عزل الخلايا الجذعية للورم الميلانيني: طريقة للحصول على خلايا الورم الميلانيني الإيجابية والسالبة CD133 باستخدام فرز الخلايا المنشطة مغناطيسيا
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 5:40 دقيقة • April 30th, 2023
- يؤوي الورم الميلانيني مجموعة صغيرة من الخلايا الجذعية السرطانية التي تمتلك قدرات التجديد الذاتي وبدء الورم. CD133 أو Prominin-1 ، وهو بروتين سكري عبر الغشاء الخماسي ، هو أحد العلامات الرئيسية التي تعبر عنها الخلايا الجذعية لسرطان الورم الميلانيني النقيلي. لعزل الخلايا الإيجابية CD133 ، ابدأ بتعليق خلايا الورم الميلانيني الأولي في مخزن مؤقت مناسب.
احتضان بكاشف مانع يحتوي على بروتينات تمنع مواقع الارتباط غير المحددة على سطح الخلية. عالج الخلايا بالأجسام المضادة الأولية CD133 البيوتينيل. ترتبط هذه الأجسام المضادة بمستضدات CD133 المعبر عنها في الخلايا الإيجابية CD133. الآن ، أضف الميكروبيدات المغناطيسية المضادة للبيوتين إلى التعليق. احتضان الميكروبيدات للارتباط بالخلايا المسماة بالبيوتين.
أخيرا ، قم بتمرير التعليق المحتضن عبر عمود يوضع في مجال مغناطيسي. مع التأثير المغناطيسي ، تلتصق جميع الخلايا الإيجابية CD133 المسماة بالميكروبيدات بالعمود ، بينما تمر الخلايا غير المسماة. اجمع هذه الخلايا غير المسماة CD133 السالبة. قم بإزالة العمود من المجال المغناطيسي. اغسل المحتويات باستخدام مخزن مؤقت مناسب لتصفية الخلايا الموجبة CD133 وجمعها.
في البروتوكول التالي ، سنعرض عزل الخلايا الجذعية السرطانية الإيجابية والسالبة CD133 من ثقافة الورم الميلانيني الأولي التي تم الحصول عليها من أنسجة الورم. اغ
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية