الاستقراء وسجل السريرية لالتهاب الدماغ و النخاع المزمن منتكس الذاتية التجريبي

أنا كريستين بيتون، باحثة مساعدة في مختبر جورج تشن بقسم الفسيولوجيا والفيزياء الحيوية في جامعة كاليفورنيا في إيرفاين. وسأقوم في الأيام القليلة القادمة بتوضيح كيفية تحفيز ومراقبة مرض EAE المزمن والمنتكس، والذي يرمز إلى التهاب الدماغ والنخاع المناعي التجريبي، في جرذان DA.

هذا نموذج حيواني للتصلب المتعدد، أو بالأحرى، أحد النماذج الحيوانية للتصلب المتعدد. ويتميز هذا النموذج بحدوث شلل رخو صاعد في تلك الحيوانات وخصائص نسيجية تشبه المرض البشري. لذا، ستستغرق هذه العملية عدة أيام.

سأوضح لكم في اليوم الأول كيفية تحضير المستحلب الجيني باستخدام متجانس النخاع الشوكي لجرذان سليم في المساعد التحسسي الكامل. وفي اليوم الثاني، سأوضح لكم كيفية تحصين الجرذان ضد التهاب الدماغ والنخاع المناعي التجريبي (EAE)، ومن ثم سننتظر فترة تتراوح بين 7 و 15 يوماً لملاحظة العلامات السريرية الأولى في تلك الحيوانات، وعند هذه النقطة سأوضح لكم مراحل التطور المختلفة لمرض EAE في حيوانات مختلفة. لذا، سأبدأ أولاً بعرض جميع الكواشف والمواد اللازمة لتحضير المستحلب.

ما أستخدمه هو المادة المساعدة الكاملة H 37 ra، ولكن على الرغم من أنها تحتوي بالفعل على mycobacterium tuberculosis، سأقوم بتدعيمها لتصل إلى 4 mg/mL باستخدام المزيد من mycobacterium tuberculosis IH 37 ra المجففة. ولتحضير هذه البكتيريا المجففة، أحتاج إلى وضعها في الهاون وطحنها باستخدام المدقة للحصول على مسحوق ناعم. وبمجرد الانتهاء من ذلك، سأقوم بإضافة هذه البكتيريا إلى المادة المساعدة.

بذلك تصبح المادة المساعدة جاهزة. الخطوة التالية هي تحضير المستضد الخاص بي. لذا، سأقوم بإخراج الحبال الشوكية للجرذان المجمدة عند -80 °C، وللحفاظ عليها مجمدة تماماً، سأضعها في أطباق الوزن فوق الثلج الجاف، ثم سأخرجها واحدة تلو الأخرى، وباستخدام شفرات حلاقة بسيطة، سأقوم بفرم الحبال الشوكية في أطباق الوزن.

سأقوم الآن بوضع المادة المساعدة المكملة على جهاز الرج (vortex). وأثناء عملية الرج، سأضيف النخاع الشوكي تدريجياً إلى المادة المساعدة. وبعد خلط كامل كمية النخاع الشوكي مع المادة المساعدة على جهاز الرج، سنستمر في الرج لمدة خمس دقائق إضافية، وبعد ذلك سنقوم بنقل المستحلب المُحضر إلى محاقن زجاجية سعة 5 M.

سنقوم بتوصيل محقنتين زجاجيتين سعة 5 مليلتر باستخدام وصلة مقاس 16 G، وسنقوم بدفع المستحلب من محقنة إلى أخرى بأقصى سرعة ممكنة عبر تلك الوصلة. وبعد بضع دقائق، عندما يبدأ المستحلب في التصلب، سننتقل إلى وصلة أصغر. هذه الوصلة مقاس 18 G، والتي ستجعل المستحلب أكثر صلابة، وسوف نحتفظ به في تلك المحاقن مع هذه الوصلة، مغلفةً بورق الألمنيوم طوال الليل في الثلاجة.

لقد قمت بوزن 30 mg من بكتيريا microbe tuberculosis على ورقة الوزن، ثم نقلتها إلى هاون. وباستخدام مدقة، قمت بتفتيت تجمعات البكتيريا وتحويلها إلى مسحوق ناعم.

