Name: الولبخية عدوى بكتيرية في ذبابة الفاكهة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: تعلم بروتوكول عزل وحقن العامل المسبب للولبخية في ذبابة الفاكهة باستخدام جهاز ترشيح متخصص. تساعد هذه الطريقة الباحثين على دراسة آليات العدوى داخل الحشرات.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

الولبخية عدوى بكتيرية في ذبابة الفاكهة

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

اسمي فويا فريدمان، وأنا باحثة مشاركة في جامعة برينستون. وسأحدثكم اليوم عن بعض البروتوكولات التي قمت بتطويرها لنقل العدوى، وتحديداً لعزل الهيموليمف من الذباب المصاب، ومن ثم حقن هذا الهيموليمف في ذباب غير مصاب.بشكل أساسي، هذا بروتوكول بسيط للغاية لعزل الذكور فقط للأغراض الأساسية. وستستخدم هذا الجهاز من شركة mepo والذي يحتوي على مرشح يوضع فوق أنبوب E. لذا، تحتاج أساساً إلى البدء بحوالي 100 ذبابة. قم بتخدير الذباب، ثم ضعها في جهاز الترشيح، ويمكنك ببساطة استخدام قمع لإضافة الذباب بسهولة إلى هذا الجهاز وغسله بـ 70% ethanol.قم ببساطة بإزالة الإيثانول، حيث يمكنك التخلص منه، وبعد ثلاث مرات من الغسل، قم بإجراء الغسلة الأخيرة باستخدام ماء منقّى (molecular water) لتجنب بقاء آثار من الإيثانول مع البكتيريا. بعد ذلك، انقل المزيج إلى أنبوب جديد، ثم قم بالطرد المركزي باستخدام جهاز طرد مركزي دقيق (microcentrifuge) لمدة دقيقتين. ولاحقاً، يمكنك حقن ذلك، حيث يتم إطعام الذباب غير المتأثر فقط.لذا، قم ببساطة باستخدام شريط لاصق مزدوج الوجه، وعادةً ما يكون لهذه الأشرطة جانبان، أحدهما أكثر التصاقاً من الآخر. اترك الجانب الأكثر التصاقاً للأعلى لأنه الجانب الذي ستلصق عليه الذباب. وبشكل أساسي، في جهاز الغاز، إذا وضعت هذه الشريحة في الأعلى، فلن يكون هناك تدفق للغاز وسيبقى الذباب مستيقظاً إذا كان موجوداً فوق الشريحة.وبذلك يمكنك توجيه التدفق، وتشكيل غطاء صغير، أو حجرة صغيرة باستخدام شريط لاصق. ثم تقوم بتوجيه الغاز فوق الذباب. وبعد ذلك، تضع هذا الضوء هنا باستخدام الشريط اللاصق، وبذلك تكون قد جهزت الذباب.قم بلصق الذباب على الجزء العلوي من الشريط، مع توجيه جميع الذباب في الاتجاه نفسه، بحيث تكون رؤوسها متجهة نحو الاتجاه الذي ستدخل منه الإبرة. وذلك حتى تتمكن من تجاوز الجناح، وللتأكد من عدم طيران الذباب؛ فإذا استيقظت أثناء الإجراء، لن ترغب في أن تطير بعيداً.لذا تأكد من تسليط ضغط طفيف بطرف الأداة على أجنحة الذبابة عند الطرف الخلفي. ولا بأس إذا تعرضت الأجنحة للتلف، لأنه عند رفع الذباب بعد الحقن، فمن المرجح أن تفقد أجنحتها على أي حال، ومع ذلك ستظل على قيد الحياة.يمكن أن يكون ذلك مفيداً لأنك لن تفقد الذباب، لذا يضع زيتاً معدنياً على الميكرومتر للجزء الخلفي من الإبرة، ثم إبرة الحقن القطبية، وبعد ذلك، يمكنك ببساطة ضبط الضغط لجلب المادة إلى طرف الإبرة. لقد قمت بحقن كمية تتراوح بين 10 إلى 15 nanoliters، ولكن طالما كنت متسقاً في ذلك. حسناً، هناك تفصيل مهم واحد في هذه التجربة وهو أن الذبابة، بمجرد حقنها، كما رأيتم، يجب أن تدخل الإبرة لأقصى حد ممكن عبر الجزء العلوي من البطن.لأنك هنا، وبشكل أساسي عند اختراق الإبرة، يتوفر لديك مساحة أكبر للتحرك للأعلى والأسفل. وبشكل أساسي، إذا كانت الإبرة قريبة من الجليدة، يقل احتمال اختراق الأعضاء الحيوية في الذبابة. فمن غير المرجح جداً أن تحدث ثقباً في الأمعاء، على سبيل المثال، وهو الأمر الذي قد يؤدي إلى موت الذبابة التي تجري عليها الجراحة.اسمي فويا فريدمان، وباحثة مشاركة في جامعة برينستون في مختبر إريك هيلز. وأود اليوم أن أخبركم عن هذا البروتوكول الذي شاهدتموه للتو في العرض التوضيحي.لقد تم تنفيذ هذا البروتوكول لأننا أردنا إثبات قدرة UBA على اختراق الأنسجة. حيث يُعد UBA أحد أنجح الطفيليات داخل الخلوية على وجه الأرض، فهو يصيب من 20% إلى 70% من الحشرات والعديد من الجزيئات.كما أنه يكتسب أهمية كبيرة فيما يتعلق بالأمراض البشرية لأنه يصيب أيضاً النيماتودا التي تنقل أمراضاً مثل عمى النهر أو داء الفيلات. لذا، فإن CCA يعد متعايشاً داخلياً إجبارياً في هذه الديدان. وهناك اهتمام كبير باستخدام CCA أيضاً كوسيلة لمكافحة الأمراض الطفيلية التي ينقلها البعوض والقراد، والبعوض على وجه الخصوص مثل الملاريا وحمى الضنك.لقد تم تطوير هذا البروتوكول بشكل أساسي لإظهار أنه بمجرد وجود CCA داخل التجويف البطني للذبابة، يمكنها عبور الأنسجة والوصول إلى الخلايا الجرثومية. لذا، ما يمكنك رؤيته هنا هو مبيض Drosophila، وبمجرد وجودها في الهيموليمف، يمكنها عبور الغمد البريتوني الوردي المحيط بالمبيض.وبعد ذلك يعبرون طبقة عضلية. وفي الواقع، أحد أول الأماكن التي يدخلونها داخل المبيض هو صورة الخلية الجذعية الجسدية. ومن ثم يمكنهم الوصول إلى الخط الجرثومي.وتنتقل هذه البكتيريا بنفس الطريقة التي تنتقل بها الميتوكوندريا، وذلك عن طريق الأم، من خلال البلازمات السيتوبلازمية الموجودة في البويضة. لذا، من الطبيعي أن تكون موجودة في الخط الجرثومي، وهذا هو السبب في تطوير هذا البروتوكول.ويمكن أن يكون هذا البروتوكول مفيداً جداً، حيث إن الطريقة التقليدية التي كان يحاول بها الباحثون نقل العدوى إلى wbaa هي ببساطة أخذ wbaa وإدخال نوع جديد من الحشرات إليها، وكان ذلك يتم عن طريق إجراء حقن مجهري في الجنين، إلا أن تلك الطرق أكثر تعقيداً بكثير.ونحن هنا ببساطة نستفيد من بيولوجيا هذه الكائنات، بما أنها قادرة على عبور الأنسجة والانتقال إلى أنسجة الخلايا الجذعية، ومن ثم يمكنها الوصول إلى الخط الجرثومي. وهذا يسهل عملية أخذ UBA من أنواع معينة من الحشرات المصابة، حيث يمكن نقلها إلى أنواع غير مصابة. وأعتقد أن السبب يكمن في عملية الحقن نفسها.بشكل أساسي، يجب توخي الحذر لتثبيت الذبابة بأفضل شكل ممكن. نحن نستخدم شريطاً لاصقاً مزدوج الوجه، ويجب إدخال الإبرة بحيث تكون قريبة وموازية لجسم الذبابة قدر الإمكان لتجنب الدخول بعمق شديد، وبذلك يقل احتمال موت الذبابة بعد إجراء الجراحة.

