Hi.Today سنوضح لك كيفية إجراء المحلول الكهربائي من أجل تنقية شظايا الحمض النووي مثل منتجات الهضم وتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). لأغراض أخرى مثل الاستنساخ والتسلسل ، يمكن أن يكون المحلول الكهربائي أحد الطرق المفضلة. بناء على الشحنة الكهربائية السالبة للحمض النووي ، يتم وضع حاجز خلوي مرتفع داخل المجال الكهربائي ، مما يؤدي إلى إسقاط الشظايا ومنع هجرتها الإضافية.

تسمح هذه الطريقة بتنقية مجموعة واسعة من أحجام شظايا الحمض النووي من مصادر مختلفة بكفاءة عالية نسبيا تصل إلى 80٪تكلفتها المنخفضة. تمثل ميزة أخرى للمحلول الكهربائي عند مقارنتها بطرق التنقية الأخرى مثل الأعمدة ومجموعات الراتنج وغيرها. يتم تصور عينة الحمض النووي لأول مرة عن طريق الرحلان الكهربائي لجل آريس الملون ببروميد البروميد من أجل تصور وتحديد الجزء المطلوب لتنقية ، يجب أن يستمر الرحلان الكهربائي.

تحت الشظايا مفصولة بشكل جيد ، يمكن تحديد الحجم الأصغر بدقة. بعد الرحلان الكهربائي. يتم استئصال الجزء المطلوب بدقة من الجل باستخدام شفرة حلاقة جديدة تماما مع الحرص على تحويل شريحة الجل إلى أقرب وقت ممكن من النطاق محل الاهتمام.

يجب تنفيذ هذا الإجراء مع الحماية المناسبة من الأشعة فوق البنفسجية وارتداء القفازات. بعد ملء اللوتر الكهربائي بمخزن الاحتراق المناسب والحرص على انسكابه على سطح الهضبة الوسطى ، يتم وضع شريحة الجل داخل إحدى العجلات في أقرب وقت ممكن من القناة V. يجب ألا تكون هناك فقاعات داخل قناة vch.

يمكن تجنب ذلك عن طريق شطف القناة بمخزن مؤقت لإزالة أي هواء محاصر. ثم تضاف 100 ميكرولتر من حاجز الملح العالي بعناية إلى قناة V من الموقع القريب من البئر. الغرفة مغلقة والأقطاب الكهربائية متصلة بمصدر الطاقة لبدء التشويت الكهربائي عند 100 إلى 120 فولت.

سيعتمد الفاصل الزمني على حجم الجزء للأجزاء الكبيرة التي تصل إلى 20 كيلو بايت. يجب أن تكون 50 دقيقة إلى ساعة واحدة كافية ويجب مراقبة الأجزاء الصغيرة كل 10 دقائق باستخدام ضوء الأشعة فوق البنفسجية لتجنب المزيد من الإيليون من خلال محلول الملح وفي السلسلة العازلة للبالغين النهائية. في هذه الحالة ، قمنا بهضم 560 نانوجرام من البلازميد مع إنزيمات ND واحد والدخول لإطلاق 900 قاعدة لكل جزء ، أي ما يعادل 84 نانوجرام من العينة.

وفقا لذلك ، بعد وضع شريحة الجل داخل البئر ، سيستمر التشوية الكهربائية لمدة 25 دقيقة عند 100 فولت. بمجرد اكتمال المحلول الكهربائي واحتجاز شظايا الحمض النووي في الوسادة الجنوبية داخل القناة V ، يتم استرداد 400 ميكرولتر من المحلول من القناة ، من الجانب البعيد للوعاء ووضعها في أنبوب صغير سعة 1.5 ميكرولتر باستخدام طرف رفيع متصل بحفرة صغيرة ، انتقل إلى ترسيب الكحول عن طريق إضافة مجلدين من الإيثانول المطلق البارد وخلطه بواسطة دوامة. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن إضافة اثنين إلى ثلاثة ميكرولتر من الجليكوجين لتحسين إنتاجية الأنابيب الكلاسيكية لاستعادة الحمض النووي عند 20 درجة مئوية تحت الصفر لمدة ساعة واحدة أو بدلا من ذلك ، قم بتخزين جهاز طرد مركزي طوال الليل عند أربع درجات مئوية بأقصى سرعة لمدة 25 دقيقة.

هذا الطاف القلبي وغسله بإضافة ملليلتر واحد من الطرد المركزي البارد والإيثانول بنسبة 70٪ عند أربع درجات مئوية بأقصى سرعة لمدة خمس إلى 10 دقائق ، وتخلص من المادة الطافية واتركها تجف في درجة حرارة الغرفة مع الأنابيب في وضع مقلوب ، وأنفقت الشحوم في 10 إلى 15 ميكرولتر من الماء الخالي من النواة والمضي قدما في تحديد تركيز العينة. في هذه الحالة ، تم تعليق العينة المنقاة في 10 ميكرولتر من الماء وقياسها في مقياس الطيف الضوئي بطول موجي 260 نانومتر يظهر تركيزا قدره 6.3 نانوجرام لكل ميكرولتر ، وهو ما يمثل كفاءة 75٪. قد تعتقد أنه سيكون من الأفضل لك استثمار 10 دقائق فقط من وقتك الثمين مع مجموعة.

ومع ذلك ، على الرغم من الوقت المستغرق في هذه العملية ، ستتمكن من التحكم في العديد من المتغيرات التي ستسمح لك بتنقية مجموعة واسعة من العينات التي تحمل أحجام ومصادر الطبيعة. كما رأيت في الحالة الحالية ، لوحظت كفاءة بنسبة 75٪ تساوي أو أفضل من معظم مجموعات تنقية الحمض النووي. شكرا لانضمامك إلينا اليوم.

نأمل أن تكون قد وجدت هذا البروتوكول مفيدا لمشاريعك البحثية.

النظرة العامة

تسمح هذه الإجراء بتنقية شظايا الحمض النووي بمحصول عالي. تعد التخلص الكهربائي طريقة فعالة لتنقية شظايا الحمض النووي، حيث تصل كفاءة هذه الطريقة إلى 80٪.