ولكن يجب عدم الضغط بقوة مفرطة باستخدام المدقة لتجنب تكسير البكتيريا. تكون البكتيريا ذات لون بيج مصفر عندما تكون متجمعة في بداية الإجراء. وإذا حصلت على مسحوق ناعم جداً، فستحصل في النهاية على مسحوق أبيض، وهذا هو المطلوب، ولكن لا تضغط بقوة زائدة حتى لا تتكسر البكتيريا.

بمجرد الانتهاء من ذلك، أخذت أمبولة بحجم 10 mil من المادة المساعدة complete trans adjuvant، وتأكدت من أن جميع البكتيريا في حالة تعليق. قمت بفتح هذه العينة وسكبت كامل الـ 10 mil من complete trans adjuvant في الهاون فوق بكتيريا mycobacterium tuberculosis المفككة. والآن سأقوم بنقل complete trans adjuvant المضاف إليه المكملات إلى أنبوب بحجم 50 mil.

الآن أقوم بنقل المادة المساعدة الكاملة والمكملة (complete trans adjuvant) ووضعها في أنبوب. وبطبيعة الحال، تترسب البكتيريا في قاع السائل، لذا سأحاول نقل معظمها إلى الأنبوب. ولكن إذا بقي بعض منها في الهاون، فلن يشكل ذلك مشكلة كبيرة لأنني سأعيد استخدام هذا الهاون دون تنظيفه لتحضير مستحلب النخاع الشوكي.

إليك الحبال الشوكية. لقد تم حفظها مجمدة عند -80 درجة مئوية. قمت بوزن 10 grams منها لإضافتها إلى 10 mls من المادة المساعدة المُدعَّمة.

لذا، سأقوم بتقطيع تلك الحبال الشوكية بدقة شديدة في أطباق الوزن باستخدام شفرات الحلاقة، مع الحفاظ عليها مجمدة لأطول فترة ممكنة. ولتقطيع الحبال الشوكية بدقة شديدة، ستحتاج إلى شفرتي حلاقة وطبق وزن. ما سأفعله هو أخذ حبل شوكي واحد ووضعه في طبق الوزن ثم البدء في تقطيعه، مع وضع يدي فوقه؛ نظرًا لأن الحبل الشوكي مجمد، فإنه سيبدأ في القفز، لذا سأقوم بالتقاط القطع الكبيرة أولاً، وسيبدأ في الذوبان بسرعة والالتصاق بجانب شفرة الحلاقة.

لذا، أستخدم شفرة حلاقة أخرى لإزالته، وأحاول فرمه بأكبر قدر ممكن من الدقة وبأسرع ما يمكن حتى لا يتاح له الوقت للانصهار، لأنه يصبح من الصعب قطعه بمجرد انصهاره. لذا، فمن الأهمية بمكان أن يتم فرم الحبل الشوكي بالكامل وبدقة عالية، لأنه كلما زادت دقة الفرم، زاد تجانس الغمر، وبالتالي ستصاب المزيد من الجرذان بمرض أكثر تجانساً. لذا، من الضروري جداً فرم جميع هذه الحبال الشوكية بشكل جيد للغاية.

سأقوم الآن بفرم كل واحد من هذه الحبال الشوكية بنفس الطريقة تماماً حتى أنتهي من كامل الـ 10 grams من الحبل الشوكي. والآن، سأقوم بخلط الحبل الشوكي في الهاون قليلاً لضمان جمع كل بكتيريا mycobacterium tuberculosis التي كانت لا تزال متبقية في الهاون بعد انتهائي من إضافة المادة المساعدة. وبعد ذلك، سأقوم بوضع المادة المساعدة على جهاز الـ vortex.

وبينما أقوم بالرج المستمر باستخدام جهاز الفورتيكس بأقصى سرعة ممكنة، سأضيف عينة النخاع الشوكي المطحون تدريجياً إلى هذه المادة المساعدة. الآن لدي المادة المساعدة المدعمة على جهاز الفورتيكس، وسأبدأ في إضافة النخاع الشوكي المطحون شيئاً فشيئاً. والسبب في إضافة المستضد ببطء شديد إلى المادة المساعدة هو أننا نقوم بتكوين مستحلب من الماء في الزيت.

