التناضحي في تجنب انواع معينة ايليجانس : وظيفة متشابك من اثنين من الجينات ، Orthologues لحقوق الإنسان NRXN1 و NLGN1 ، كمرشحين للتوحد

مرحبا ، اسمي مانويل رويز روبيو هنا في قسم علم الوراثة بجامعة قرطبة في إسبانيا. نحن نستخدم الأناقة كأداة تجريبية في دراسة التوحد, الاستفادة من العالم يتميز الجهاز العصبي بثلاثة أناقة. نحن ندرس طفرة الديدان الخيطية ، الفعالة في الجينات المشاركة في المشبك العصبي والتي كانت مرتبطة بالتوحد.

Rein Regans هي جزيئات التصاق الغشاء الموجودة في المشبكي. يحتوي رأس C elegance على amfi ، وهو عضو حسي في الديدان الخيطية مع استجابات وسيطة لمحفزات مختلفة بما في ذلك القوة التناضحية. يتكون Amfi من 12 خلية عصبية حسية ذات صلة في الارتفاع وعمل واحد INAP Terminal.

اثنان من هذه الخلايا العصبية باسم A SH اليمين واليسار مهمان بشكل خاص في الوظيفة الحسية التناضحية. الكشف عن إعادة التوازن القابلة للذوبان في الماء بقوة تناضحية عالية. مرحبا ، نبيذ نهر نان بطريقة السماء لقياس التجنب التناضحي في طفرات عيب المشبك من الأجداد.

لتقييم الآثار المترتبة على تجنب القوة التناضحية العالية العصبية والعصبية ، أبلغنا عن الاستجابة المختلفة ل C ضد الطفرات المعيبة في الجينات العصبية العصبية باستخدام طريقة تعتمد على محلول الفركتوز رباعي الموليات. دق يوم القول ، قم بإعداد محلول مخزون رباعي المولار من الفركتوز مع 1٪ من الكونغو الأحمر ويذوب تماما في درجة حرارة الغرفة. الحلقة الحلقية التي يبلغ قطرها سنتيمترا واحدا على لوحة NGM هي خط فرعي في مركز الوسط الصلب.

باستخدام 15 ميكرولترا من محلول الفركتوز الأحمر الأربعة. دع الفركتوز ينقع في الفدان حوالي خمس دقائق ، يجب إجراء التجربة بشكل أعمى. يجب تسمية اللوحة التي تحتوي على كل سلالة S ثمانية بواسطة مجرب ثان.

يتم إجراء SA باستخدام هذه العلامات التي لم يطلب منها. عندما تنتهي التجربة قبل حوالي 24 ساعة من إجراء البيع ، من الضروري اختيار L أربع يرقات من كل نمط وراثي ونقلها إلى صفيحة AFL NGM التي تحتوي على بكتيريا الإشريكية القولونية والحفاظ عليها عند 20 درجة مئوية في اليوم التالي. يجب أن تبدأ التجربة مع الشباب.

ضع دودة فردية من كل سلالة داخل دائرة الراحة واتبع كل حسب توقيت استجابته لحاجز التشنج اللاإرادي. يجب أن نقوم بإجراء 10 من كل سلالة وما لا يقل عن ثلاث تجارب طبق الأصل للحصول على نتيجة قاطعة. يتم تصنيف أولئك الذين يتجنبون الحلقة الحمراء ست مرات متتالية على أنهم طبيعيون.

أولئك الذين يخرجون من الحلبة في أقل من ست محاولات يعتبرون معيبين في سلالة التحكم في حساسية التناضح يجب استخدامها في كل SA Bristol ويتم استخدام حيوانين كعناصر تحكم إيجابية لأنهما يتجنبان الحاجز الدائري. سلالات التحكم تستجيب للخلف عندما تجد حاجزا تناضحيا يتكون من أربعة فركتوز مولاري. القنابل المسوخة التي تعاني من نقص عصبي لها سلوك مشابه لهذه الاحترامات لنوع واحد من القوة.

ومع ذلك ، فشلت الطفرات التي تعاني من نقص NEUR في اكتشاف هذا الحاجز التناضحي. استعادت القوى الطافرة المزدوجة في أليلات الأعصاب والنوت المختلفة النمط الظاهري من النوع البري الذي يستجيب للقوة التناضحية للحصول على الديدان السفلية عن طريق تداخل الحمض النووي الريبي الذي يتغذى على مستعمرات عزل e coli HD 11 خمس سلالات تم تحويلها مع ناقل L 44 40 يحتوي على جزء يتوافق مع الجين المستهدف. يتم عزل البكتيريا على LBA أو صفيحة مع الكربونيك في اليوم التالي.

