Name: وعضوي النمط الثقافة شريحة الحصين النموذجي لفحص الإصابات متعلق بالخلايا العصبية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-28T17:15:00.000+00:00
Duration: 6 min 33 s
Description: تعلم إنشاء مزارع شريحة الحصين النمطية العضوية لدراسة الإصابات العصبية باستخدام تقنية عزل الدماغ وصبغ اليوديد البروبيديوم. يتيح هذا النموذج قياس نسبة موت الخلايا العصبية في مناطق CA1 وCA3 والتلفيف المسنن بدقة عالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

بتمويل من NINDS ، جمعية القلب الأميركية ، اتحاد أمريكا لبحوث الشيخوخة ، ومارس من الدايمات

1. إعداد قبل البدء ، تجميع الصكوك اللازمة الجراحية ، والتشريح والإعلام والثقافة ، والفئران من العمر 7 أيام أو الجراء الماوس. البروتوكول هو نفسه لفأر والاستعدادات الفئران. (ط) المواد والمعدات <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقص التشغيل (طول مستقيم 6 "، القط # RS6818 ، Roboz ، غايثرسبيرغ ، MD) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الجزئي تشريح مقص ، (4 طول "، القط # RS5910. Roboz ، غايثرسبيرغ ، MD) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكربون الصلب دومون الملقط (القط # RS - 5045.Roboz ، غايثرسبيرغ ، MD) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعديل الزجاج "نقل" ماصات (أسفل ماصة باستير وتلطيف إزالة الحافة) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع من البلاستيك لفيلم Aclar 2 "في x 2" في المربعات (هانيويل ، # 812071 ، بوتسفيل ، والسلطة الفلسطينية) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإسفنج 4 في تغطية بنسبة 3 في (كندال ، القط # 3157 ، مانسفيلد ، MA) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 30 غشاء Millicell إدراج ملم (0.4 ميكرومتر ؛ ميليبور ، بيدفورد ، ماجستير) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Mcllwain المروحية الأنسجة مع شفرة ذو حدين (McILwain المروحية الأنسجة ، Vibratome الشركة ، وسانت لويس ، MO) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المجهر المقلوب مع كاميرا CCD وصورة برامج التحليل </li></ul> (ب) متوسطة تشريح (DM ، 1 لتر عند pH 7.3) <table border="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> هانك في سولت المتوازن </td><td> 1 فيال (95.2 g/1L) (سيغما : H2387) </td></tr><tr><td> NHCO 3 (4.2 ملم) </td><td> 350 ملغ </td></tr><tr><td> HEPES (10 ملم) </td><td> 2.83 ز </td></tr><tr><td> الجلوكوز (33.3 ملم) </td><td> 6.0 غرام </td></tr><tr><td> البنسلين / الستربتوميسين (100X) </td><td> 10 مل </td></tr><tr><td> BSA (0.3 ٪) </td><td> 300 ملغ </td></tr><tr><td> MgSO 4 - 7H 2 O </td><td> 1.44 ز </td></tr></tbody></table> (ج) الثقافة المتوسطة (400 مليلتر) <table border="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> MEM (Invitrogen 11575-032) </td><td> 200 مل </td></tr><tr><td> *** الملح في ميزان هانك (Invitrogen 24020-117) </td><td> 100 مل </td></tr><tr><td> حصان المصل (Invitrogen 26050-070) </td><td> 100 مل </td></tr><tr><td> HEPES العازلة (1 M ؛ Invitrogen 15630-080) </td><td> 5 مل </td></tr><tr><td> البنسلين / الستبرتوميسين (100X) </td><td> 4 مل </td></tr><tr><td colspan="2"> *** أضف إلى 12.8 الجلوكوز ز ملح 500 مل ميزان هانك قبل اتخاذ مستنبت </td></tr></tbody></table> (رابعا) الحيوانات العمر الفئران لمدة 7 أيام أو بعد الولادة الجراء الماوس ، وعموما لتر واحد لكل تجربة. 