يتكون المساعد بشكل أساسي من زيت معدني، بينما يكون المستضد في محلول مساوٍ له. لذا، فإن ما نريد القيام به هو خلط المستضد ببطء شديد مع الزيت لضمان أن يغلف الزيت المستضد تماماً في كل مرة نضيفه فيها. فإذا أضفناه دفعة واحدة، فلن يتم تغليف المستضد بشكل كامل.

لقد أضفت الآن كل من النخاع الشوكي المتوسط إلى المادة المساعدة على جهاز المزج الدوامي (vortex)، وثبتُّ الأنبوب على الجهاز ليدور لمدة خمس دقائق إضافية لضمان خلط جميع المكونات تماماً. وأقوم بضبط السرعة بحيث أحصل على أعلى قوة مزج دوامي ممكنة دون فقدان كمية كبيرة من السائل في أنبوب الاختبار. والآن، انتهت الدقائق الخمس من المزج الدوامي، وسأقوم بإيقاف الجهاز ونقل الخليط إلى محاقن زجاجية.

لقد قمت بتجميع المحقنة بالكامل. قمت بتوصيلها بالجسر ذي القطر الأكبر، وفي الطرف الآخر من الجسر، قمت بتوصيل أسطوانة محقنة واحدة فقط، وسأقوم الآن بإضافة المستحلب إلى تلك المحقنة. والآن، لا.

سأقوم الآن بسحب كل السائل إلى المحقنة السفلية، ثم أفصل المحقنة العلوية، وأكمل تجميع الجزء العلوي، مع التأكد من عدم وجود فقاعات هوائية في المحقنة السفلية أو في الجسر. والآن سأعيد التوصيل، وبذلك تصبح كلتا المحقنتين متصلتين معاً عبر هذا الجسر.

إحداهما ممتلئة بسائل الغمر، والأخرى فارغة. وما سأقوم به الآن هو تحريك مكبس إحدى السرنجات إلى الأخرى ذهاباً وإياباً بأسرع ما يمكن. والآن، سأقوم بتغيير الوصلة ذات القطر الكبير إلى وصلة أصغر، وهي وصلة 18 G.

سيؤدي استخدام جسر أصغر إلى جعل المستحلب أكثر كثافة. ولتغيير الجسور، أقوم بنقل كل المستحلب إلى سرنجة واحدة، ثم أزيل السرنجة الفارغة، وأتأكد من عدم فقدان أي كمية في الجسر، ثم أزيل الجسر وأضع جسراً جديداً، وأطرد جميع الفقاعات الهوائية، ثم أعيد توصيل السرنجة الأخرى.

وأكرر العملية الآن بعد أن أصبح من الصعب مرور المستحلب، مع الحرص على عدم كسر هذا الجسر الذي يتصف بكونه هشاً للغاية. وأكرر هذا الإجراء باستخدام مجموعة أخرى من المحاقن طالما لا يزال هناك مستحلب في الأنبوب؛ لذا أستخدم العدد اللازم من المحاقن حتى يتم استهلاك كامل المستحلب.

لقد قمت الآن بخلط المستحلب عدة مرات، ربما من 10 إلى 15 مرة، ولكن هذا يختلف باختلاف هذه الدفعات. والآن أصبح من الصعب للغاية اختراقه. سأقوم بذلك بضع مرات أخرى، أو ربما لن أفعل.

لقد علقت الآن تماماً، لذا سأتركها في مكانها؛ وإلا فإن هناك مخاطرة بكسر المحقنة أو الجسر. لذا، عندما يتوقف التدفق، إذا حدث ذلك في وقت مبكر جداً، فهذا يعني أن الجسر قد يكون مسدوداً.

ولكن في هذه المرحلة، وبما أنني قمت بخلطه 10 أو 15 مرة على الأقل، فهذا يعني أن المستحلب أصبح جاهزاً. إنه كثيف جداً، لذا يجب أن أتركه دون تحريك. سأقوم الآن بتغليفه بورق الألمنيوم ووضعه في الثلاجة طوال الليل.