wolbachia-bacterial-infection-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

الطفيل (الطفيلية) الدبابير تشكل فئة كبيرة من الأعداء الطبيعيين للحشرات كثيرة...

مقدمة لالدبابير الطفيلية من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; والاستجابة المناعية Antiparasite

المصدر: سيفا-جوثي، ج. أ. وآخرون. العدوى البكتيرية الفموية والتساقط في ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر. J. Vis. Exp. (2018)يظهر الفيديو العدوى الفموية لذبابة الفاكهة الميلانوغاستر بالبكتيريا الممرضة. يشمل ذلك تحضير قوارير العدوى ونقل الذباب الجائع لتمكين ابتلاع البكتيريا. تلتقط العملية استعمار الأمعاء، تليها تعقيم السطح وتجانس الذباب. وأخيرا، يظهر قياس كمية الحمل البكتيري الداخلي من خلال التخفيف المتسلسل وعد المستعمرات.

عدوى الفم في ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر بالبكتيريا الممرضة

المصدر: هيروياسو، أ.، د وآخرون، استخراج الخلايا الدموية من يرقات ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر لإجراء العدوى الميكروبية وتحليلها. J. Vis. Exp. (2018)يوضح هذا الفيديو عملية إثبات العدوى البكتيرية في يرقات ذبابة الفاكهة عن طريق وضعها في قطرة بكتيرية ووخزها بإبرة التنجستن. ثم تحضن اليرقات على صفيحة أجار مثقبة غنية بالمغذيات لدراسة التفاعلات بين المضيف والممرض.

