زرع الثدي الداخلي طلائي

يوضح هذا الفيديو إجراءات حصاد الظهارة الثديية، وتخليص الوسادة الدهنية الثديية، وزرع ظهارة خارجية لدراسة تطور الثدي في الفئران التي تبلغ من العمر ثلاثة أسابيع؛ حيث يقتصر نمو الشجرة الظهارية الثديية على المنطقة المجاورة للحلمة، وتكون الوسادة الدهنية خالية إلى حد كبير من الظهارة الثديية. ومع نضوج الفأر، تنمو الشجرة الظهارية عبر الوسادة الدهنية.

بحلول الأسبوع السابع من العمر، تمتد الشجرة القنوية الطلائية لتشمل الوسادة الدهنية بأكملها. وإذا تمت إزالة الجزء الصغير من الوسادة الدهنية الذي يحتوي على الخلايا الطلائية في الأسبوع الثالث من العمر، فإن الخلايا الطلائية الداخلية لن تستوطن الوسادة الدهنية الذاكرة أبداً، وفي هذه الحالة توصف الوسادة الدهنية بأنها مخلصة (cleared) وستبقى كذلك عند النضج. ومع ذلك، فإن الخلايا الطلائية أو الظهارة الذاكرة المانحة المزروعة تمتلك القدرة على مد أشجار قنوية ذاكرة عبر المضيف المخلص.

الوسادة الدهنية. يمكن بعد ذلك استخدام علم الأنسجة لمراقبة تطور الذاكرة في الأنسجة المزروعة من حيوانات معدلة وراثياً أو حيوانات تجريبية. مرحباً، اسمي جوزيف جيري، وأنا من قسم العلوم البيطرية والحيوانية في جامعة ماساتشوستس.

مرحباً، اسمي كارين دنفي، وأعمل في مختبر جيري. سنقوم اليوم بإجراء عملية نقل ظهارة ثديية.

نستخدم هذا الإجراء لدراسة الأساس الجزيئي والخلوي لتكون أورام الثدي ونموذج لسرطان الثدي. لذا، فلنبدأ. تتمثل الخطوة الأولى من إجراء الزرع في حصاد نسيج ظهارة الثدي من الفأر المانح.

ابدأ بغسل فأرة أنثى تم قتلها رحيماً مؤخراً باستخدام 70% ethanol دون ثقب أغشية الـ SRUs في تجويف الجسم البطني. قم بإجراء قطع سهمي متوسط عبر الجلد يمتد من العانة إلى القص. ثم قم بإجراء قطع مائل من الشق الأولي عند العانة باتجاه كل ساق خلفية.

استخدم ملقطاً منحنياً للإمساك بأغشية SRUs. ثم باستخدام ملقط مسنن مستقيم، أمسك الحافة المقطوعة من الجلد وقم بتقشير جدار الجسم بعناية بعيداً عن أغشية S cs.

لكشف الغدة التذكارية الإربية الرابعة الملتصقة بالجانب السفلي من جدار الجسم، تقع العقدة اللمفاوية داخل الغدة التذكارية عند تقاطع ثلاثة أوعية دموية بارزة في الغدة التذكارية، ويمكن تحسسها كعقدة كثيفة داخل الوسادة الدهنية. باستخدام طرف مقص جراحي دقيق (eye scissors)، قم بقص النسيج الدهني المحيط بالعقدة اللمفاوية. بعد ذلك، وبوضع السبابة على الجانب البشروي من الجلد، اضغط لرفع العقدة خارج الوسادة الدهنية ثم قم بقرصها لفصلها.

باستخدام ملقط منحني، تخلص من العقدة اللمفاوية. الآن، وأثناء تثبيت حواف الجلد، أمسك بالوسادة الدهنية الثديية بالحافة المنحنية لملقط منحني وقم بتقشير الوسادة الدهنية تدريجياً بعيداً عن جدار الجسم. وباتباع اتجاه الوسادة الدهنية نحو السطح الظهري للفأر، قم بإزالة الغدة الثديية بأكملها كقطعة واحدة.

