استخراج الحمض النووي الريبي المتداول: طريقة لعزل الحمض النووي الريبي المرسال من عينات البلازما عن طريق الاستخراج العضوي وتخصيب الحمض النووي الريبي الصغير

- MicroRNAs أو miRNAs هي RNAs صغيرة غير مشفرة تنظم التعبير الجيني عن طريق تحطيم mRNA أو منع ترجمتها إلى بروتينات وظيفية. الميرنا المنتشرة هي مؤشرات حيوية محتملة للسرطان ويمكن استخراجها من سوائل الجسم مثل البلازما. للبدء ، امزج البلازما بمحلول تغيير الطبيعة الذي يجانس العينة في نفس الوقت ويمنع الريبونوكلياز المتحلل للحمض النووي الريبي.

عالج بحمض الفينول والكلوروفورم والطرد المركزي لفصل العينة إلى مرحلتين ، مرحلة عضوية سفلية تحتوي على الحمض النووي والبروتينات ، ومرحلة مائية علوية تحتوي على الحمض النووي الريبي. استعادة المرحلة المائية. أضف الإيثانول المطلق لترسيب الحمض النووي الريبي من المحلول.

ارفع تركيز العينة من الإيثانول إلى 25٪ لتعيين حالة أولية تؤدي إلى فصل كبير عن الحمض النووي الريبي. انقل الخليط إلى خرطوشة فلتر مجمعة مسبقا وجهاز طرد مركزي. يتم تثبيت الحمض النووي الريبي الكبير بشكل انتقائي على المرشح ، بينما تتجمع miRNAs الأصغر في المرشح.

بعد ذلك ، قم بزيادة تركيز الإيثانول إلى 55٪ لصالح عزل miRNA. انقل المرشح إلى خرطوشة مرشح جديدة وجهاز طرد مركزي لاحتجاز miRNAs. ضع الخرطوشة على أنبوب تجميع وأضف عازلة شطف مناسبة. جهاز طرد مركزي لتصفية miRNAs في الأنبوب. في البروتوكول التالي ، سنعرض عزل miRNA المنتشر عن بلازما مرضى سرطان القولون والمستقيم.

للبدء ، انقل 400 ميكرولتر من عينة البلا