Name: استرجاع البويضات ماوس (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: تعلم استرجاع البويضات والأجنة المبكرة من إناث Peromyscus باستخدام حقن وسط FHM في قمع قناة فالوب. هذه الطريقة تدعم دراسات التعبير الجيني والبحوث التطويرية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأود أن أشكر مايك ديوي من مركز ألبوم الوراثية Peromyscus على صبره والمساعدة والمعرفة.

جنين / سيت استرجاعها <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجب إذابة مدة ساعتين على الأقل قبل استرجاع الأجنة / البويضات ، يتم وضع KSOM في 37 درجة مئوية حاضنة 2 أكسيد الكربون وFHM من ° -20. ويستخدم الزجاج صحن يحتوي على ثلاثة آبار ضحلة مقعرة لقطرات منزل KSOM في الحاضنة. لمنع الجفاف ، وتوضع في طبق وKSOM حاوية بغطاء الماء الذي في الأسفل. هذا الجهاز يمنع التبخر من دون استخدام الزيوت المعدنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توضع ناقلة البيضات من الإناث البيض في وسائل الإعلام FHM. لضمان التوجه infindibulum وسليمة ، ويتم قطع جزء صغير من المبيض مع قسم صغير من قناة البيض والرحم. يتم استخدام إبرة حادة قياس 30 لطرد الأجنة / البويضات من قناة البيض وذلك بإضافة إبرة حادة في infindibulum. يجب استخدام infindibulum لاسترداد الأجنة منذ أنابيب قناة البيض صغير جدا عن إبرة لتمرير. في حال تم إتلاف infindibulum ، يجب أن تكون قناة البيض شرائح إما فتح أو ضغط من الأجنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم العثور على الأجنة / البويضات في وسائل الإعلام من خلال التركيز FHM المجهر على قطرات الدهون التي غرقت في قاع الطبق بيتري. لا يمكن أن يتحقق جنين / البويضة في عزلة 20X لأن هذا يوفر مساحة أكبر من عرض التكبير عالية. جنين / البويضات تبدو وكأنها قطرات الدهون الجولة التي لها رنين واضحة حولها. يستخدم pipetting الفم ، وذلك باستخدام الزجاج وسحبت الشعرية ، لنقل الأجنة / البويضات لKSOM للحضانة والتلاعب أخرى. </li></ol> الداخلي لاسترجاع سيت إعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ذوبان الجليد وإعداد FHM kSOM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقبل ساعات قليلة ، kSOM مكان في حاوية استرجاع البيض ووضعه في خانة الطرف مع الماء في القاع ، في مكان CO 2 الحاضنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجلب أقفاص للمختبر وقتل الإناث الحصاد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع قناة البيض والحرص على خفض بعض من المبيض والرحم بعض لضمان أن لا قطع جزء من قناة البيض. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المكان في وسائل الإعلام في طبق بتري FHM الصغيرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب أكثر زوجين FHM أطباق بتري وسائل الإعلام لاستخدامها في التنظيف. </li></ol> بيغ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام إبرة بيغ (30 فظة قياس) متصلة مع نهاية الإبرة 1ml دوامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأخذ واحدة قناة البيض في وقت وباستخدام إبرة ، تضاف إلى قمع عثر عليها بالقرب من جزء من المبيض الأيسر المرفقة. إذا تم تدمير وقمع لا يمكن استخدامها ، ثم اثنين ملقط اتخاذ اجراء واحدة من نهاية قناة البيض. مع forcep أخرى ، الضغط بلطف ، مثل أنبوب معجون الأسنان ، لإخراج أي من الجنين. ملاحظة : هذا سيخلق كمية كبيرة من الطعام في صحن بيتري ، والكثير من الأنسجة سيأتي معه ، لذا قد تحتاج إلى استخدام طبق بتري مختلفة بعد ذلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انظر إلى الأجنة ، والتركيز على قطع المجهر الدهون والبحث عن &quot;قطعة من الدهون&quot; دائرة مستديرة مع واضحة حولها. ملاحظة : قد تبدو الأجنة نفس الدهون ، لذلك قد يكون من الصعب العثور عليها. الأجنة تنزل الى القاع ، حتى ننظر هناك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لا المسحات المهبلية للإناث المتلقية. في هذه المرحلة ، ينبغي أن تكون pseudopregnant. </li></ol>

في هذه المقالة ، ونحن لشرح استرجاع البويضات من الاباضة بفعل Peromyscus (superovulated). استخدام فرط الإباضة (على العكس من دورة دقي الطبيعي) هو شائع نظرا لأعداد أكبر بكثير الناتجة عن ذلك. ومع ذلك ، يجب اتخاذ الحذر في تفسير نتائج استخدام هذه البويضات / الأجنة ، كما كل من الهرمونات المستخدمة للحث على التبويض وزراعة قد يكون لها آثار. عندما تم تأكيد ودقي ، وeuthenized الإناث واستعادت ناقلة البيضات مع جزء صغير من المبيض. ويستخدم هذه المنطقة الصغيرة من المبيض ك...

