تصور تعبير البروتين القائم على CUBIC : إجراء لتصور تعبير البروتين في خزعات جلد الفأر ذات السماكة الكاملة
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 5:50 دقيقة • April 30th, 2023
- الجلد هو عضو معقد يتكون من مجموعات خلايا متنوعة مرتبة في طبقات متعددة. تساعد CUBIC ، وهي تقنية تصوير ثلاثية الأبعاد قائمة على إزالة الأنسجة ، على تصور أنماط التعبير عن البروتين داخل خلايا الجلد هذه باستخدام خزعات الجلد بالكامل. ابدأ بأخذ فأر قتل رحيم وإزالة الشعر من منطقة العنق الظهرية. استئصال قطعة من الجلد وتقطيعها إلى قطع صغيرة.
اغمر القطع في محلول مقاصة CUBIC1 واحتضنها. خلايا الجلد غير شفافة ، بسبب وجود الكروموفورات والدهون التي تسبب تشتت الضوء. تزيل المواد الكيميائية الموجودة في محلول CUBIC هذه الجزيئات ، وبالتالي تقلل من تشتت الضوء وتجعل الأنسجة شفافة.
بعد ذلك ، عالج الأنسجة بالأجسام المضادة الأولية المرغوبة التي ترتبط على وجه التحديد بالبروتينات المستهدفة داخل الخلايا المعبر عنها في خلايا الجلد. علاوة على ذلك ، عالج بالأجسام المضادة الثانوية ذات العلامات الفلورية التي ترتبط بمجمعات الأجسام المضادة الأولية للبروتين. قم بتلطيخ الأنسجة بصبغة ملزمة للحمض النووي تلطخ النواة.
أخيرا ، اغمر العينة في محلول CUBIC2. يقلل المحلول من تشتت الضوء داخل الأنسجة ، مما يجعله أكثر شفافية للتصوير. راقب تحت المجهر متحد البؤر لتصور المناطق ذات العلامات الفلورية ذات الأهمية في العينة ثلاثية الأبعاد. يسمح البروتوكول التالي بتصور تعبير علامات تكاثر الخلايا الكيراتينية في خزعات الجلد بالكامل باستخد
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية