كتكوت البيضة السابقين الثقافة و البيضة السابقين CAM الفحص : كيف يعمل حقا

وفرخ مشيمائي غشاء (CAM) هي فريدة من نوعها ، العوز المناعي طبيعيا بيئة ثقافة داعمة لدراسة الأوعية الدموية وتكون الأورام. هذه المقالة الفيديو يوضح الخطوات المختلفة في الفرخ البيضة السابقين الثقافة ، وتطبيق مواد يحتمل أن تكون وعائية التلقيح الناجح للخلايا وأنسجة الورم على سطح CAM.

مرحبا ، أنا سوزان با. أنا من معهد الكيمياء الفسيولوجية ، قسم الغدد الصماء الكيميائية الحيوية في جامعة بورغ إيسن في ألمانيا. مرحبا ، أنا دانيال زي باسيان دول.

أنا من نفس المؤسسة مثل سوزان. مرحبا ، أنا مان من معهد تشريح قسم الأعصاب في جامعة بورغ. سنوضح لك كيف تعمل ثقافة CH X ومقال الغشاء المشترك حقا.

لذلك دعونا نذهب إلى المختبر. في معظم الدراسات التجريبية الحديثة ، تم الكشف عن الكاميرا التي هي غشاء شيكو عن طريق قطع نافذة من خلال قشر البيض ، وأجريت التجارب في البيض البيض ، مما أدى إلى قيود كبيرة في إمكانية الوصول إلى CAM وفي إمكانيات المراقبة والتوثيق المصور للتأثيرات. تسهل ثقافات X ovo لأجنة الكتاكيت بشكل كبير إمكانية الوصول إلى الكاميرا وجنين الكتكوت.

يرجى الاطلاع على القلب النابض مما يتيح توثيقا سهلا في الجسم الحي للتأثيرات والتلاعب التجريبي بالجنين. في مقالة الفيديو الخاصة بنا ، سنقدم عرضا توضيحيا خطوة بخطوة للتطبيق الناجح لثقافة X ovo لعدد كبير من الأسئلة العلمية. يتم تحضين البيض في حاضنة مع صينية متحركة.

هنا يمكنك رؤية عنصر التسخين ومحرك الدرج يدور البيض 12 مرة في اليوم بشكل مستمر. يتم الحفاظ على الرطوبة عند 60٪ عن طريق إضافة الماء إلى الحاويات البلاستيكية في قاع الحاضنة ، ويتم ضبط درجة حرارة الحضانة على 37.5 درجة مئوية قبل بدء الحضانة. تتم إزالة الأوساخ والريش والفضلات بعناية من قشر البيض ، مما يؤدي إلى مسح البيض ميكانيكيا بالإيثانول أو المطهر ، ومع ذلك ، يقلل بشكل كبير من معدلات بقاء الأجنة.

يتم وضع البيض أفقيا على الدرج المتحرك للحاضنة. يرجى التأكد من الحفاظ على مسافة كافية بين البيض الفردي لتمكين التناوب الحر. بعد الحضانة لمدة 72 ساعة ، تتم إزالة البيض من الحاضنة ويتم تمييز الجانب العلوي من البيض حيث يوجد الجنين بالقلم الرصاص.

نظرا لأن الجنين يقاوم الدوران إلى حد ما ويظل موجودا هنا للحصول على شعور أفضل ، لا ينبغي استخدام قفازات لتكسير البيض ، ولكن يجب تطهير اليدين بنسبة 70٪ من الإيثانول. يتم تثبيت البيضة أفقيا مع وضع علامة قلم رصاص في الأعلى ومتشققة على حافة قضيب التحريك المغناطيسي الثلاثي لتحقيق أقصى قدر من التحكم في القوة أثناء إجراءات التكسير ، يجب ألا يستقر المرفقان على سطح المقعد. من المهم أن يتم فتح قشر البيض وكذلك غشاء البيض أثناء التكسير ، ويعد تسرب بياض البيض علامة آمنة على ثقب غشاء البيضة.

تحفظ البيضة بالقرب من قاع الطبق الوطني. لتجنب المزيد من تسرب بياض البيض أثناء إجراء الفتح الأولي هذا ، من المهم أن يظل بياض البيض الموجود في قاع الطبق الوطني متصلا بالباقي داخل البيضة. نظرا لأن هذا ينتج عنه فراغ داخل البيضة يثبت الصفار في مكانه عن طريق الضغط برفق على خط الزوال الذي يمر عبر الكراك وخط الاستواء للبيضة عن طريق الإبهام والأصابع الوسطى ، فمن الممكن تنظيم الفراغ وبثق محتويات البيض.

يمكن بعد ذلك نقل محتوى البيضة إلى طبق بتري مع صفار البيض غير تالف. إذا تم رفع البيضة برفق وتم فصل نصفي القشرة بعناية ، ثم توضع مزارع ex ovo على صينية ، وتعاد إلى الحاضنة وتحفظ عند 37.5 إلى 38.2 درجة مئوية و 70٪ رطوبة. ثاني أكسيد الكربون أو إمدادات الأكسجين ليست ضرورية.

إذا تم استخدام أطباق وطنية خاصة مع فواصل بين الغطاء والطبق وحاضنات مع شبكة تهوية ، فيجب إبقاء شبكة التهوية مفتوحة في منتصف الطريق. تستخدم أوراق مرشح الأوتوكلاف كمواد داعمة للمواد السائلة المطبقة على الكاميرا حيث يبدو أنها تسبب أقل تهيج للكام. يجب أن يكون موقع التطبيق في منتصف الطريق بين الجنين وحدود الكاميرا ، وإلا فإن الجنين يعيق الملاحظة المجهرية للتأثيرات في الضوء المنقول.