2. يوم الثقافة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجب أن تكون غارقة جميع الأدوات والأفلام تشريح Aclar في ETOH 70 ٪ لمدة 30 دقيقة قبل بداية. ويجب تطهيرها على سطح القلنسوة تشريح ، شفرة ، والمروحية الأنسجة مع الايثانول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد عدة (3-4) 6 زراعة الأنسجة بشكل جيد لوحات ؛ إضافة 1 مل مستنبت لكل بئر ، وادخال ونفاذية الغشاء ميليبور في كل بئر. مكان جيد 6 لوحات في الحاضنة حتى 37 درجة على استعداد لنقل الشرائح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد عدة (4-6) لوحات 60 ملم مع بلدية دبي ومكان على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع رأس بسرعة مع المقص وتراجع 70 ٪ في ETOH ، وفضح بسرعة الدماغ مع شق saggital من الجمجمة. إزالة بعناية الدماغ والمكان على الفور في بلدية دبي الباردة. فصلها إلى نصفين ووضع كل نصف الكرة الجانب الإنسي لأسفل على الإسفنج تغطية لمدة 2-3 ثواني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع بلطف ومكان في نصف الكرة على الساحة السينمائية Aclar ومكان المروحية على الأنسجة ؛ خفض الدماغ coronally في 350 ميكرون المقاطع. عند الانتهاء ، واتخاذ بلطف Alcar مربع مع نصف الكرة مقطوع ويغرق في بلدية دبي الباردة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مجهر تشريح ، فصل المقاطع الحصين. عن الفئران ، ينبغي أن يكون هناك 5 أقسام تمتد إلى قرن آمون منقاري الذيلية ، والماوس ينبغي أن يكون هناك أقسام 3-4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأخذ بها لوحات 6 بشكل جيد مع إدراج غشاء من 37 درجة نسيج الثقافة الحاضنة. نقل شرائح الحصين فردي على نفاذية الأغشية باستخدام ماصة نقل الزجاج. إذا كان الكثير من DM يتم تحريرها على الغشاء ، وإزالة الزائدة DM مع ماصة باستور. مكان five شرائح الحصين على كل الأغشية. تسمح على الاقل 3 آبار في الشرط ، أو شرائح 15. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحات احتضان الثقافة في 37 درجة في حاضنة ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5 ٪ لترطيب 12-14 قبل أيام من بداية التجربة السمية. يمكن تغيير مستنبت مرتين في الأسبوع. </li></ol> 3. حمل وتحديد مقدار الضرر متعلق بالخلايا العصبية في قرن آمون الثقافة شريحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 12-14 يوما في الثقافة ، وإضافة 5 ميكروغرام / مل يوديد propidium (PI) إلى وسائل الإعلام الثقافة. وسوف تسمح هذه الخطوة التصور النوعي والكمي لموت الخلايا القاعدية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في اليوم التالي ، كميا PIمضان في المنطقة دون الإقليمية CA1 (و / أو CA3 المسنن أو إذا رغبت في ذلك) من كل شريحة الحصين والحصول على قياسات يعني PI مضان يمثل موت الخلايا القاعدية (المشار إليها مع مرور الوقت = 0 ساعة ، أو تي 0). لاقتناء الصور والكمي ، ونحن نستخدم OpenLab البرمجيات (الارتجال ، المملكة المتحدة) ، ولكن من الحصول على الصور ويمكن استخدام برامج التحليل لتحديد كثافة مضان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مباشرة بعد الحصول على الصور من بي تي مضان 0 ، تحفز الخلايا العصبية التي اصابة طريقتك في الاختيار (ونحن قد استخدمت 10 ميكرومتر NMDA ، الأوكسجين الجلوكوز الحرمان ، أو LPS لمدة ساعة واحدة للحث على السمية العصبية 2،5). بعد التحفيز السامة ، مع استبدال المتوسطة المتوسطة الطازجة تحتوي على 5 ميكروغرام / مل PI والحفاظ على شرائح بين عشية وضحاها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في يوم 3 ، كميا يعني PI مضان للحالة تجريبية في 24H ، أو تي 24. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ذلك الحصول على الصور ، وتغير الحال والمتوسطة وإضافة 10 ميكرومتر NMDA وميكروغرام / 5 مل بي وشرائح احتضان الموت بين عشية وضحاها من أجل تحقيق أقصى قدر من الخلايا العصبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في يوم 4 ، كميا يعني PI مضان وفاة الخلايا العصبية القصوى ، كما تم تعريفها ماكس تي. حساب موت الخلايا في المئة على النحو التالي : (T 24 -- T 0) / (T - T ماكس 0). </li></ol> 4. ممثل النتائج <img src="/files/ftp_upload/2106/2106fig1.jpg" alt="الشكل 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 1"> الشكل 1 (أ) الإطار الزمني لتوليد الإصابة التجريبية الحصين واللاحقة ، والحصول على الصور. (ب) من شرائح الصور الممثل الحصين basally (T 0) ، 24 ساعة بعد التعرض 1 ساعة إلى 10 ميكرومتر NMDA (T 24) ، وبعد 24H ميكرومتر أو 10 للحصول على مزيد من NMDA الاصابة العصبية القصوى (T أقصى).

