التعبير الجيني عن طريق التثقيب الكهربائي أحادي الخلية في مزارع شرائح الحصين في الفئران

ابدأ بشريحة الحصين من دماغ الفأر المزروع على إدراج ثقافة في طبق.

قم بقص الملحق الذي يحتوي على الشريحة وثبته في غرفة التثقيب الكهربائي تحت المجهر.

قم

بتفريخ الغرفة بمخزن مؤقت يحتوي على مانع قناة الصوديوم بالجهد الكهربائي لمنع الإفراط في الإثارة ومنع السمية الخلوية.

ضع ماصة تحتوي على بلازميدات مع الجين محل الاهتمام بالقرب من الشريحة.

حافظ على الضغط الإيجابي لمنع انسداد الماصة أثناء الاقتراب من خلية عصبية الحصين المستهدفة حتى تتشكل غمازة غشائية.

قم بالتبديل إلى الضغط السلبي لإنشاء ختم بالغشاء.

قم بالتبديل بين الضغط الإيجابي والسلبي لتقليل الضرر الخلوي.

قم بتطبيق نبضة التثقيب الكهربائي لاختراق الغشاء بشكل عابر ، مما يسهل دخول البلازميد.

اسحب الماصة مع الحفاظ على الضغط الإيجابي ، وكرر التثقيب الكهربائي للخلايا العصبية المستهدفة المجاورة.

انقل الشريحة المثقبة بالكهرباء إلى ملحق جديد واحتضانها للسماح بالتعبير عن الجين محل الاهتمام.

لتحضير مزارع الشرائح للتثقيب الكهربائي ، انقل إدخالات الثقافة ذات الأهمية إلى أطباق بتري فردية بحجم ثلاثة سنتيمترات محملة ب 900 ميكرولتر من وسط الاستزراع ، وضع الثقافات في حاضنة ثاني أكسيد الكربون على الطاولة. بعد ذلك ، قم باحتضان إدخالات الثقافة الطازجة مسبقا باستخدام مليلتر واحد من وسط زراعة الشرائح لكل إدراج في طبق بتري بطول 3.5 سم لمدة 30 دقيقة على الأقل ، وقم بتعقيم