يجب تطبيق السائل هنا الأتروبين فور وضع الفلتر على الكاميرا لتجنب الجفاف. يجب إعادة استخدام جرعات إضافية أو مخزن مؤقت كل يوم. عندما يتم تطوير الكاميرا بالكامل ، يمكن تطبيق ما يصل إلى ست عينات مختلفة ويمكن مقارنة التأثيرات على حلقات كامة واحدة مقطوعة من طرف ماصة مليلتر واحد يجب قصها إلى أقصى حد ممكن لتقليل الوزن وتجنب المسافة البادئة للكامة.

ثم يتم تطبيق الحلقة على الكاميرا ويتم سحب الخلايا في الحلقة. يتم شطف حقنة هاميلتون ميكرولتر عدة مرات بنسبة 70٪ من الإيثانول وأخيرا بمحلول ملحي معقم بالفوسفات أو PBS ، تمتلئ المحقنة الصغيرة بتعليق خلوي معد بعناية ولكن تخترق بسرعة الكامة وطبقات العين بإبرة المحقنة وحقن تعليق الخلية باستمرار. يجب أن تبقى الإبرة بضع ثوان في العين لتجنب فقدان تعليق الخلية المحقونة عن طريق فحص التسرب X Ovo.

تستخدم مزارع البيض المحتضنة لمدة ثلاثة أيام كمتبرعين برعم الأطراف. يتم تشريح الجنين من أوعية الصفار المتصلة. عن طريق قطع دائرة ، يتم نقل الجنين إلى طبق بتري مملوء ب PBS المعقم البارد باستخدام ملعقة تصريف صغيرة وغسلها عن طريق التحريض.

ثم يتم نقل الجنين إلى طبق بتري طازج مليء ب PBS المعقم ويتم تحريره من الأغشية المحيطة ، وتمزيقها بعناية باستخدام ملقط ناعم. يتم فصل براعم الأطراف بواسطة ملقط بالقرب من الجسم قدر الإمكان ، ويتم الإمساك بها ونقلها إلى كاميرا دجاجة مضيفة عمرها ثمانية إلى 10 أيام. في موقع التطبيق المطلوب ، تتعرض الكاميرا لصدمة انتقائية عن طريق الكشط اللطيف بقطعة واحدة من الملقط.

ثم يتم الإمساك بالكسب غير المشروع ووضعه في طبقات على الكاميرا مع الجزء الآخر من الملقط. يتم تثبيت أنثى التضحية بالفأر على لوحة. يتم ترطيب جدار البطن بقطع 70٪ من الإيثانول على طول خط الوسط ويتم تثبيت اللوحات الجلدية بشكل جانبي بواسطة دبابيس.

تتم إزالة الرحم من البطن وفصله ونقله إلى دورق مع PBS الباردة. تتم إزالة الأغشية الجنينية بعناية باستخدام الملقط لأغراض العرض التوضيحي.

هنا جنين فأر عمره 16 يوما لتحسين رؤية براعم الأطراف. يتم الحصول على نتائج التطعيم المثلى فقط. ومع ذلك ، إذا تم استخدام براعم الأطراف من 10 إلى 13 يوما ، يتم قطع براعم الأطراف أو استخدام ملقط ناعم بالقرب من الجسم قدر الإمكان.

في موقع التطبيق المطلوب ، يتعرض CAM لصدمة انتقائية عن طريق الكشط اللطيف باستخدام الملقط. ثم يتم الإمساك ببراعم الأطراف ونقلها إلى CAM لدجاجة مضيفة عمرها ثمانية إلى 10 أيام. يتم وضع الكسب غير المشروع مرة أو مرتين على جانب من الكاميرا حيث لا يهدف التطعيم النهائي إلى إزالة PBS الزائد.

يتم وضع الطعوم بشكل مثالي على الكاميرا بالقرب من تشعب Y لورم الأوعية الدموية. يتم تقطيع الخزعات إلى قطعة من واحد إلى ملليمترين مكعبين بواسطة مشارط معقمة. يزيد أخذ المواد من سطح الخزعة من خطر التلوث بالعضلات أو النسيج الضام.

في موقع التطبيق المطلوب ، يصاب CAM بصدمة انتقائية عن طريق الكشط اللطيف. يتم تطعيم قطعة من قلب عينة الخزعة على الطب التكميلي والبديل لدجاجة مضيفة عمرها ثمانية إلى 10 أيام. يتم وضع الطعوم بشكل مثالي على الكاميرا بالقرب من تشعب Y للأوعية الدموية.

ثم يتم نقل الكسب غير المشروع إلى CAM مع إرفاق الحد الأدنى من PBS. يمكن تطبيق ضغط خفيف لمناورة الكسب غير المشروع في مسافة بادئة ناتجة عن الكاميرا. يقتل جنين الفرخ المضيف بقطع الرأس.

تتم إزالة CAM مع الكسب غير المشروع المرفق بقطع دائري ونقله إلى طبق بتري مملوء ب PBS. يتم قطع الطب التكميلي التكميلي المفرط من الكسب غير المشروع باستثناء موقع التعلق السابق. مرة أخرى في موقع التطبيق المطلوب.

تتعرض كاميرا جنين كتكوت مضيف جديد لصدمة انتقائية عن طريق الكشط اللطيف ويتم نقل الكسب غير المشروع إلى كام المضيف الثاني مع الحد الأدنى من PBS المرفق. لقد أوضحنا للتو كيف يعمل CH X أو الثقافة حقا. لقد أوضحت لك المزايا مقارنة بتجارب Orval وأعطيتك بعض الأمثلة لتطبيقها.

هذا كل شيء. شكرا لك على المشاهدة ونتمنى لك السعادة في تجاربك.