<ol><li>Stoppin, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> J Neurosci Methods. 37 (2), 173-173 (1991).</li>
<li>McCullough, L., Wu, L., Haughey, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+Function+of+the+PGE2+EP2+Receptor+in+Cerebral+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective Function of the PGE2 EP2 Receptor in Cerebral Ischemia.</a> J Neurosci. 24 (1), 257-257 (2004).</li>
<li>Czapiga, M., Colton, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+microglia+in+organotypic+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Function of microglia in organotypic slice cultures.</a> J Neurosci Res. 56, 644-644 (1999).</li>
<li>Newell, D. W., Barth, A., Papermaster, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+and+non-glutamate+receptor+mediated+toxicity+caused+by+oxygen+and+glucose+deprivation+in+organotypic+hippocampal+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glutamate and non-glutamate receptor mediated toxicity caused by oxygen and glucose deprivation in organotypic hippocampal cultures.</a> J Neurosci. 15, 7702-7702 (1995).</li>
<li>Wu, L., Wang, Q., Liang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Divergent+Effects+of+prostaglandin+recetor+signaling+on+neuronal+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letter%22%5BJournal%5D)">Divergent Effects of prostaglandin recetor signaling on neuronal survival.</a> Neuroscience letter. 421, 253-253 (2007).</li>
<li>Hailer, N. P., Jarhult, J. D., Nitsch, R., R, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resting+microglial+cells+in+vitro%3A+Analysis+of+morphology+and+adhesion+molecule+expression+in+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Resting microglial cells in vitro: Analysis of morphology and adhesion molecule expression in organotypic hippocampal slice cultures.</a> Glia. 18, 319-319 (1996).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

هناك نقطتان هامتان لمتابعة لضمان تحقيق نتائج استنساخه ومتناسقة عند تكرار التجارب. أولا ، من المهم السماح للشرائح العمرية 12-14 الحصين لأيام قبل التجريب. مع شريحة العزلة ، وهناك استجابة كبيرة دبقية صغيرة ، وتبقى تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة لبعض الوقت ، مع العودة إلى دولة متشعبة الراحة التي تحدث من قبل 10 أيام في المختبر 3،6. ثانيا ، يعني كثافة PI الاستشعاع النسبي لعدد من الخلايا جرح 4. يقاس مضان متسلسلة في غضون ثلاث نقاط : (ط) في T 0 ، قب...

وعضوي النمط الثقافة شريحة الحصين النموذجي لفحص الإصابات متعلق بالخلايا العصبية

The Organotypic Hippocampal Slice Culture Model for Examining Neuronal Injury

عضوي النمط ثقافة شريحة الحصين هو أسلوب في المختبر لدراسة آليات الإصابة العصبية التي يتم الاحتفاظ نسبيا بنية الأساسية وتكوين الحصين 1. منظومة الثقافة عضوي النمط يسمح لفحص الآثار العصبية ، ونجمي دبقية صغيرة ، ولكن كما استعدادا فيفو السابقين ، لا تعالج آثار تدفق الدم ، أو تجنيد خلايا التهابية الطرفية. تحقيقا لهذه الغاية ، وكثيرا ما يستخدم هذا الأسلوب لدراسة الثقافة وإصابة excitotoxic نقص الأوكسجين إلى الخلايا العصبية في قرن آمون الهرمي ، ولكن قد استخدمت أيضا لدراسة الاستجابة الالتهابية. نحن هنا وصف الطرق لتوليد الثقافات شريحة من قرن آمون في الدماغ القوارض بعد الولادة ، وبالإدارة السامة المحفزات للحث على اصابة الخلايا العصبية ، ومعايرة وقياس موت الخلايا العصبية قرن آمون.

وorganoptypic ثقافة شريحة الحصين هو نموذج<em&gt; في المختبر</emتستخدم&gt; نموذج لدراسة اصابة الخلايا العصبية في مجموعة متنوعة من النماذج. في هذه المقالة ، ونحن تصف الأساليب لتوليد شريحة الثقافات وقياس اصابة الخلايا العصبية.

تُعد زراعة شرائح الحصين ذات التنظيم العضوي طريقة مخبرية لفحص آليات الإصابة العصبونية، والتي يتم فيها الحفاظ على البنية الأساسية وتكوين...

