زرع أسلاف الخلايا العصبية المشتقة من الخلايا الجذعية في شرائح قشرية بشرية

ابدأ بثقافة ملتصقة للخلايا السلفية العصبية المشتقة من الخلايا الجذعية المعدة للتمايز إلى الخلايا العصبية القشرية.

قم بإزالة الوسط ، ثم أضف إنزيما لتعطيل المصفوفة خارج الخلية وفصل الخلايا.

استخدم مثبطا لتحييد الإنزيم ، ثم أضف وسيطا جديدا.

انقل المعلق إلى أنبوب ، وجهاز طرد مركزي ، وتخلص من المادة الطافية لعزل الخلايا.

أعد تعليق الخلايا في مصفوفة غشاء القاعدي لتسهيل الزرع في أنسجة المخ ، ثم قم بتحميلها في أنبوب شعري بارد.

خذ شريحة قشرية بشرية على مجموعة عبر البئر تحتوي على وسيط.

قم بإزالة جزء من الوسط ، ثم حقن قطرات من تعليق الخلية في الأنسجة.

احتضان للسماح للمصفوفة بالتصلب.

أضف وسيطا لغمر الأنسجة ، ثم احتضانه لتمكين الخلايا السلفية من التمايز إلى خلايا عصبية ، وتوسيع عصبها ، وتشكيل نقاط الاشتباك العصبي مع الخلايا العصبية القشرية المضيفة.

الشريحة القشرية جاهزة الآن للتحليل.

قم بإزالة الوسائط من قارورة زراعة الخلايا. في اليوم السابع من التمايز ، افصل خلايا GFP-lt-NES المعدة قشريا عن طريق إضافة 500 ميكرولتر من التربسين واحتضانها لمدة 5 إلى 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.

بعد ذلك ، أضف حجما متساويا من مثبط التربسين متبوعا بخمسة ملليلتر من وسط DDM. أعد تعليق الخلايا ، وانقل تعليق الخلية برفق إلى أنبوب سعة 15 مليلتر ، وجهاز طرد مركزي لمدة خمس دقائق عند 300 جم. في هذه الأثناء ، انقل اللوحة التي تحتوي ع