<table><tbody><tr><td>إبرة غسيل</td><td>أداة</td><td>Zephyrtronics</td><td>ZT5-130-L</td><td>30 G blunt</td></tr><tr><td>ملاقط (2)</td><td>أداة</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5060</td><td></td></tr><tr><td>Peromyscus</td><td>حيوان</td><td>Peromyscus Genetic Stock Center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>مقصات</td><td>أداة</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5880</td><td></td></tr><tr><td>وسط FHM HEPES المنظم</td><td>كاشف</td><td>Specialty Media</td><td>MR-025-d</td><td></td></tr><tr><td>وسط زراعة الأجنة KSOM (5x 10 mL)</td><td>كاشف</td><td>Specialty Media</td><td>MR-020P-5F</td><td></td></tr><tr><td>ماصة فموية</td><td>أداة</td><td></td><td></td><td>سُحبت من شعيرات زجاجية وثُبّتت في أنابيب مطاطية</td></tr><tr><td>طبق تثبيت البويضات</td><td>أداة</td><td></td><td></td><td>وعاء زجاجي يحتوي على تجاويف مقعرة</td></tr></tbody></table>

استرجاع البويضات ماوس

Retrieval of Mouse Oocytes

حتى الآن ، وأفادت دراسات قليلة فقط التلاعب الناجح للمرحلة التطور الجنيني Peromyscus أو البيولوجيا الإنجابية. جنبا إلى جنب مع الأسهم Peromyscus مركز الوراثية (http://stkctr.biol.sc.edu) ، ونحن تميز الاختلافات البارزة اللازمة لتطوير هذا النظام. وكان أحد الأهداف الرئيسية لتحسين البويضة / أوائل استرجاع الجنين.

هذا البروتوكول يوضح تقنية لاستخراج البويضات أو الأجنة في مرحلة مبكرة من قناة البيض المخصب من الفئران. القدرة على تحديد infindibulum وادخال ابرة في نهاية حادة من الضروري القيام بشكل صحيح الإجراء.

حتى الآن، لم يبلغ سوى عدد قليل من الدراسات عن نجاح في إجراء تلاعبات في التكون الجنيني أو البيولوجيا التناسلية للفئران من جنس Peromyscus. وبالتعاون مع Peromyscus...