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء مستنبتات لشرائح حصينية نمطية عضوية (organotypic hippocampal slice cultures) يمكن استخدامها لنمذجة الإصابة العصبونية استجابةً لمجموعة متنوعة من المحفزات، بما في ذلك NMDA، أو السُميّة الاستثارية للأكسجين، أو الحرمان من الجلوكوز، أو المحفزات الالتهابية مثل lipopolysaccharide أو ببتيد amyloid beta. ويتم تحقيق ذلك من خلال عزل الدماغ في مرحلة ما بعد الولادة أولاً وتقطيع كل نصف كرة لإنشاء مقاطع إكليلية. وتتمثل الخطوة الثانية من الإجراء في عزل مناطق الحصين واستزراعها على غرسات غشائية في أطباق ذات ستة آبار. وبعد استزراع المقاطع، يتم صبغها بـ propidium iodide وحساب مستوى الموت العصبوني التلقائي.أخيرًا، تُعالج الشرائح بعامل سمي عصبي ويُعاد صبغها لقياس استجابة السمية تجاه العلاج. وفي نهاية المطاف، يمكن الحصول على نتائج توضح النسبة المئوية لموت الخلايا العصبية في منطقتي CA1 وCA3 والمنطقة المسننة في الحصين عبر الظروف التجريبية المختلفة، وذلك من خلال قياس فلورة يوديد البروبيديوم باستخدام مجهر الفلورة المناعية. وتتمثل الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بالطرق الحالية، مثل زراعة الخلايا العصبية الأولية، في أن آلية الإصابة العصبية يتم فحصها في تحضير تظل فيه البنية الأساسية للحصين سليمة نسبيًا.ويتضمن النوع الثالث التمرين. يتم الحفاظ على الخلايا الدبقية الصغيرة (Microglia) و ROY قبل البدء في عملية التشريح. أدخل غشاءً نفاذاً من نوع millipore في كل منها.أضف 1 mL من وسط الزرع إلى كل بئر من عدة أطباق زراعة أنسجة ذات ستة آبار. قم بتدفئة الأطباق في حاضنة عند 37 °C.اغمر رأس جرو جرذ عمره يوم واحد (بعد فصل الرأس) لفترة وجيزة في إيثانول 70%. ولتعقيمه، استخدم مقص تشريح دقيق لإجراء شق سهمي عبر الجمجمة لكشف الدماغ. استخدم الملقط لإزالة الدماغ بسرعة ونقله إلى طبق قطر 60 مليمتر يحتوي على وسط تشريح موضوع على الثلج.استخدم الملاقط لفصل الدماغ إلى نصفين كرويين. ضع كل نصف كروي بحيث يكون الجانب الإنسي للأسفل على إسفنجة تغطية جافة لمدة ثانيتين إلى ثلاث ثوانٍ لامتصاص أي رطوبة زائدة. انقل الدماغ إلى مربع من غشاء شفاف وضعه على منصة قطاعة الأنسجة، ثم قم بإجراء قطع إكليلية في مقاطع بسمك 350 micron بدءاً من rosland.والاستمرار بعناية. ارفع مربع A clar برفق واغمر الشرائح في طبق جديد من وسط التشريح المبرد بالثلج. وباستخدام مجهر تشريحي، حدد موقع الحصين، وهو هيكل على شكل حرف C يقع أسفل القشرة المخية، وبجوار المخطط.استخدم الملقط لفصل الحصين من كل مقطع إكليلي. استخدم ماصة باستور معدلة كما هو موضح في النص لنقل خمس شرائح من الحصين إلى كل غشاء. أدخلها في أطباق الستة آبار الدافئة والمجهزة.قم بإزالة أي وسط زائد من على سطح الغشاء. يتم تحضين الأطباق عند 37 °C و5% carbon dioxide لمدة تتراوح من 12 إلى 14 يوماً. مع تغيير الوسط كما هو مفصل في النص المصاحب بعد 12 إلى 14 يوماً من الزراعة، يتم استبدال الوسط وإضافة 5 µg/mL من يوديد البروبيديوم، المختصر بـ pi، للسماح بمعاينة وقياس موت الخلايا الأساسي.قم بتحضين الشرائح طوال الليل عند 37 درجة مئوية و 5% carbon dioxide تحت مجهر فلورسنت مقلوب متصل بكاميرا CCD. التقط صوراً للشريحة بتكبير 40x هذه المرة. تمثل اللقطات فلورسنت PI المقابل لمستويات موت الخلايا الأساسية عند الزمن equals صفر ساعة أو T zero مباشرة بعد التصوير. يتم تحفيز الإصابة العصبية في الشرائح باستخدام الطريقة المفضلة للتجربة الحالية.يتم هنا تحضين الشرائح في وسط غذائي طازج يحتوي على 10 micromolar من NMDA لمدة ساعة واحدة عند 37 °C و5% carbon dioxide. بعد المعالجة السمية العصبية، يتم استبدال الوسط بوسط زراعة طازج يحتوي على 5 µg/mL من pi.تُحضن الشرائح طوال الليل عند 37 درجة مئوية و5% ثاني أكسيد الكربون، وصورة لفلورة PI بعد المعالجة السامة للأعصاب. تمثل قياسات متوسط الفلورة لهذه النقطة الزمنية مستويات موت الخلايا. بعد 24 ساعة من الإصابة التجريبية، أو T 24 ساعة، استبدل الوسط فوراً بوسط استزراع جديد يحتوي على 10 micromolar NMDA و 5 micrograms per milliliter.يتم تحضين الشرائح مع PI طوال الليل عند 37 درجة مئوية و5% ثاني أكسيد الكربون لتحقيق أقصى حد من موت الخلايا العصبية. يتم الحصول على المجموعة النهائية من صور فلورية PI، وقياسات متوسط الفلورية لهذه النقطة الزمنية. تمثل هذه القيم المستويات القصوى لموت الخلايا أو Tmax.قم بقياس فلورة PI في المنطقة المستهدفة باستخدام برنامج تحليل الصور كما هو موضح في النص المصاحب. هذه صورة نموذجية لصبغ PI لموت العصبونات الأساسي في منطقة ca one من الحصين. وهذه صورة نموذجية لموت العصبونات المصبوغة بـ PI.بعد مرور 24 ساعة من المعالجة لمدة ساعة واحدة بـ 10 micromolar من NMDA، نلاحظ صبغاً أكثر كثافة مما يشير إلى درجة أعلى من موت الخلايا. تُظهر هذه الصورة أقصى صبغ بـ PI بعد تحضين طوال الليل مع 10 micromolar من NMDA. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحضير شرائح حصين عضوية وقياس مستوى الإصابة العصبية.

