طريقة السقوط المعلق: تقنية لتوليد كرويات الورم الميلانيني ثلاثية الأبعاد

- الكرويات هي نماذج ثلاثية الأبعاد لزراعة الخلايا في المختبر تحاكي بنية الورم في الجسم الحي وتساعد في دراسة التفاعلات داخل الورم. لإعداد الثقافة ، أولا ، قم بإعداد معلق أحادي الخلية لخلايا الورم الميلانيني في وسطها المناسب. بعد ذلك ، اكتشف كميات صغيرة من تعليق الخلية هذا ، متباعدة بما فيه الكفاية على السطح الداخلي لغطاء طبق ثقافة معقم غير لاصق. اقلب الغطاء بحذر وضعه على قاعدة طبق الثقافة الذي يحتوي على PBS لإنشاء غرفة ترطيب. احتضان اللوحة في ظل الظروف المناسبة.

تمنع الرطوبة من PBS تبخر الوسائط من القطرات المعلقة. قم بتحديث القطرات عن طريق استبدال بضعة ميكرولترات من الوسائط. بسبب التوتر السطحي ، تحافظ القطرات على شكلها الكروي وتظل معلقة من السطح الداخلي للوحة. تسهل قوى الجاذبية على الخلايا البقاء معلقة دون أن تنتشر ولكنها تتجمع لتشكيل كرويات ثلاثية الأبعاد داخل القطرات. أخيرا ، اشطف القطرات باستخدام PBS لحصاد الكرويات. اجمعها في طبق ثقافة غير لاصق.

في البروتوكول التالي ، سنوضح توليد كرويات ثلاثية الأبعاد لخلايا الورم الميلانيني 451-LU عبر طريقة الإسقاط المعلق.

- للبدء ، قم بزراعة خلايا الورم الميلانيني 451-LU باستخدام وسيط RPMI الذي يحتوي على 10٪ FCS ، وفقا لبروتوكولات زراعة الخلايا العامة. لتوليد كرويات الورم الميلانيني ، اغسل خلايا الورم الميلانيني المزروعة في PBS. ثم أضف 5 ملليلت