استخراج الحمض النووي الريبي المتداول: طريقة لعزل الحمض النووي الريبي المرسال من عينات البلازما عن طريق الاستخراج العضوي وتخصيب الحمض النووي الريبي الصغير

0 views • 4:33 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- MicroRNAs أو miRNAs هي RNAs صغيرة غير مشفرة تنظم التعبير الجيني عن طريق تحطيم mRNA أو منع ترجمتها إلى بروتينات وظيفية. الميرنا المنتشرة هي مؤشرات حيوية محتملة للسرطان ويمكن استخراجها من سوائل الجسم مثل البلازما. للبدء ، امزج البلازما بمحلول تغيير الطبيعة الذي يجانس العينة في نفس الوقت ويمنع الريبونوكلياز المتحلل للحمض النووي الريبي.

عالج بحمض الفينول والكلوروفورم والطرد المركزي لفصل العينة إلى مرحلتين ، مرحلة عضوية سفلية تحتوي على الحمض النووي والبروتينات ، ومرحلة مائية علوية تحتوي على الحمض النووي الريبي. استعادة المرحلة المائية. أضف الإيثانول المطلق لترسيب الحمض النووي الريبي من المحلول.

ارفع تركيز العينة من الإيثانول إلى 25٪ لتعيين حالة أولية تؤدي إلى فصل كبير عن الحمض النووي الريبي. انقل الخليط إلى خرطوشة فلتر مجمعة مسبقا وجهاز طرد مركزي. يتم تثبيت الحمض النووي الريبي الكبير بشكل انتقائي على المرشح ، بينما تتجمع miRNAs الأصغر في المرشح.

بعد ذلك ، قم بزيادة تركيز الإيثانول إلى 55٪ لصالح عزل miRNA. انقل المرشح إلى خرطوشة مرشح جديدة وجهاز طرد مركزي لاحتجاز miRNAs. ضع الخرطوشة على أنبوب تجميع وأضف عازلة شطف مناسبة. جهاز طرد مركزي لتصفية miRNAs في الأنبوب. في البروتوكول التالي ، سنعرض عزل miRNA المنتشر عن بلازما مرضى سرطان القولون والمستقيم.

للبدء ، انقل 400 ميكرولتر من عينة البلازما إلى أنبوب 2 مليلتر خال من RNase. ثم أضف 400 ميكرولتر من محلول تغيير الطبيعة إلى الأنبوب. أضف 4 ميكرولترات من 1 نانو مول.

بعد خلط المحلول ، أضف 800 ميكرولتر من حمض الفينول كلوروفورم. دوامة الحل لمدة 60 ثانية وجهاز الطرد المركزي بأقصى سرعة لمدة 15 دقيقة. بعد ذلك ، قم بنقل المحللة الموجودة في المرحلة المائية العليا إلى أنبوب نظيف ، مع الحرص على عدم إزعاج الطور البيني.

قم بقياس حجم الطور المائي المستعاد وأضف 1/3 حجم من الإيثانول إلى المحلل. ثم ضع خرطوشة مرشح في أنبوب تجميع جديد. انقل ما يصل إلى 700 ميكرولتر من خليط محللة الإيثانول إلى خرطوشة الفلتر. جهاز الطرد المركزي خرطوشة الفلتر لمدة 30 ثانية عند 10,000 × جم.

بعد ذلك ، قم بقياس الحجم الكلي للتدفق. ثم أضف 2/3 من حجم الإيثانول إلى المرشح واخلط جيدا. ضع خرطوشة مرشح ثانية في أنبوب تجميع جديد. بعد ذلك ، انقل ما يصل إلى 700 ميكرولتر من العينة إلى الخرطوشة وجهاز الطرد المركزي عند 10,000 × جم لمدة 30 ثانية قبل التخلص من التدفق.

أضف 700 ميكرولتر من محلول غسيل microRNA إلى خرطوشة الفلتر وقم بطردها بأنبوب تجميع عند 10,000 × جم لمدة 15 ثانية. تخلص من التدفق وأعد خرطوشة الفلتر إلى نفس الأنبوب.

بعد ذلك ، انقل خرطوشة الفلتر إلى أنبوب تجميع جديد. ثم أضف 100 ميكرولتر من محلول الشطف المسخن مسبقا إلى الخرطوشة. قم بالطرد المركزي لخرطوشة المرشح عند 10,000 × جم لمدة 30 ثانية لاستعادة microRNAs.

09:48

طريقة سريعة والمبسطة لارتفاع العزلة من خلال وضع-من ميرنا من نظافة البروتين الدهني عالي الكثافة

Related Videos

0 Views

08:14

ميكرورنا استناداً إلى خزعة سائلة: تجربة ميرنا البلازما التوقيع المصنف (MSC) "فحص سرطان الرئة"

Related Videos

0 Views

04:41

بكر الرقمية للتحديد الكمي لتعميم MicroRNAs في احتشاء عضلة القلب الحاد وأمراض القلب والأوعية الدموية

Related Videos

0 Views

07:27

ارتفاع جانبي MicroRNA المناولة : ملتيبليكس محسن qRT - PCR على مقياس نانولتر في المحفل Fluidigm ArrayTM الحيوي

Related Videos

0 Views

03:59

استخراج miRNA: طريقة لاستخراج miRNA من عينة البلازما

Related Videos

0 Views

10:45

تنقية الرنا الميكروي والتنميط من Exosomes المشتقة من الدم والثقافة وسائل الإعلام

Related Videos

0 Views

06:44

عزل الرنا غير المكودة الصغيرة من مصل الإنسان

Related Videos

0 Views

06:59

العزلة ومن التنميط Exosomes من الصفراء الإنسان التي تحتوي على الرنا الميكروي

Related Videos

0 Views

07:37

تعميم الرنا الميكروي الكمي باستخدام الحمض النووي ملزم صبغ الكيمياء والقطرة PCR الرقمية

Related Videos

0 Views

10:39

عزل البروتينات الدهنية عالية الكثافة لغير الترميز الصغيرة RNA الكمي

Related Videos

0 Views

Last updated: 25 July 2026