لقد قمنا بالأمس بتحضير المستحلب باستخدام الحبال الشوكية الحمراء وتركنا المستحلب طوال الليل في الثلاجة. واليوم سنقوم بإخراجه وحقنه بمعدل 200 µL لكل جرذ في قاعدة الذيل. ولكن قبل القيام بالحقن، يجب أن نتأكد من جودة المستحلب.

لذا يجب أن يظل متماسكاً، وهو لا يزال متماسكاً بشكل جيد. حتى أن الشق الذي تراه هنا يخبرنا بأنه متماسك جيداً، ولم ينفصل إلى طورين، وهو الأمر الذي سيكون غير مرغوب فيه. لذا، فإن هذا المستحلب صالح للاستخدام.

وبذلك ستحصل كل وحدة تربية على 200 µL من المستحلب الخاص بنا. ولحقنه، نستخدم محاقن سعة 3 مل، ولكننا نحرص على استخدام محاقن ذات رأس Luer Lock، لأنه في حال استخدام المحاقن ذات الرأس الانزلاقي (slip tip)، قد تخرج الإبرة من مكانها أثناء محاولة الحقن نظراً لكثافة المستحلب العالية.

لذلك، استخدم دائمًا الحقنة من نوع lu lock. وبالنسبة للإبرة، نحاول استخدام أصغر إبرة ممكنة، ولكن مع مستحلب بهذا الثخن، يتعين علينا استخدام إبرة بقياس 20 gauge. ونظرًا لأننا نحتاج إلى الحقن بدقة عالية عند قاعدة الذيل، فإننا نقوم بتخدير الجرذان لبضع دقائق، ونستغل فرصة نومها العميق لتعليمها وتمييزها.

نستخدم ثقوب الأذن، ويتم تحديد هوية كل جرذ من خلال نمط ثقب محدد. والآن نحن مستعدون لحقن الجرذان، وسنعطي كل جرذ 200 µL من المستحلب عند قاعدة الذيل، وسنقوم بتمييز الآذان في الوقت ذاته. أقوم بتحضير المستحلب في سرنجة الحقن لجرذ واحد فقط في كل مرة، لأن عملية الحقن غالباً ما تكون صعبة للغاية وأضطر للضغط بقوة، ولا أريد حقن الجرذ بكمية تزيد عما يحتاجه.

لذا، أقوم بملء المحقنة لوحدة واحدة فقط في كل مرة. لملء المحقنة، أقوم بتوصيل محقنة الحقن البلاستيكية بالجسر المتصل بدوره بالمحقنة الزجاجية التي تحتوي على المستحلب. أضع حوالي 300 µL من المستحلب في المحقنة البلاستيكية.

ثم أقوم بتوصيل الإبرة وأضغط لإخراج الهواء منها حتى لا أفقد هذه المساحة الفارغة البالغة 50 µL في الإبرة. وأتأكد من وجود 200 µL فقط، ثم أحقنها في قاعدة ذيل الجرذ. والآن، بعد أن انتهينا من حقن جميع القلوب، سنقوم بمراقبتها يومياً.

لذلك، سنقوم بوزنها كل صباح وفحصها مرتين يومياً للبحث عن العلامات السريرية لمرض EAE. ستكون العلامات الأولى، كما سأوضح لكم عند ظهورها، هي ارتخاء الذيل، ونتوقع ظهور هذه العلامات في الفئران الأولى حوالي اليوم السابع أو الثامن بعد الحقن. ستمرض معظم الفئران حوالي اليوم 10 إلى اليوم 12، بينما ستمرض آخر الفئران حوالي اليوم 15 إلى 17.

نحن الآن في اليوم الثالث عشر بعد تحصين القلوب بمستحلب النخاع الشوكي، وسأقوم الآن بمراقبة هذه الحيوانات للتحقق من درجاتها السريرية. ولكن قبل القيام بذلك، دعوني أعرفكم على كيفية إيواء حيواناتنا. تتميز الأمراض المناعية الذاتية بهذه الخاصية التي تجعل أي مسبب مرض موجود في الحيوان يقلل من الاستجابة المناعية الذاتية.

