زرع الثدي الداخلي طلائي

يوضح هذا الفيديو إجراءات حصاد الظهارة الثديية، وإخلاء الوسادة الدهنية الثديية، وزرع ظهارة خارجية لدراسة تطور الثدي في الفئران التي تبلغ من العمر ثلاثة أسابيع؛ حيث يقتصر نمو الشجرة الظهارية الثديية على المنطقة المجاورة للحلمة، وتكون الوسادة الدهنية خالية إلى حد كبير من الظهارة الثديية. ومع نضوج الفأر، تنمو الشجرة الظهارية عبر الوسادة الدهنية.

بحلول الأسبوع السابع من العمر، تمتد الشجرة القنوية الظهارية في جميع أنحاء الوسادة الدهنية بالكامل. وإذا تمت إزالة الجزء الصغير من الوسادة الدهنية الذي يحتوي على الظهارة في الأسبوع الثالث من العمر، فإن الظهارة الداخلية لن تستوطن أبداً الوسادة الدهنية الذاكرة، وتوصف الوسادة الدهنية حينها بأنها خالية، وستظل خالية عند البلوغ. ومع ذلك، فإن الظهارة أو الخلايا الظهارية الذاكرة المانحة المزروعة لديها القدرة على تمديد أشجار قنوية ذاكرة في جميع أنحاء المضيف الخالي.

الوسادة الدهنية. يمكن بعد ذلك استخدام علم الأنسجة لمراقبة تطور الذاكرة في الأنسجة المزروعة من حيوانات معدلة وراثياً أو حيوانات اختبار. مرحباً، اسمي جوزيف جيري، وأنا من قسم العلوم البيطرية والحيوانية في جامعة ماساتشوستس.

مرحباً، اسمي كارين دنفي. أعمل في مختبر جيري. سنقوم اليوم بإجراء عملية زراعة للخلايا الظهارية الثديية.

نستخدم هذا الإجراء لدراسة الأساس الجزيئي والخلوي لتكون أورام الثدي ونموذج لسرطان الثدي. لذا، لنبدأ الآن. تتمثل الخطوة الأولى من إجراء الزرع في حصاد نسيج الثدي الظهاري من الفأر المانح.

ابدأ بغسل فأرة أنثى تم قتلها رحيمًا مؤخرًا باستخدام 70%ethanol دون ثقب أغشية الـ SRUs في تجويف الجسم البطني. قم بإجراء قطع سهمي متوسط عبر الجلد يمتد من العانة إلى القص. ثم قم بإجراء قطع مائل من الشق الأولي عند العانة باتجاه كل ساق خلفية.

باستخدام ملاقط منحنية، أمسك أغشية SRUs. ثم باستخدام ملاقط مستقيمة مسننة، أمسك الحافة المقطوعة من الجلد وقشر جدار الجسم بعناية بعيداً عن أغشية S cs.

لكشف الغدة الذاكرة الإربية الرابعة الملتصقة بالجانب السفلي لجدار الجسم، توجد العقدة الليمفاوية داخل الغدة الذاكرة عند تقاطع ثلاثة أوعية دموية بارزة في الغدة الذاكرة، ويمكن الشعور بها كعقيدة كثيفة داخل الوسادة الدهنية. باستخدام طرف مقص عيون، قم بقص النسيج الدهني المحيط بالعقدة الليمفاوية. ثم ضع إصبع السبابة على الجانب البشروي للجلد، واضغط لرفع العقدة خارج الوسادة الدهنية ثم انتزعها.

باستخدام ملقط منحني، تخلص من العقدة اللمفاوية. الآن، وأثناء تثبيت حواف الجلد، أمسك بكتلة الدهون الثديية بالحافة المنحنية لملقط منحني وقم بتقشير كتلة الدهون تدريجيًا بعيدًا عن جدار الجسم. باتباع اتجاه الغدة الثديية نحو السطح الظهري للفأر، قم بإزالة الغدة الثديية بأكملها كقطعة واحدة.