اسمي أماندا دلي، وأنا من مختبر الدكتور بول فيرانا في جامعة كاليفورنيا إيرفاين. سأعرض لكم اليوم إجراء عملية استخراج البويضات.يتضمن ذلك عزل الـ videx من الأنثى. وبمجرد عزل الـ ovex، سنقوم بحقن وسط FHM عبر الـ videx، ومن ثم يجب أن تخرج الـ cytes من الرحم. وبمجرد إتمام ذلك، سنقوم بعزل الـ cytes في الوسط واستخدامها في التجارب المستقبلية.بالإضافة إلى عزل الخلايا، يمكنك استخدام هذا الإجراء لعزل الأجنة في نقاط زمنية محددة. وأحد الأسباب التي قد تدفعك لمشاهدة هذا الإجراء في تنسيق الفيديو هو أن الأجزاء المختلفة من قناة البيض قد يكون من الصعب جداً تمييزها. في هذا الفيديو، سأقوم بتحديد القمع حيث ستقوم بحقن وسط FHM.تتكون أدوات التشريح التي ستستخدمها من مجموعتين من الملاقط الحادة ومقص حاد واحد. يتم وضع القنوات البيضية التي تم استخراجها من الأنثى في وسط FHM، الموجود في طبق زراعة أنسجة بقطر 35 millimeter. يتم استعادة البيض باستخدام إبرة ذات طرف غير مدبب بقطر 30 millimeter متصلة بمحقنة سعة 1 milliliter، ويتم تثبيت uc باستخدام ملقط حاد.يُعد FHM وسط حفظ يُستخدم لتجميع الخلايا. أما KSOM فهو الوسط المستخدم للسماح بنمو الخلايا داخل الحاضنة في حال حدوث الإخصاب. وبمجرد استعادة البويضات والأجنة من قناة البيض، سنستخدم ماصة نقل زجاجية تم سحبها من أنبوب شعري، مع توصيل بعض الأنابيب وسحبها عن طريق الفم إلى وسط الحفظ.يُستخدم طبق زجاجي مقعر لحفظ الأجنة والبويضات. ويمكن وضعها في كل دائرة مقعرة بحيث تكون في موقع منفصل، مما يسهل العثور عليها. يتم وضع هذا الطبق داخل هذه الحاوية حتى يمكن إدخاله في حاضنة CO2 دون استخدام الزيت.فوق وسط FHM أو KSOM، وبناءً على نوع الوسط المستخدم، يتم وضع الماء في القاعدة، ثم يُغلق الصنبور ليبقى السائل في مكانه. ويُستخدم الإيثانول بتركيز 70% لضمان عدم وصول الشعر. سنقوم بإجراء شق صغير في منطقة البطن وشق في التجويف البطني.سنقوم بتوسيع الشق لتعريض منطقة البطن. وبمجرد القيام بذلك للكشف عن الرحم، سنقوم بإزاحة الأمعاء جانباً، ومن ثم يظهر الرحم بوضوح في الأسفل. يتخذ الرحم شكل حرف Y، وسنقوم باستئصال جزء من الرحم.عندما يتم قطع قناة البيض، فإنها تبدو مثل السباغيتي. سأحاول أخذ جزء من قناة البيض، حيث سآخذ الـ UCT وجزءاً من المبيضين المحاطين بالدهون.سيتم أخذ الجانب الآخر. في هذه المرحلة، سنقوم مجددًا برفع المبيض أو الرحم. سنرفع الرحم هنا، ونقص أسفل نقطة التثبيت. وفي هذه المرحلة، يتم العثور على القنوات الناقلة.سأقوم بأخذ جزء من مبيض OV معنا. سيتم بعد ذلك وضعه في الوسط الغذائي. لا يزال الرحم في حالة انقباض.يتكون الرحم من عضلات ملساء، لذا فإنه حتى بعد فصله عن الجسم، تظل العصبونات في حالة استثارة. يظهر الرحم هنا. وبينما تبدو قناة فالوب مثل المعكرونة ويقع المبيض فوقها، فإن قناة فالوب ليست متصلة فعلياً بالمبيض.بينما لم نعرض سوى جزء من المبيض في هذه المرحلة، فإن يدي المهيمنة هي يدي اليمنى التي أمسك بها الإبرة ذات الطرف غير المدبب قياس 30 gauge. أستخدمها كملقط لعزل الـ in fibula. وبمجرد عزلها، سأقوم بإدخال الإبرة غير المدببة في الـ in fibula وحقن بعض السائل الذي سيتدفق خارج الرحم.أمسك بيدي اليسرى ملقطاً حاداً، ويُستخدم هذا لعزل الشظية وتثبيت كل شيء في مكانه. أما الدُّعِلة فهي عبارة عن بنية معزولة هنا تشبه البوق.طرف إبرتي موجود في عظمة الشظية، والتي كانت تخترق طبقة النسيج. حسنًا. ولضمان عزل جميع الأجنة والبويضات، أفضل الضغط على الرحم كما لو كنت أضغط على أنبوب معجون أسنان. وبمجرد التركيز على الوسائد الدهنية، ابحث عما يشبه قطرات الدهون التي تكون متماثلة تماماً.توجد الآن بيضة واحدة مباشرة إلى يسار ذلك الجزء الطويل والسميك. هذه بيضة واحدة منفردة. لذا، سأقوم باستخدام الماصة الفموية لسحب البيضة، ووضعها في المزيد من الوسط الحافظ حتى نتمكن من عزل البيض نفسه.لقد أوضحت لكم اليوم كيفية عزل الخلايا من الجهاز التناسلي الأنثوي. بالإضافة إلى ذلك، استعرضت معكم التراكيب المختلفة لقناة فالوب؛ وبالأخص القمع، وهو التركيب الوحيد الذي يمكن من خلاله حقن وسط FHM.باستخدام إبرة قياس 30. من خلال هذه التقنية، قمت بعزل الخلايا وأي أجنة كانت موجودة في الجهاز التناسلي الأنثوي. ويمكنني استخدام هذه العينات في دراسات التعبير الجيني أو الأعمال المعدلة وراثياً.