the-organotypic-hippocampal-slice-culture-model-for-examining

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

نحن تصف طريقة لتحضير شرائح الحصين عضوي النمط التي يمكن تكييفها بسهولة إلى مناطق أخرى من الدماغ. وضعت شرائح الدماغ على الأغشية التي يسهل اختراقها وسائل الاعلام الثقافة يسمح له شكل واجهة. هذا الأسلوب يحافظ على بنية الإجمالي للقرن آمون لمدة تصل الى 2 أسابيع في الثقافة.

عضوي النمط الثقافات شريحة الحصين

يوضح هذا الفيديو طريقة لإعداد مزارع شرائح الحصين العضوية من دماغ جرو الفئران. وهو يحدد الخطوات المتبعة في تشريح الحصين ، والتقطيع ، وظروف الاستزراع المطلوبة لتعزيز بقاء الخلية ونموها في شرائح الحصين ، مما يؤدي في النهاية إلى إنشاء ثقافات شرائح عضوية.

تحضير ثقافات الشرائح العضوية من الحصين لجرو الفئران

وcoculture عضوي النمط شريحة الدماغ مع خلايا سرطان تمكن تصور التغيرات المورفولوجية التي كتبها مضان وكذلك حقل مشرق (فيديو) المجهري خلال عملية غزو الخلايا السرطانية للأنسجة المخ. هذا النظام يسمح أيضا نموذج لنهج الصرف الخلايا وتجديد، ويقدم مجموعة واسعة من التلاعب والتحليلات.

نظام Coculture مع عضوي النمط شريحة الدماغ و 3D كروي من خلايا سرطان

قمنا بتطوير نموذج شريحة الدماغ والتي يمكن استخدامها لدراسة الآليات الجزيئية المشاركة في إصابات الدماغ بوساطة التحفيز الزائدة. هذا الأسلوب يولد أنسجة المخ ناضجة قابلة للحياة، ويقلل من أعداد الحيوانات المطلوبة لإجراء التجارب، في حين الحفاظ على الدوائر العصبية، والتفاعلات الخلوية، ومقصورات بعد المشبكي سليمة جزئيا.

excitotoxic المواد تحفيز الدماغ باعتبارها Microslices<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج من السكتة الدماغية

تم وصف تقنية لدراسة خلايا NG2 والخلايا الدبقية قليلة التغصن باستخدام نظام زراعة شرائح الدماغ الأمامي والمخيخ.  تسمح هذه الطريقة بفحص ديناميكيات تكاثر وتمايز الخلايا داخل سلالة الخلايا قليلة التغصن حيث يمكن التلاعب بالبيئة خارج الخلية بسهولة مع الحفاظ على بنية الخلايا الأنسجة.