ولتفادي ذلك إلى أقصى حد، فإننا نوفر للجرذان ظروف إيواء محددة؛ حيث يتم وضعها في هذه الكابينة التي تحتوي على هواء مُرشح وتحت ضغط إيجابي، كما يتم إيواء الحيوانات نفسها في أقفاص معقمة بجهاز الأوتوكلاف. لذا، فإن كل شيء داخل القفص يتم تعقيمه بالأوتوكلاف تماماً قبل وضع الجرذان فيه.

وتوجد مرشحات (فلاتر) أعلى الأقفاص. أما الطعام فهو علف القوارض القياسي، وهو من إنتاج شركة I originated.

كما نقوم بتزويد الجرذان بمياه محمّضة؛ حيث نأخذ مياه الشرب العادية ونضيف إليها حمض الهيدروكلوريك وفقاً للبروتوكولات القياسية، ونستخدم المياه المحمّضة للحفاظ على الفلورا المعوية عند الحد الأدنى، مما يقلل من خطر إضعاف الاستجابة المناعية الذاتية. والآن، أنا مستعد لإجراء التقييم السريري لجرذاني.

تتراوح الدرجات التقييمية من صفر، وهي حالة عدم وجود علامات سريرية، إلى ستة، وهي حالة مرضية حرجة يتم عندها التضحية بالحيوانات. وسأقوم الآن بصحبتكم خطوة بخطوة لعرض أمثلة على كل درجة سريرية يمكن العثور عليها في هذا النموذج. نحن الآن في اليوم 13 بعد تحصين الجرذان بـ UCAE.

وفي هذا القفص، يوجد لدي جرذان لم يمرضا بعد. لذا، لا تظهر عليهما أي علامات سريرية على الإطلاق. وبناءً عليه، لا يزال كلا الجرذين بصحة جيدة.

إنها تتحرك وتجري في الأنحاء، وكما تلاحظون، فإنها عندما تتحرك، ترفع ذيلها عن الفرشة. لذا، فهي تترك الذيل ليجف أحياناً، ولكن في معظم الأوقات تحاول رفعه عن الفرشة. وإذا أتيحت لها الفرصة، فإنها ستتسلق أيضاً للخروج من القفص، مما يعني أنها تتمتع بالتحكم الكامل في جميع أطرافها الأربعة ويمكنها الوقوف إذا لزم الأمر.

تتمثل أول علامة سريرية لمرض EA في ارتخاء الذيل. لذا، إذا أمسكتُ بفأر وضغطتُ بإصبعي على الذيل، سيميل الفأر إلى الإمساك بإصبعي باستخدام طرف الذيل. وكما رأيتم للتو، لا يعاني هذا الفأر من ارتخاء في الذيل، ويمكنني تجربة ذلك مع الفأر الآخر.

يمسك الذيل بالإصبع، مما يعني أن هذه الجرذان لديها ذيل تفاعلي بالكامل. إن لديهم درجة سريرية تبلغ صفرًا، وهو ما يعني في الواقع عدم وجود أي أعراض على الإطلاق. وهنا جرذ لديه درجة سريرية تبلغ 0.5.

لذا، إذا اكتفيت بمراقبته داخل القفص، فإنه يتصرف بشكل طبيعي تماماً، حيث يركض ويتسلق جوانب القفص، لكن طرف الذيل لا يرتفع أبداً عن الفرشة. لذا، قد يعاني هذا الجرذ من إصابة جزئية في الذيل. لذا، ما أفعله هو الإمساك بالجرذ وإجراء الاختبار نفسه، ورغم أن الذيل يتمتع ببعض التوتر العضلي، إلا أن الطرف لا يلتف بالكامل حول إصبعي.

لذلك سأقوم بإعطاء هذا الجرذ درجة 1.5، وهي تعني شللاً جزئياً في الذيل. وتتميز الدرجة السريرية 1 بالشلل التام في الذيل، حيث لا يكون لأي جزء من الذيل أي توتر عضلي، ومع ذلك لا يزال الجرذ قادراً على استخدام أطرافه الخلفية. وكما ترون، فإن هذا الجرذ يقف مستنداً إلى جانب القفص، مما يشير إلى أن أرجله الخلفية تعمل بشكل طبيعي.

