59 / intermedilysin. هذه الطريقة قابلة للتطبيق أيضا لدراسة وظيفة وتجديد مجموعات الخلايا الأخرى في الكلى والكبد والأنسجة الدهنية.

النضوب السريع للبلاعم الكلوية باستخدام أداة استئصال الخلايا البشرية CD59 / Intermedilysin

تعلم تقنية استنفاد التكملة لعزل خلايا T المناعية بكفاءة عالية. تستخدم هذه الطريقة الأجسام المضادة وحيدة النسيلة مع نظام التكملة لتحقيق نقاوة 95-100% في عزل الخلايا المستهدفة.

نضوب بالسكان خلية معينة من قبل استنفاد تكملة

استكشف المزيد من الفيديوهات