الوسط المكيف للأعضاء: توليد وسط من خلايا الأعضاء المحصودة لدراسات السرطان النقيلي

تنتج بعض الأعضاء عوامل قابلة للذوبان وتصبح مواقع تفضيلية للورم الخبيث لسرطان الثدي. قد يساعد الوسط المكيف المحضر من خلايا الأعضاء المحصودة في تحديد ودراسة هذه العوامل.

ابدأ بوضع عضو محصود مثل الكبد في أنبوب يحتوي على PBS بارد وقلب الأنبوب لأعلى ولأسفل لإزالة الدم المتبقي من العضو. ضع العضو في طبق بتري. وباستخدام مشرط ، قم بتقطيع العضو إلى قطع صغيرة.

أعد تعليق هذه القطع في أنبوب يحتوي على وسط قاعدي مكمل بمضاد حيوي لدعم نمو الخلايا ومنع التلوث. الآن ، صب معلق الخلية في صفيحة استزراع واحتضانه عند 37 درجة مئوية مع إمداد مستمر بثاني أكسيد الكربون للمدة المطلوبة.

أثناء الحضانة ، تطلق هذه الخلايا المستقلبات وعوامل النمو وبروتينات المصفوفة خارج الخلية في الوسط. بعد ذلك ، انقل تعليق الخلية إلى أنبوب طرد مركزي وأضف وسيطا جديدا لتخفيفه. جهاز الطرد المركزي للأنبوب وتصفية المادة الطافية ، وهي الوسط المكيف ، في أنبوب جديد.

في البروتوكول التالي ، سنقوم بإعداد وسائط مكيفة من رئتي الفأر والدماغ لدراسة السلوك النقيلي لخلايا سرطان الثدي.

لتوليد وسط الرئة المكيف ، اقلب أنابيب أنسجة الرئة ثلاث مرات لإزالة أي دم متبقي من الأعضاء. ثم استبدل الغسيل ب PBS البارد الطازج وكرر العملية حتى يصبح المحلول الملحي خاليا من الدم.

بعد ذلك ، انقل الرئتين إلى طبق بتري زجاجي واحد بحجم 60 ملم مربع لكل فأر واستخدم شفرتين معقمتين لفرم الأنسجة مع التقطيع المتكرر ذهابا وإيابا.

عندما يبلغ حجم شظايا الأنسجة حوالي 1 ملم مكعب ، أعد تعليق القطع بالحجم المناسب من وسط DMEM / F-12 المكمل بالمضادات الحيوية واحتضان الأنسجة في بئر واحد من صفيحة 6 آبار لكل فأر عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.

بعد 24 ساعة ، قم بنقل محتويات كل بئر بالكامل إلى أنابيب مخروطية فردية سعة 50 مليلتر وقم بتخفيف الوسائط المكيفة بثلاثة أحجام مكافئة من وسط DMEM / F-12 الطازج لكل أنبوب.

الطرد المركزي الأنابيب لإزالة أي قطع كبيرة من بقايا الأنسجة. ثم قم بتجميع الوسائط المكيفة من خلال مصفاة حقنة 0.22 ميكرون في أنبوب مخروطي واحد سعة 50 مل.