الثقافات شريحة عضوي النمط لدراسة ديناميات دبقية قليلة التغصن وتكون الميالين

بروتوكول للثقافات شريحة عضوي النمط-entorhino الحصين، والذي يسمح استنساخ جوانب كثيرة من إصابات الدماغ الدماغية، ويرد. من خلال دراسة التغيرات في neurovasculature بالإضافة إلى التغييرات في الخلايا العصبية، وهذا البروتوكول هو أداة مرنة لدراسة التغيرات البلاستيك في الأنسجة العصبية بعد الإصابة.

وتحليل وعائية عصبية إعادة عرض في Entorhino-الحصين الثقافات شريحة عضوي النمط

نحن هنا وصف تقنية لدراسة تكوين الخلايا العصبية بعد الولادة قرن آمون باستخدام تقنية عضوي النمط ثقافة شريحة. هذا الأسلوب يسمح للفي المختبر التلاعب في تكوين الخلايا العصبية الكبار ويسمح التطبيق المباشر من وكلاء الدوائية إلى الحصين مثقف.

الثقافات شريحة عضوي النمط لدراسات ما بعد الولادة تكوين الخلايا العصبية

وتمثل الثقافات شريحة هيبوكامبال أورجانوتيبيك (أوهسك) في المختبر نموذجي الذي يحاكي الوضع في فيفو جيد جداً. هنا نحن تصف المستندة إلى فيبرتوم تحسن تشريح البروتوكول للحصول على شرائح ذات جودة عالية للاستخدام في تقييم إمكانات محصن من مواد جديدة أو السلوك البيولوجي للخلايا السرطانية.

أورجانوتيبيك شريحة هيبوكامبال الثقافات كنموذج للدراسة نيوروبروتيكتيون واختزاع الخلايا السرطانية

يتم تقديم بروتوكول لاعداد الثقافات شريحة العائمة الحرة من الدماغ البشري الكبار. البروتوكول هو اختلاف أسلوب الثقافة شريحة تستخدم علي نطاق واسع باستخدام ادراج غشاء. انها بسيطه ، وفعاله من حيث التكلفة ، وأوصيت لتشغيل اختبارات قصيرة الأجل تهدف إلى كشف أليات الضمور العصبي وراء امراض الدماغ المرتبطة بالعمر.

قصيرة الأجل الحرة العائمة شريحة الثقافات من الدماغ البشري الكبار

هنا، ونحن نصف إعداد شرائح القشرة قرن آمون rhinal organotypic. في ظل الحرمان التدريجي والسيطرة عليها من المصل، وهذه الشرائح تصور الأحداث المتطورة مثل الصرع ويمكن اعتبار نموذج الجسم الحي السابق من تكوين الصرع. يمثل هذا النظام أداة ممتازة لرصد ديناميات النشاط التلقائي ، وكذلك لتقييم تطور الميزات العصبية خلال فترة تكوين الصرع.

نموذج لتولد الصرع في رينال القشرة-قرن آمون ثقافات شريحة العضوية

تهدف هذه المقالة إلى وصف بروتوكول منهجي للحصول على شرائح الدماغ قرن آمون الأفقي في الفئران. والهدف من هذه المنهجية هو الحفاظ على سلامة مسارات ألياف فرس النهر، مثل المسار المثقب والمسالك الألياف الطحبية لتقييم العمليات العصبية ذات الصلة بالجيروز.

شرائح فرس النهر الأفقية من دماغ الفأر

تعلم إنشاء مزارع شريحة الحصين النمطية العضوية لدراسة الإصابات العصبية باستخدام تقنية عزل الدماغ وصبغ اليوديد البروبيديوم. يتيح هذا النموذج قياس نسبة موت الخلايا العصبية في مناطق CA1 وCA3 والتلفيف المسنن بدقة عالية.

وعضوي النمط الثقافة شريحة الحصين النموذجي لفحص الإصابات متعلق بالخلايا العصبية

استكشف المزيد من الفيديوهات