التحول القائم على ناقلات miniCoopR: تقنية لفحص الجينات المسببة للورم الميلانيني في نموذج ورم الزرد
موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 4:07 دقيقة • April 30th, 2023
- في الزرد ، ينشأ الورم الميلانيني من التحول الخبيث للخلايا الصباغية - الخلايا المنتجة للميلانين. لدراسة ظهور الورم الميلانيني ، استخدم نموذج أسماك الزرد المعدلة وراثيا المعدل وراثيا المعدل وراثيا المعرضة للورم الميلانيني والخلايا الصباغية. يفتقر هذا النموذج إلى الخلايا الصباغية بسبب طفرة فقدان الوظيفة في مروج mitfa الخاص بالخلايا الصباغية.
ابدأ بأخذ جنين وحيد الخلية من هذا النموذج المعدل وراثيا على لوحة أجار. شارك في حقن مزيج يحتوي على ناقل miniCoopR القائم على الينقولات وإنزيم الترانسبوزاز mRNAs في الجنين. يحتوي المتجه على شريط جيني ، يتألف من مصغر من mitfa يحمل المحفز مقترنا بجين مرشح محصور بين عنصرين ينقولات.
تقوم mRNAs المحقونة بالحقن المشترك بتشفير بروتينات الينقولاز. تعمل هذه البروتينات على عناصر الينقولات وتحفز استئصال الكاسيت من ناقل miniCoopR ، متبوعا بدمجها في الحمض النووي الجيني للجنين. بعد ذلك ، يقود مروج الكاسيت التعبير عن كل من جين mitfa والجين المرشح ذي الأهمية.
يدعم جين mitfa إنقاذ الخلايا الصباغية وتطورها ، بينما يؤدي الجين المرشح ، إذا كان مسرطن ، إلى ظهور الورم الميلانيني. فحص سمكة الزرد المتطورة. تطور الأسماك المعدلة وراثيا ذات الخلايا الصباغية التي تم إنقاذها تصبغ الميلانين ، بينما تحمل تلك التي تحمل الأورام الميلانينية آفات مصطبغة بارزة.
في البروتوكول التالي
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية