التفكك الميكانيكي: طريقة للحصول على خلايا قابلة للحياة من الأنسجة

أولا ، قم بوزن جزء من الأنسجة وقياس طوله وعرضه وارتفاعه. ضع الأنسجة في طبق استزراع بوسط ثقافة وقم بتقطيعها إلى قطع صغيرة باستخدام مشرط. انقل كل شيء إلى أنبوب C للتجانس باستخدام ماصة باستور.

ضع الأنبوب في جهاز فصل ميكانيكي وقم بتشغيل الدورات حسب الحاجة. يستخدم الجهاز قوى ميكانيكية لاستخراج خلايا مفردة قابلة للحياة من عينة الأنسجة مع الحفاظ على سلامة الخلايا ، بما في ذلك البروتينات السطحية. صب التجانس من خلال مصفاة خلوية مثبتة على أنبوب طرد مركزي.

أعد تجانس الأنسجة المتبقية وقم بتصفية الجانس من خلال مصفاة الخلية في الأنبوب. الطرد المركزي المتجانس وإزالة المادة الطافية. الآن ، أعد تعليق حبيبات الخلية في وسط المزرعة وانقل كمية صغيرة من تعليق الخلية إلى أنبوب يحتوي على صبغة زرقاء من التريبان.

بعد التلوين ، انقل الخلايا إلى شريحة مقياس الدم. عد الخلايا الشفافة القابلة للحياة. تأخذ الخلايا الميتة البقعة ، لأن غشاء الخلية ليس سليما. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء تفكك غير إنزيمي للأنسجة البشرية الطازجة للتحليل الكمي والنوعي لخلايا CD45 +.

- ابدأ بوزن عينة الأنسجة ثم قياس طول الأنسجة وعرضها وارتفاعها. ثم انقل جزء الأنسجة إلى طبق بتري صغير يحتوي على 1 مليلتر من وسط الخلايا المكونة للدم المحدد كيميائيا والخالي من المصل واستخدم مشرطا معقما لتقطيع العينات إلى قطع صغيرة من 1 إلى 2 مليمتر مر