استرجاع البويضات ماوس

اسمي أماندا دلي، وأنا من مختبر الدكتور بول فيرانا في جامعة كاليفورنيا إيرفاين. سأعرض لكم اليوم إجراء عملية استخراج البويضات.

يتضمن ذلك عزل الـ videx من الأنثى. وبمجرد عزل الـ ovex، سنقوم بحقن وسط FHM عبر الـ videx، ومن ثم يجب أن تخرج الـ cytes من الرحم. وبمجرد إتمام ذلك، سنقوم بعزل الـ cytes في الوسط واستخدامها في التجارب المستقبلية.

بالإضافة إلى عزل الخلايا، يمكنك استخدام هذا الإجراء لعزل الأجنة في نقاط زمنية محددة. وأحد الأسباب التي قد تدفعك لمشاهدة هذا الإجراء في تنسيق الفيديو هو أن الأجزاء المختلفة من قناة البيض قد يكون من الصعب جداً تمييزها. في هذا الفيديو، سأقوم بتحديد القمع حيث ستقوم بحقن وسط FHM.

تتكون أدوات التشريح التي ستستخدمها من مجموعتين من الملاقط الحادة ومقص حاد واحد. يتم وضع القنوات البيضية التي تم استخراجها من الأنثى في وسط FHM، الموجود في طبق زراعة أنسجة بقطر 35 millimeter. يتم استعادة البيض باستخدام إبرة ذات طرف غير مدبب بقطر 30 millimeter متصلة بمحقنة سعة 1 milliliter، ويتم تثبيت uc باستخدام ملقط حاد.

يُعد FHM وسط حفظ يُستخدم لتجميع الخلايا. أما KSOM فهو الوسط المستخدم للسماح بنمو الخلايا داخل الحاضنة في حال حدوث الإخصاب. وبمجرد استعادة البويضات والأجنة من قناة البيض، سنستخدم ماصة نقل زجاجية تم سحبها من أنبوب شعري، مع توصيل بعض الأنابيب وسحبها عن طريق الفم إلى وسط الحفظ.

يُستخدم طبق زجاجي مقعر لحفظ الأجنة والبويضات. ويمكن وضعها في كل دائرة مقعرة بحيث تكون في موقع منفصل، مما يسهل العثور عليها. يتم وضع هذا الطبق داخل هذه الحاوية حتى يمكن إدخاله في حاضنة CO2 دون استخدام الزيت.

فوق وسط FHM أو KSOM، وبناءً على نوع الوسط المستخدم، يتم وضع الماء في القاعدة، ثم يُغلق الصنبور ليبقى السائل في مكانه. ويُستخدم الإيثانول بتركيز 70% لضمان عدم وصول الشعر. سنقوم بإجراء شق صغير في منطقة البطن وشق في التجويف البطني.

سنقوم بتوسيع الشق لتعريض منطقة البطن. وبمجرد القيام بذلك للكشف عن الرحم، سنقوم بإزاحة الأمعاء جانباً، ومن ثم يظهر الرحم بوضوح في الأسفل. يتخذ الرحم شكل حرف Y، وسنقوم باستئصال جزء من الرحم.

عندما يتم قطع قناة البيض، فإنها تبدو مثل السباغيتي. سأحاول أخذ جزء من قناة البيض، حيث سآخذ الـ UCT وجزءاً من المبيضين المحاطين بالدهون.

سيتم أخذ الجانب الآخر. في هذه المرحلة، سنقوم مجددًا برفع المبيض أو الرحم. سنرفع الرحم هنا، ونقص أسفل نقطة التثبيت. وفي هذه المرحلة، يتم العثور على القنوات الناقلة.

سأقوم بأخذ جزء من مبيض OV معنا. سيتم بعد ذلك وضعه في الوسط الغذائي. لا يزال الرحم في حالة انقباض.

يتكون الرحم من عضلات ملساء، لذا فإنه حتى بعد فصله عن الجسم، تظل العصبونات في حالة استثارة. يظهر الرحم هنا. وبينما تبدو قناة فالوب مثل المعكرونة ويقع المبيض فوقها، فإن قناة فالوب ليست متصلة فعلياً بالمبيض.

بينما لم نعرض سوى جزء من المبيض في هذه المرحلة، فإن يدي المهيمنة هي يدي اليمنى التي أمسك بها الإبرة ذات الطرف غير المدبب قياس 30 gauge. أستخدمها كملقط لعزل الـ in fibula. وبمجرد عزلها، سأقوم بإدخال الإبرة غير المدببة في الـ in fibula وحقن بعض السائل الذي سيتدفق خارج الرحم.

أمسك بيدي اليسرى ملقطاً حاداً، ويُستخدم هذا لعزل الشظية وتثبيت كل شيء في مكانه. أما الدُّعِلة فهي عبارة عن بنية معزولة هنا تشبه البوق.

طرف إبرتي موجود في عظمة الشظية، والتي كانت تخترق طبقة النسيج. حسنًا. ولضمان عزل جميع الأجنة والبويضات، أفضل الضغط على الرحم كما لو كنت أضغط على أنبوب معجون أسنان. وبمجرد التركيز على الوسائد الدهنية، ابحث عما يشبه قطرات الدهون التي تكون متماثلة تماماً.

توجد الآن بيضة واحدة مباشرة إلى يسار ذلك الجزء الطويل والسميك. هذه بيضة واحدة منفردة. لذا، سأقوم باستخدام الماصة الفموية لسحب البيضة، ووضعها في المزيد من الوسط الحافظ حتى نتمكن من عزل البيض نفسه.

لقد أوضحت لكم اليوم كيفية عزل الخلايا من الجهاز التناسلي الأنثوي. بالإضافة إلى ذلك، استعرضت معكم التراكيب المختلفة لقناة فالوب؛ وبالأخص القمع، وهو التركيب الوحيد الذي يمكن من خلاله حقن وسط FHM.

باستخدام إبرة قياس 30. من خلال هذه التقنية، قمت بعزل الخلايا وأي أجنة كانت موجودة في الجهاز التناسلي الأنثوي. ويمكنني استخدام هذه العينات في دراسات التعبير الجيني أو الأعمال المعدلة وراثياً.