اختر مستعمرة من البكتيريا وقم بتلقيح وسط سائل منخفض الجهد. استمر في النمو لمدة سبع ساعات مع الاهتزاز عند 37 درجة. شاهد إسقاط هذه الثقافة على لوحة NGM ذات السقف الكربوني و IPTG و wai طوال الليل في درجة حرارة الغرفة ، مما يسمح للبكتيريا بالنمو والبدء في تحريض التعبير عن جزء الجين المستهدف.

من الضروري استخدام تحكم إيجابي وغير سلبي لتداخل الحمض النووي الريبي. تجارب التغذية. السيطرة السلبية متساوية.

أنا HT 11 خمس سلالات تحولت مع TL 44 40 متجه. الضوابط الإيجابية ELI HT 11 خمس خلايا تحولت مع L 44 40 متجه يحتوي على 22 تسلسل جيني. ينشأ قفل هذا الجين يهتز النمط الظاهري الذي يتميز بسهولة تحت المجهر المعقم.

اليوم الأول. يتم نقل المراحل الأربع من NGM PLA مع البكتيريا على صفيحة مع البكتيريا والكويت عند 20 درجة مئوية خلال 12 ساعة. هذه فترة صيام.

اليوم التالي ، انقل الشاب البالغ السريع إلى صفيحة ملقحة بالبكتيريا التي تعبر عن الجين المستهدف المحدد لتداخل الحمض النووي الريبي. اترك حوالي 48 ساعة عند 20 درجة مئوية للحصول على ذرية F1. ثم اختر عددا قليلا من قنابل F1 البالغة على صفيحة أخرى ملقحة بنفس البكتيريا خلال اليومين المقبلين.

حدد وعزل الشباب من F اثنين من ذرية التسجيل للأنماط الظاهرية بريستول N نوعان من الدهون البرية مع البكتيريا التي تحدث التعاطف. L 44 40 كان متجه يتراجع عندما يكون جيدا. الحاجز التناضحي.

بريستول وسلالة النوع الأبيض الحقيقي التي تتغذى على البكتيريا التي تعبر عن جزء من الجين العصبي من الأناقة فشلت في اكتشاف أصابع القدم للمحاليل المولية. ومع ذلك ، فإن الطفرة التي تعاني من نقص الخلايا العصبية غير القادرة على اكتشاف الحاجز التناضحي استعادت هذه القدرة عندما تم تغذيتها بالبكتيريا التي تعبر عن جزء من جين النانو من أناقة البحر. في هذا الفيديو ، نعرض طريقة بسيطة تسمح بدراسة تأثير الجينات التي تؤثر على استجابة التجنب التناضحي في أناقة البحر.

يتم استخدام حلقة من الفركتوز الرسمي ضيق مع الكونغو الأحمر لتحليل استجابة القنبلة للقوة التناضحية. علم الأعصاب في الطفرة الناقصة معيب في هذه الاستجابة ، ومع ذلك ، لا تضعف طفرات NU للكشف عن إجهاد تومو الذي يظهر استجابة مشابهة لسلالة النوع البري. يظهر هذا الفيديو أن السلالات الطافرة المزدوجة التي تحمل أليلات خروج المغلوب المختلفة في جينات إطلاق وإطلاق الجينات استعادت النمط الظاهري من النوع البري الذي يستجيب للقوة التناضحية.

تم تأكيد هذه الملاحظات باستخدام تداخل الحمض النووي الريبي ، ونهج إغلاق التغذية. وبهذه الطريقة ، تضررت سلالة النوع البري في التعرف على الحاجز التناضحي عندما تم تغذيتها بالبكتيريا التي تعبر عن تسلسل جين ING. من ناحية أخرى ، استعاد الطفرة المعيبة العصبية ، غير القادرة على اكتشاف محلول الفركتوز الأربعة الأخرى ، هذا السلوك عندما تم تغذيتها بالبكتيريا المعبرة وفقا لتسلسل جين NNU.

تشير النتائج الموضحة في هذه التجربة إلى أن n الرؤية والعصبية قد تشارك في الاتصال المشبكي للخلايا العصبية المستشعرة للديدان الخيطية وأيضا أنهما يتفاعلان مع بعضهما البعض بطريقة تؤثر على الوظيفة المشبكي. حسنا ، وداعا ونتمنى لك التوفيق في تجاربك.