ولكن إذا فحصت ذيل تلك الجرذان عن طريق رفعها، فسأجد انعداماً تاماً في المقوية العضلية (tone) في ذيولها. وهناك اختبار آخر يمكنك القيام به أثناء وجود RU في قاع القفص؛ فإذا رفعت الذيل في حالة RU طبيعية، فإن الذيل سينخفض ببطء، أو ربما لا يصل حتى إلى الأرض في حالة RU التي تحمل درجة واحد. أما إذا رفعت الذيل في الحالات الأخرى، فسيسقط فوراً على الأرض.

تستطيع هذه الوحدة التجريبية (RU) تحريك جميع أطرافها الأربعة، ولكن الأطراف الخلفية ضعيفة جداً بحيث لا تسمح لهذه الوحدة التجريبية بالوقوف. لذا سأصنف هذه الوحدة التجريبية بدرجة سريرية تبلغ اثنين. وبذلك، فإن الفرق الرئيسي بين الدرجة واحد والدرجة اثنين هو أن الدرجة واحد تقتصر على وجود ذيل مرتخٍ فقط.

الأطراف الخلفية تعمل بكامل كفاءتها، وفي حال كانت الدرجة ثلاثة، فإن الجرذ سيسقط على جانبه. أما الدرجة اثنان فهي حالة متوسطة، حيث يمكن للجرذ استخدام أطرافه الخلفية، ولكنها تكون أضعف بكثير مقارنة بالجرذ الطبيعي. لذا، يمتلك هذا الجرذ سمة غير معتادة من مرض EAE.

تتميز حالة التهاب الدماغ والنخاع المناعي التجريبي (EAE) عادةً بشلل رخو تصاعدي، ولكن في بعض الحالات، والتي تعد نادرة جداً كما في هذه الحالة، تصاب الجرذان بشلل في الأطراف الأمامية أولاً قبل أن يصاب الطرف الخلفي بالشلل. وهذا هو حال هذا الجرذ؛ فإذا نظرت إليه، ستجد أن رأسه في مستوى أدنى من بقية جسده لأن الجرذ يعاني من صعوبات في أطرافه الأمامية ولا يستطيع التسلق على جانب القفص.

وعلى الرغم من أن أطرافه الخلفية تعمل بشكل طبيعي، إلا أنه لا يستطيع الدفع بأطرافه الأمامية. لذا، سأعطي هذا الجرذ درجة اثنان، وهو ما يتوافق مع الشلل الخفيف، رغم أننا عادة ما نلاحظ ذلك في الأطراف الخلفية في هذه الوحدة التجريبية (RU)، ولكننا نراه هنا في الأطراف الأربعة. لذا فإن هذه الوحدة التجريبية (RU) تظهر نمطاً ظاهرياً أكثر شدة من الوحدات السابقة.

تبلغ درجته السريرية ثلاثاً. وكما سأوضح لكم، فإن الأطراف الأمامية تعمل بشكل طبيعي تماماً، ولكن هناك شلل جزئي متوسط في الطرفين الخلفيين. لذا، يمكن للـ RU استخدام كلا الطرفين الخلفيين للحركة، إلا أن الـ RU يسقط على جانبه ولا يمكنه التحكم بشكل كامل في تلك الأرجل.

تصبح هذه الأبواغ أضعف بكثير مما تكون عليه عادةً بدون EE. وفي هذه المرحلة، لا نقلق بشأن ارتخاء الذيل بعد الآن لأن العديد من هذه الجرذان، بعد فترة، تبدأ في امتلاك ذيل سلكي للغاية. لذا فإن هذا الجرذ لا يزال لديه ذيل مرتخٍ للغاية، ولكن يمكنك أحياناً رؤية بعض خلل التوتر العضلي (dystonia)، حيث يبدأ الذيل في التحرك بطريقة غير منسقة.

لذا، لا ننظر إلى الذيل بعد الآن عند هذا المستوى، بل نركز فقط على كيفية عمل الأطراف. نمنح هذه الحالة درجة 3.5 لأنه إذا نظرنا إلى أطرافه الخلفية، نجد أن أحدها يتحرك، بينما الآخر مصاب بشلل تام ولا يساعد إطلاقاً في حركة الجرذ للأمام. لذا، يُعتبر هذا شللاً كاملاً في أحد الأطراف الخلفية، وبالتالي تكون الدرجة 3.5.