تأسيس العدوى البكتيرية في يرقات ذبابة الفاكهة

ذبابة الفاكهة السوداء هو كائن حي نموذجي بارز لدراسة أجهزة المناعة الفطرية والعواقب الفسيولوجية للعدوى والمرض. يصف هذا البروتوكول كيفية توصيل عدوى بكتيرية قوية وقابلة للتكرار كميا إلى D. melanogaster ، وكيفية قياس شدة العدوى لاحقا وتحديد الاستجابة المناعية للمضيف.

العدوى البكتيرية النظامية والمناعة الظواهر الدفاع في<em&gt; الدروسوفيلاميلانوجاستر</em

تم توضيح طريقة لتربية ذبابة الفاكهة في ظل ظروف ممحوضة ومعروف المعايشات. وdechorionated يطير الأجنة في هيبوكلوريت الصوديوم، نقل جو معقم و مطهر لنظام غذائي العقيمة، وتربى في حاويات مغلقة. بتلقيح النظام الغذائي والأجنة مع البكتيريا يؤدي إلى الجمعيات معروف المعايشات، ويتم التأكد من وجود البكتيريا عن طريق طلاء كامل الجسم الخليط ذبابة الفاكهة.

تربية ذبابة الفاكهة<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; تحت ممحوضة ومعروف المعايشات شروط

هي أن يطلق سراحه البعوض بعوض الزاعجة المصرية المصابين ولبخيه إلى السكان الطبيعية لمنع انتقال سيتناقش. يصف لنا أساليب لخلفي عبد اللطيف-مصرية مع التهابات ولبخيه في المختبر للتجارب والإفراج عن الميدان، مع أخذ الاحتياطات اللازمة للتقليل من التكيف مع المختبر واختيار.

الحفاظ على بعوض الزاعجة المصرية "البعوض مصابة" ولبخيه

ويصف هذا البروتوكول طرائق فضح شفويا وتصيب ذبابة الفاكهة المورفولوجية ميلانوجاستيr مع مسببات الأمراض البكتيرية، وقياس عدد تسليط البكتيريا المعدية عقب الإصابة بالقناة الهضمية. نحن كذلك وصف تأثير طفرات محصنة في بقاء يطير بعد العدوى البكتيرية عن طريق الفم.

شفوي من العدوى البكتيرية وإلقاء في melanogaster المورفولوجية

هذا البروتوكول يصف كيفية إنشاء العدوى الفيروسية في فيفو في المورفولوجية ميلانوجاستير باستخدام أسلوب الحقن نانو والتقنيات الأساسية لتحليل التفاعل الفيروس--المضيف.

إنشاء العدوى الفيروسية، وتحليل التفاعل المضيف للفيروسات في Melanogaster المورفولوجية

تم استخدام ذباب ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر البالغة على نطاق واسع ككائنات حية نموذجية للتحقيق في الآليات الجزيئية الكامنة وراء الاستجابات المناعية الفطرية المضادة للميكروبات المضيفة واستراتيجيات العدوى الميكروبية. لتعزيز مرحلة يرقة D. melanogaster كنظام نموذج إضافي أو بديل ، يتم وصف تقنية حقن اليرقات.

ذبابة الفاكهة ميلانوغاستر بروتوكول حقن اليرقة

تم استخدام أربع طرق للكشف عن Wolbachia داخل الخلايا ، والتي تكمل بعضها البعض وتحسن دقة الكشف عن عدوى Wolbachia من الزاعجة المشتقة من Aedes albopictus Aa23 و Aa23-T التي تم علاجها من عدوى Wolbachia الأصلية باستخدام المضادات الحيوية.

الكشف عن سلالة Wolbachia wAlbB في خطوط خلايا الزاعجة البيضاء

خطوط الخلايا مفيدة في الدراسات التي أجريت على الكائنات داخل الخلايا التي لا يمكن زراعتها خارج الخلايا المضيفة. على الرغم من أن الخطوط المصابة ب Wolbachia قد مكنت من العديد من الاكتشافات ، إلا أن عدم التجانس داخل هذه الخطوط يمكن أن يؤدي إلى نتائج تجريبية متغيرة. نقدم بروتوكولا لتوليد استنساخ أحادي الخلية وثقافات مستمرة من خلايا JW18 المصابة ب Wolbachia.

توليد الثقافات وحيدة النسيلة من ذبابة الفاكهة السوداء JW18 المصابة بالوولباخيا

تعلم بروتوكول عزل وحقن العامل المسبب للولبخية في ذبابة الفاكهة باستخدام جهاز ترشيح متخصص. تساعد هذه الطريقة الباحثين على دراسة آليات العدوى داخل الحشرات.

الولبخية عدوى بكتيرية في ذبابة الفاكهة

استكشف المزيد من الفيديوهات