الثقافات الكروية ثلاثية الأبعاد المطبوعة مغناطيسيا بيولوجيا: طريقة للزراعة المشتركة للخلايا السرطانية والخلايا الليفية

- في الثقافات المشتركة ثلاثية الأبعاد المطبوعة بيولوجيا المغناطيسية ، تشكل أنواع الخلايا المتعددة هياكل ثلاثية الأبعاد أو كرويات تحت تأثير المجالات المغناطيسية. لإعداد الثقافة ، أولا ، قم بإعداد معلقات أحادية الخلية للخلايا السرطانية والخلايا الليفية في وسطها المناسب. بعد ذلك ، أضف الجسيمات النانوية المغناطيسية المتوافقة حيويا إلى كلا المعلقين. تحتوي هذه المواد النانوية على بقايا بولي L-lysine موجبة الشحنة تسهل الارتباط غير المحدد للجزيئات المغناطيسية بغشاء الخلية عبر التفاعلات الكهروستاتيكية.

احتضان لتحقيق أقصى قدر من مغنطة الخلايا السرطانية والخلايا الليفية. بعد ذلك ، امزج كلا معلقي الخلية بنسبة المطلوبة. انقل تعليق الخلية والجسيمات النانوية هذا إلى لوحة ثقافة طاردة للخلايا ، محسنة خصيصا لمنع ارتباط الخلية. قم بتركيب هذا الإعداد على محرك مغناطيسي واحتضانه. توجه القوى المغناطيسية تجميع أو الطباعة الحيوية للخلايا السرطانية الممغنطة والخلايا الليفية في هياكل كروية ثلاثية الأبعاد في قاع البئر.

بمجرد أن تتشكل الكرويات ، قم بإزالة المغناطيس والسماح للثقافات المشتركة ثلاثية الأبعاد بالنمو إلى الحجم المطلوب. في هذا البروتوكول ، سنوضح توليد كرويات ثلاثية الأبعاد للزراعة المشتركة من خلايا سرطان البنكرياس وخلايا الخلايا الليفية البنكرياسية التي يتم تنشيطها بواسطة PS1 باستخدام تقنية الطباعة الحيوية المغناطيسية.

باستخدام تقنية زراعة الأنسجة المعقمة القياسية ، قم بزراعة الخلايا السرطانية والخلايا الليفية ذات الأهمية في قوارير T75 في وسط النمو المناسب. عندما تصل الخلايا إلى التقاء 70٪ إلى 80٪ ، اغسل الثقافات مرة واحدة في 5 ملليلتر من PBS وافصل الخلايا عن أسطح القارورة باستخدام 2 مل من 0.05٪ Trypsin-EDTA لكل قارورة لمدة خمس دقائق عند 37 درجة مئوية.

بعد التأكد من الانفصال تحت المجهر ، قم بإلغاء تنشيط التربسين مع 8 مل من وسط النمو لكل قارورة. وقم بسحب الخلايا عدة مرات لتوليد معلقات أحادية الخلية للعد. جمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي وإعادة تعليق الكريات في 1 مرات 10 إلى الخلايا السادسة لكل تركيزات مليلتر في وسط النمو الطازج.

لمغنطة الخلايا ، أضف 10 ميكرولترات من NanoShuttle في وسط النمو لكل 100 ميكرولتر من الخلايا وقم بتحريك المحاليل برفق. اقلب الأنابيب برفق عدة مرات وانقل خلية خلية NanoShuttle إلى آبار فردية من صفيحة 24 بئرا. احتضان الخلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين مع هز لطيف لتسهيل ارتباط NanoShuttle بسطح الخلية. في نهاية حضانة الربط ، امزج برفق كل معلق خلية ممغنطة مع سحب العينات واضبط التركيز على 1.5 مرة 10 إلى الخلايا السرطانية الممغنطة الرابعة أو الخلايا الليفية لكل 150 ميكرولتر من الوسط.

امزج الخلايا الليفية والخلايا السرطانية بنسبة 2 إلى 1 ليصبح المجموع 150 ميكرولترا من الخلايا المصنفة لكل بئر. ضع الصفيحة الطاردة للخلايا والمكونة من 96 بئرا فوق محرك كروي مغناطيسي مكون من 96 بئرا مع مغناطيس أرق وبذرة 150 ميكرولتر من خليط الخلايا في كل بئر. عندما يتم طلاء جميع الخلايا ، احتضن اللوحة طوال الليل عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 مع استمرار توصيل محرك الكروي المغناطيسي. في صباح اليوم التالي ، قم بإزالة المحرك المغناطيسي وأعد الخلايا إلى الحاضنة لمدة تصل إلى سبعة أيام أخرى.