ضع الغدة الذاكرية على كتلة قطع بلاستيكية معقمة مع إضافة كمية صغيرة من الوسط الغذائي، حوالي 200 microliters على سطح الغدة للحفاظ على رطوبتها. بعد ذلك، قم بتقطيع الغدة إلى قطع بحجم واحد millimeter باستخدام شفرة حلاقة جديدة. ثم قسم الغدة المقطعة إلى أربعة أجزاء.

بعد ذلك، باستخدام الملقط، يتم توزيعها على أربعة أنابيب تجميد تحتوي على وسط التجميد. توضع أنابيب التجميد في مجمّد خلايا من نوع Nalgene يحتوي على 250 milliliters من الكحول الأيزوبروبيلي في الحجرة الخارجية. ثم يوضع مجمّد الخلايا عند درجة حرارة minus 70 °C لمدة 24 ساعة.

بعد مرور 24 ساعة، يتم نقل القوارير المجمدة التي تحتوي على شظايا الذاكرة إلى النيتروجين السائل حتى يحين وقت استخدامها في عملية الزرع. تحتوي كل قارورة تجميد على كمية كافية من شظايا الغدة الذاكرة للزرع في الوسادات الدهنية المفرغة لأربعة إلى ثمانية فئران مستقبلة. بعد التحقق من عمق التخدير لفأر مستقبل يبلغ من العمر ثلاثة أسابيع عن طريق قرص الإصبع، يتم تثبيت الفأر بإحكام بحيث يكون الجانب البطني للأعلى والأطراف ممددة على منصة جراحية لضمان شد منطقة البطن.

يجب إعطاء مسكن للألم قبل الجراحة، مثل bupivacaine أو buprenorphine، عن طريق الحقن تحت الجلد. يتم تطهير المنطقة الجراحية بالكحول ومحلول فرك يعتمد على اليود باستخدام الملاقط. أمسك الجلد على بعد بضعة مليمترات فوق الحوض وارفه للأعلى بعيداً عن البطن.

قم بقص الجلد بعناية، مع التأكد من أن الشق الأولي ليس قريبًا جدًا من الإحليل، حيث قد يؤدي وضع مشابك الجروح إلى إعاقة قدرة الفأر على التبول. بعد ذلك، مع الحرص على عدم ثقب أغشية الـ SRUs، قم بإجراء قطع سهمي متوسط عبر الجلد يمتد من العانة إلى القص.

الآن، وبدءاً من الشق الأولي، قم بإجراء شقوق مائلة عبر الجلد من الخط الناصف عبر الحوض باتجاه كل رجل خلفية. وباستخدام ملاقط منحنية، أمسك بلطف أغشية S ceros في الجدار البطني للجسم. ثم استخدم ملاقط الأنسجة للإمساك بالحافة المقطوعة من الجلد واسحب جدار الجسم بعيداً عن أغشية ceros.

لكشف الغدة الذاكرة الإربية الرابعة، حدد موقع الغدة الذاكرة الرابعة. ثم حدد موقع الغدة الذاكرة الخامسة، وقم بكي العقدة الحلمية والشريانين المؤديين إلى العقدة. افصل بين الغدتين الرابعة والخامسة، ثم قم بكي حافة الغدة الخامسة.

بعد ذلك، وباستخدام المقص، يتم القص عرضياً عبر الوسادة الدهنية في الجهة البطنية من العقدة لتقسيم الوسادة الدهنية للغدة الثديية الرابعة. وباستخدام ملقط منحني، يتم الإمساك بإحكام بالجزء البطني من الوسادة الدهنية وسحبها بعيداً عن جدار الجسم. ويُنصح بضغط النسيج المستأصل، كقطعة واحدة، بين شريحتين مسميتين وتثبيته في مثبت كارنو (Carnoy's fixative).

يمكن لاحقاً صبغ النسيج وتثبيته وتقييمه للتأكد من خلو الحواف. باستخدام الملقط، قم بإزالة جميع آثار الغدة الذاكرية حول منطقة الجزء المستأصل من الوسادة الدهنية. أصبح الحيوان الآن جاهزاً لعملية نقل الأنسجة أو الخلايا.