تمتلك هذه الوحدة التجريبية درجة سريرية تبلغ أربعة، مما يعني شللاً كاملاً في الطرفين الخلفيين، ويتميز ذلك بعدم القدرة التامة على تحريك الساقين الخلفيتين. أما الجرذ الموجود في هذا القفص فدرجته السريرية تبلغ خمسة، وهو ما يقابل شللاً كاملاً في الطرفين الخلفيين مع سلس بول إضافي. هذا الحيوان يعاني من سلس البول، وكما نلاحظ، فإنه يرتكز بثقله كاملاً في هذه المنطقة، وهو ما لا نراه في الحيوانات الأخرى التي لا تعاني من سلس البول.

عندما تسجل حيوانات HUS درجات ثلاثة أو أكثر، نقوم بتزويدها بزجاجات مياه ذات أنابيب شرب طويلة لضمان قدرتها على الوصول إلى الماء. كما نضع الطعام في قاع القفص، ونقدم لها عبوات الجل. ورغم كل هذه الإجراءات، فإننا نقوم في كل مرة نخرج فيها الجرذان لمراقبتها، وهو أمر يتم مرتين يومياً، بتقديم الماء لها في حال لم تكن قد حصلت على كمية كافية من الماء خلال اليوم.

لدي هنا جرذ بدرجة سريرية تبلغ أربعة. وفي هذه المرحلة، تحتاج هذه الحيوانات إلى بعض التشجيع على الأكل. لذا، ما أقوم به هو ترطيب طعامها، مما يجعل مضغه أسهل بكثير بالنسبة لها.

على مدار الأسبوعين الماضيين، أوضحتُ لكم كيفية تحفيز ومراقبة التهاب الدماغ والنخاع التجريبي (EAE) المزمن الانتكاسي في جرذان DA. ففي الخطوة الأولى، شرحتُ لكم كيفية تحضير مستحلب النخاع الشوكي، ثم كيفية حقنه في قاعدة ذيل تلك الجرذان. واليوم، أوضحتُ لكم كيفية تقييم تلك الجرذان بناءً على مستويات مختلفة من المرض.

بالطبع، هذا نموذج مزمن منتكس، لذا نتوقع أن تتقلب درجات التقييم لدى الجرذان. سيمر المرض بمرحلة هجوع خلال أيام قليلة ثم ينتكس بمرور الوقت. وستدخل بعض الجرذان في مرحلة أكثر مزمنة من المرض.

سوف يختلف الأمر من حيوان لآخر. والآن، قبل أن ننهي هذا الفيديو، أود التأكيد على أمر واحد بشأن اختبار الأدوية في هذه النماذج. النقطة البالغة الأهمية هي توزيع الحيوانات عشوائياً بأفضل طريقة ممكنة.

من المهم جداً معرفة أنه كلما ظهر المرض على الحيوان في وقت مبكر، كانت حالته المرضية أكثر شدة. لذلك، لا ينبغي وضع جميع حيوانات المجموعة الضابطة في اليوم الأول، ثم وضع الحيوانات المعالجة في الأيام القليلة التالية. ما نقوم به هو أنه بمجرد إصابة الحيوان بالمرض وفي اليوم الذي نرغب فيه ببدء العلاج، نقوم بتوزيع الحيوانات عشوائياً على مجموعتين مختلفتين.

إذا كان لدينا، على سبيل المثال، مجموعة ضابطة واحدة ومجموعة معالجة واحدة، فإن القلب الأول سيوضع في المجموعة الضابطة، والثاني في المجموعة المعالجة، وهكذا حتى يتم توزيع جميع الحيوانات على مجموعاتها. ولكننا نحرص على أن يتم هذا التوزيع العشوائي في أبكر وقت ممكن ضمن البروتوكول. آمل أن يكون هذا الفيديو مفيداً لكم وأن تتمكنوا من تحفيز ومراقبة التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي (EAE) المزمن والمنتكس في جرذان D.

مع تمنياتنا لكم بالتوفيق في تجاربكم.