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

البويضات عرضة لعدم توازن الصبغيات بسبب أخطاء في العزل الصبغي خلال نضوج الانتصافي. البيض يمكن أن تسبب العقم مختل الصيغة الصبغية ، والإجهاض ، أو اضطرابات النمو مثل متلازمة داون. هنا ، نحن تصف طرق لإدخال المواد المختارة في البويضات وأساليب لدراسة وتقييم النضج الانتصافي الصيغة الصبغية.

الماوس Microinjection سيت ، والنضج وتقييم الصيغة الصبغية

يصف هذا الفيديو عزل البويضات التاجية عن مبيض الفئران الذي تم حصاده حديثا. يمكن استخدام هذه البويضات التاجية لمزيد من التوصيف والدراسات التنموية.

عزل البويضات الجارية للفأر: طريقة لعزل البويضات الباطنة من مبيض الفئران الذي تم حصاده حديثا

هنا، نقدم بروتوكول معين استنزاف مرنا بوساطة سيرنا تليها التحليل المناعي لتقييم الجمعية المغزل الانتصافي والتنظيم في البويضات الماوس. هذا البروتوكول هو مناسبة لفي المختبر استنزاف النصوص والتقييم الوظيفي للمغزل مختلفة و / أو عوامل المرتبطة MTOC في البويضات.

تقييم المغزل الانتصافي في ماوس البويضات التي كتبها بوساطة سيرنا إسكات

هنا نقدم بروتوكول لتوصيف البويضات غاري الماوس على أساس تنظيم نويي.

عزل وتوصيف ماوس الغارية البويضات واستنادا إلى منظمة ونين نويي

تكون البويضات في الثدييات المعروف أن يكون عرضه للخطأ، لا سيما بسبب ميسيجريجيشن كروموسوم. توضح هذه المخطوطة الكروماتين انتشرت إعداد أساليب للماوس الطور الأول، الطورية الأول والثاني نظموا بويضات. تسمح هذه التقنيات الأساسية لدراسة البروتينات المرتبطة الكروماتين ومورفولوجيا كروموسوم طوال تكون البويضات الثديية.

الكروماتين انتشار الأعمال التحضيرية لتحليل تطور البويضات الماوس من الطور الأول الطورية الثاني

يتم تقديم بروتوكول محسن يتيح استنفاد مراكز تنظيم الأنابيب الدقيقة السيتوبلازمية في بويضات الفئران أثناء الطور الاستوائي الأول باستخدام ليزر الفيمتو ثانية القريب من الأشعة تحت الحمراء.

الاجتثاث بالليزر متعدد الفوتون لمراكز تنظيم الأنابيب الدقيقة السيتوبلازمية في بويضات الفأر

الخطأ في فصل الكروموسومات هو سمة شائعة في البويضات. لذلك ، فإن دراسة نقطة تفتيش تجميع المغزل تعطي أدلة مهمة حول الآليات اللازمة لإنتاج بيض صحي. يصف البروتوكول الحالي ثلاثة مقايسات تكميلية لتقييم سلامة نقطة تفتيش تجميع المغزل في بويضات الفئران.

تقييم سلامة نقطة تفتيش تجميع المغزل في بويضات الفأر

يوفر هذا البروتوكول إطارا تجريبيا لتوثيق التأثير المادي للهيكل الخلوي على الشكل النووي والعضيات الداخلية الخالية من الغشاء في نظام بويضات الفأر. يمكن تكييف الإطار للاستخدام في أنواع الخلايا والسياقات الأخرى.

التقاط التحريض القائم على الهيكل الخلوي لنواة بويضة الفأر عبر المقاييس المكانية

يصف هذا البروتوكول إجراءات النضج المختبري لبويضات الفئران، والتلقيح الصناعي ، والزراعة الجنينية اللاحقة حتى مرحلة الكيسة الأريمية.

نضج بويضات الفأر في المختبر، والتخصيب، وزراعة الأجنة قبل الانغراس

والمقصود من هذا الفيلم والبروتوكول للمساعدة في نقل التعلم النووية.

نقل النووي في البويضات ماوس

تعلم استرجاع البويضات والأجنة المبكرة من إناث Peromyscus باستخدام حقن وسط FHM في قمع قناة فالوب. هذه الطريقة تدعم دراسات التعبير الجيني والبحوث التطويرية.

استرجاع البويضات ماوس

استكشف المزيد من الفيديوهات