ضع غدة الذاكرة على كتلة تقطيع بلاستيكية معقمة مع إضافة كمية صغيرة من الوسط الغذائي، حوالي 200 microliters، على سطح الغدة للحفاظ على رطوبتها. بعد ذلك، قم بتقطيع الغدة إلى قطع بحجم واحد millimeter باستخدام شفرة حلاقة جديدة. قسم الغدة المقطعة إلى أربعة أجزاء.

بعد ذلك، وباستخدام الملقط، قم بتوزيع العينات على أربع أنابيب تجميد تحتوي على وسط تجميد. ضع أنابيب التجميد في مجمّد خلايا من نوع Nalgene يحتوي على 250 milliliters من isopropyl alcohol في الحجرة الخارجية. ثم ضع مجمّد الخلايا عند درجة حرارة minus 70 °C لمدة 24 ساعة.

بعد مرور 24 ساعة، تُنقل الأنابيب المجمدة التي تحتوي على شظايا الذاكرة إلى النيتروجين السائل حتى يحين وقت استخدامها في عملية الزرع. تحتوي كل أنبوبة تجميد على شظايا غدة ذاكرة كافية للزرع في الوسائد الدهنية المفرغة من أربعة إلى ثمانية من الفئران المضيفة. بعد التحقق من عمق التخدير لفأر مضيف يبلغ من العمر ثلاثة أسابيع عن طريق قرص إصبع القدم، يتم تثبيت الفأر بإحكام بحيث يكون الجانب البطني للأعلى والأطراف ممدودة على منصة جراحية لضمان شد منطقة البطن.

يجب إعطاء مسكن للألم قبل العملية، سواء كان bupivacaine أو buprenorphine، عن طريق الحقن تحت الجلد. يتم تعقيم منطقة الجراحة باستخدام الكحول ومحلول غسيل يعتمد على اليود باستخدام الملاقط. يتم الإمساك بالجلد على بعد بضعة مليمترات فوق الحوض ورفعه عن البطن.

قم بقص الجلد بعناية، مع التأكد من أن الشق الأولي ليس قريباً جداً من الإحليل، حيث قد يؤدي وضع مشابك الجروح إلى إعاقة قدرة الفأر على التبول. بعد ذلك، مع الحرص على عدم ثقب أغشية وحدات التكاثر الجذري (SRUs)، قم بإجراء قطع سهمي متوسط عبر الجلد يمتد من عظم العانة إلى عظم القص.

الآن، انطلاقاً من الشق الأولي، قم بإجراء قطوع مائلة عبر الجلد من الخط الناصف عبر الحوض باتجاه كل رجل خلفية. وباستخدام ملقط منحني، أمسك برفق أغشية الـ S ceros لجدار الجسم البطني. ثم استخدم ملقط أنسجة للإمساك بالحافة المقطوعة من الجلد واسحب جدار الجسم بعيداً عن أغشية الـ ceros.

لكشف الغدة الذاكرة الإربية الرابعة، حدد موقع الغدة الذاكرة الرابعة. حدد موقع الغدة الذاكرة الخامسة، ثم قم بكي العقدة الحلمية والشريانين المؤديين إلى العقدة. افصل بين الغدتين الرابعة والخامسة، ثم قم بكي حافة الغدة الخامسة.

بعد ذلك، وباستخدام المقص، يتم القص عرضياً عبر الوسادة الدهنية في المنطقة البطنية من العقدة لتقسيم الوسادة الدهنية للغدة الثديية الرابعة. وباستخدام ملقط منحني، يتم الإمساك بإحكام بالجزء البطني من الوسادة الدهنية وسحبها بعيداً عن جدار الجسم. ويُنصح بضغط النسيج المستأصل، كقطعة واحدة، بين شريحتين مُصنفتين وتثبيته في مثبت Carnoy.

يمكن لاحقاً صبغ النسيج وتثبيته وفحص الحواف للتأكد من خلوها من الخلايا. باستخدام الملقط، قم بإزالة جميع آثار الغدة الذاكرة حول منطقة الجزء المستأصل من الوسادة الدهنية. أصبح الحيوان الآن جاهزاً لعملية زرع الأنسجة أو الخلايا.