يمكن نقل الأنسجة الظهارية المتبرع بها، سواء كانت طازجة أو مجمدة تجميداً سريعاً، إلى الوسادة الدهنية التي تمت إزالتها. بدلاً من ذلك، يمكن نقل خطوط الخلايا الظهارية الخالدة، أو خطوط الخلايا الورمية، أو الخلايا الأولية. للحصول على تفاصيل حول تحضير الخلايا، يرجى مراجعة البروتوكول المكتوب المرفق الخاص بنقل قطع الظهارة المحضرة.

يبدأ هذا الفيديو بإذابة أنبوب تجميد يحتوي على ظهارة، ونقل الشظايا إلى طبق بتري يحتوي على وسط غذائي طازج. ولتخفيف تركيز DMSO، استخدم مقصاً لعمل جيب في ظهارة الوسادة الدهنية التي تم تنظيفها للفأر المستقبل. ثم باستخدام ملقط إبري، ضع قطعة بمقدار 1 ملم من الظهارة المانحة داخل الجيب.

عند الضرورة، قم بإغلاق الجيب باستخدام ملقط الأنسجة واسحب ملقط الإبرة لضمان بقاء الأنسجة في مكانها. أمسك حواف الجلد المتقابلة، ثم ثبتهما معاً باستخدام الملقط.

ارفعها بعيداً عن أغشية السروز في التجويف الجسمي البطني وأغلقها باستخدام مشابك الجروح. استخدم مشبكين لإغلاق الشق السهمي الناصف ومشبكاً واحداً لكل شق مائل. تجنب سد الإحليل إذا لزم الأمر.

أغلق الفجوات في الجلد عند تقاطع الشقوق السهمية والقطرية باستخدام غرزة جراحية. ضع الفأرة في قفصها وأبقِ القفص تحت مصباح تدفئة حتى تستعيد الفأرة وعيها. يجب إزالة مشابك الجرح بعد أسبوعين.

تظهر الشرائح التالية صوراً نموذجية لما يمكن توقعه في غدة الذاكرة لدى المضيف بعد تصفية الوسادة المغذاة وزراعة الظهارة؛ حيث تظهر هذه الصورة الظهارة الذاكرية الداخلية التي تمت إزالتها من فأر يبلغ من العمر ثلاثة أسابيع. وفي إجراء تصفية الغدة، يُلاحظ وجود حواف واضحة عند حافة القطع. يجب تحضير عينة كاملة مثل هذه بعد كل إجراء لتقييم الحواف التي تمت تصفيتها.

تظهر هذه الصورة الوسادة الدهنية المصفاة للفأر بعد سبعة أسابيع من إجراء التصفية. لاحظ أن الوسادة الدهنية بأكملها خالية من الظهارة، والهيماتين، والأسين. كما يوضح تلوين الوسادة الدهنية المصفاة بعد سبعة أسابيع من إجراء التصفية أن الغدة خالية من الظهارة.

يظهر هنا عينة تمثيلية لكامل تركيب وسادة دهنية مصفاة تم زرع ظهارة ذاكرة مانحة فيها من فأر يبلغ من العمر 10 أسابيع. لاحظ أن الظهارة المزروعة قد أنتجت أشجاراً قنوية ظهارية طبيعية، وهيماتين، وأسنا. صبغ وسادة دهنية مصفاة وذاكرة.

يكشف الزرع الظهاري في العمر نفسه عن الإنتاج الطبيعي للقنوات الظهارية من الظهارة الخارجية. هنا، يُظهر صبغ وسادة دهنية مصفاة باستخدام hematin و eosin زرعاً ظهارياً تطور إلى ورم ثديي. لقد عرضنا لكم للتو كيفية حصاد الظهارة الثديية وإجراء عملية زرع للظهارة الثديية.

عند تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر قطع الاتصالات بين الغدة الرابعة والخامسة لكيّ العقدة والحلمة، وإزالة جميع آثار الظهارة الداخلية. يجب التأكد من عدم وجود أي احتمالية لنمو الظهارة الداخلية في الوسادة الدهنية التي تم إخلاؤها. بالإضافة إلى ذلك، يُنصح بجمع كامل الجزء المستأصل من الغدة الثديية للتحقق من خلو الحواف من الخلايا الظهارية.

هذا كل شيء. شكراً للمشاهدة ونتمنى لكم التوفيق في تجاربكم.