يمكن نقل أنسجة ظهارية من متبرع، سواء كانت طازجة أو مجمدة بالتجميد السريع، إلى الوسادة الدهنية المجهزة. وبدلاً من ذلك، يمكن نقل خطوط خلوية ظهارية خالدة، أو خطوط خلوية ورمية، أو خلايا أولية. للحصول على تفاصيل حول تحضير الخلايا، يرجى مراجعة البروتوكول المكتوب المصاحب لنقل شظايا الظهارة.

يبدأ هذا الفيديو بإذابة أنبوب تجميد يحتوي على ظهارة، ثم نقل الشظايا إلى طبق بتري يحتوي على وسط غذائي طازج. ولتخفيف تركيز DMSO، يتم استخدام مقص لعمل جيب في ظهارة وسادة دهنية تم تنظيفها في الفأر المستقبل. بعد ذلك، وباستخدام ملقط إبري، يتم وضع قطعة من الظهارة المانحة بطول 1 mm داخل الجيب.

إذا لزم الأمر، أغلق الجيب باستخدام ملقط الأنسجة واسحب ملقط الإبرة بحيث تبقى الأنسجة في مكانها. أمسك حواف الجلد المتقابلة، وثبتها معاً باستخدام الملقط.

ارفعها بعيداً عن أغشية السيروز في تجويف الجسم البطني وأغلقها باستخدام مشابك الجروح. استخدم مشبكين لإغلاق الشق السهمي الناصف ومشبكاً واحداً لكل شق مائل. تجنب سد الإحليل إذا لزم الأمر.

أغلق الفجوات في الجلد عند تقاطع الشقين السهمي الناصف والمائل باستخدام خيط جراحي. ضع الفأرة في قفصها وأبقِ القفص تحت مصباح تدفئة حتى تستعيد الفأرة وعيها. يجب إزالة مشابك الجرح بعد أسبوعين.

توضح الشرائح التالية صوراً نموذجية لما يمكن توقعه في غدة الذاكرة للمضيف بعد إزالة الوسادة المغذاة وزراعة الظهارة؛ حيث تُظهر هذه الصورة الظهارة الذاكرية الداخلية التي تمت إزالتها من فأر يبلغ من العمر ثلاثة أسابيع. في إجراء إخلاء الغدة، لاحظ الحواف الواضحة عند طرف القطع. يجب تحضير عينة تركيبية كاملة مثل هذه بعد كل إجراء لتقييم الحواف التي تم إخلاؤها.

توضح هذه الصورة الوسادة الدهنية المصفاة للفأر بعد سبعة أسابيع من إجراء التصفية. يلاحظ أن الوسادة الدهنية بأكملها خالية من الظهارة الذاكرة، والهيماتين، والأسين. كما يظهر صبغ الوسادة الدهنية المصفاة بعد سبعة أسابيع من إجراء التصفية أن الغدة خالية من الظهارة الذاكرة.

يظهر في الشكل تحضير نموذجي كامل (whole mount) لوسادة دهنية مُصفّاة تم زرع ظهارة ذاكرة مانحة فيها من فأر يبلغ من العمر 10 أسابيع. يُلاحظ أن الظهارة المزروعة أنتجت أشجاراً قنوية ظهارية طبيعية، وهيماتين وأسناين. صبغ للوسادة الدهنية المصفاة والذاكرة.

يكشف الزرع الظهاري في السن نفسه عن الإنتاج الطبيعي للقنوات الظهارية من الظهارة الخارجية. هنا، يُظهر صبغ وسادة دهنية مصفاة باستخدام hematin و eosin زرعاً ظهارياً تطور إلى ورم ثديي. لقد عرضنا لكم للتو كيفية حصاد الظهارة الثديية وإجراء عملية زرع للظهارة الثديية.

عند تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر قطع الاتصالات بين الغدة الرابعة والخامسة لكيّ العقدة والحلمة، وإزالة جميع آثار الظهارة الداخلية. يجب التأكد من عدم وجود أي إمكانية لنمو الظهارة الداخلية في الوسادة الدهنية التي تم إخلاؤها. بالإضافة إلى ذلك، يُنصح بجمع الجزء المستأصل بالكامل من الغدة الثديية للتحقق من خلو الحواف.

هذا كل شيء. شكراً للمشاهدة، وبالتوفيق في تجاربكم.