Hyperinsulinemic - المشبك سوي سكر الدم في الفئران وإدراكا

الهدف العام من هذا الإجراء هو تقييم حساسية الأنسولين في الفئران الواعية غير المقيدة. يتم تحقيق ذلك عن طريق القسطرة الأولى ، الشريان السباتي الأيسر. بعد ذلك ، يتم قسطرة الوريد الوداجي الأيمن لضمان أفضل النتائج.

يتم شطف القسطرة يوميا للحفاظ على سالكية خلال فترة التعافي التي تستمر خمسة أيام بعد الجراحة. في النهاية ، يمكن الحصول على النتائج من المشبك الجلايسيمي U المفرط للنسمة الذي يظهر معدلات ضخ الجلوكوز في الجسم بالكامل. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن الحصول على قياسات مباشرة لمعدلات التخلص من الجلوكوز في الجسم بالكامل بمستويات عالية من الأنسولين الفسيولوجي.

يجب تحضير القسطرة الشريانية والوريدية قبل العملية الجراحية. يجب أن يكون للقسطرة نهايات حادة مملوءة بمحلول ملحي هيبارين وأن يتم تعقيم الإيثانول بنبضة مقيدة مثبتة بإحكام على 2.7 أو 3.2 سم من أحد طرفيها للقسطرة الشريانية والوريدية على التوالي. يتم استخدام ذكور الذكور البالغين من الفئران الدمية التي يبلغ وزنها حوالي 300 جرام في هذا الإجراء.

سجل الوزن الأولي للحيوان واستخدم هذا الوزن لمراقبة زيادة الوزن بعد الجراحة. العمل في منطقة جراحية معقمة. قم بتخدير الفئران بنسبة 3٪ من الفلور عن طريق وضعه في صندوق مخدر.

انقل بعيدا عن منطقة الجراحة وقم بإعداد موقع الشق عن طريق إزالة الشعر من حول الرقبة والكتفين. بمجرد إزالة الشعر ، ضع في مخروط الأنف للحفاظ على التخدير بحوالي 2٪ من الفلور. قم بتأمين على طاولة الجراحة.

تأكد من تخدير الجرذ بالكامل عن طريق التحقق من وجود ردود أفعال في القدم و / أو العين. نظف موقع الشق بنسبة 70٪ من الإيثانول ، متبوعا بمقشر البيتادين متبوعا مرة أخرى بنسبة 70٪ من الإيثانول. تتمثل الخطوة الأولى في الإجراء في عمل شق عمودي صغير في خط الوسط 10 ملم أعلى من القص.

استخدم ملقط تشريح دقيق منحني لتشريح الأنسجة بعيدا وفضح العضلة الخشائية القصية اليسرى. تعكس هذه العضلة لتكشف عن سنتيمتر واحد تقريبا من الشريان السباتي الأيسر. ضع ملقط تشريح دقيق تحت الشريان السباتي لتثبيته في مكانه مع إغاظة النسيج الضام برفق.

من المهم عزل العصب المبهم بعيدا عن الشريان دون الإضرار بالشريان أو العصب. استخدم خياطة حريرية معقمة أربعة أوه لربط نهاية رأس. قم بتثبيت الوعاء بملقط تشريح دقيق مسنن.

ثقب المربوط. انتهي بمحول إغراء عينة متعدد قياس 21. قم بإزالة السدادة المصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ من القسطرة واستخدم مدخل قسطرة معقم لتوجيهه إلى الشريان.

استخدم الملقط للتأكد من أن القسطرة آمنة. جزئيا. حرر ملقط التشريح الدقيق ، وقم بتثبيت الشريان واستمر في إدخال القسطرة حتى الخرزة. في هذه المرحلة ، يجب أن يكون طرف القسطرة في قوس الأبهر.

قم بتأمين خيوط أسفل الخرزة وواحدة أعلاه ، واغسل الخط ب 10 وحدات لكل مليلتر من محلول ملحي هيبارين. للتأكد من أن القسطرة ستعين، أعد توصيل الطرف الخارجي للقسطرة بسدادة من الفولاذ المقاوم للصدأ. بعد ذلك تشريح الأنسجة الحادة لفضح الوريد الوداجي الخارجي الأيمن ، قم بعزل الوريد بعناية وربط الرأس.

انتهي بخياطة الحرير. ثقب الوريد بمقياس 21. إخراج محول إغراء عينة متعددة.

قم بإزالة السدادة المصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ من القسطرة واستخدم مدخل قسطرة معقم لإدخالها في الخرزة. قم بتأمين خياطتين أسفل الخرزة وواحدة فوقها. واغسل الخط ب 10 وحدات لكل مليلتر من محلول الهيبارين الملحي.

للتأكد من أن القسطرة ستعين عينة ، أعد توصيل الطرف الخارجي للقسطرة بسدادة من الفولاذ المقاوم للصدأ باستخدام نفق إبرة حادة عيار 14 تحت الجلد وقم بعمل شق في الخلف بين لوحي الكتف. بعد ذلك ، قم بتمرير القسطرة من خلال الإبرة حتى تخرج من الجزء الخلفي من الفئران. يجب أن يكون ما يقرب من أربعة سنتيمترات من كل قسطرة مرئيا.

قم بقص 0.5 سم من الأنابيب الطبية Tigon S 50 HL وضعها حول كل من القسطرة الخارجية. قم بتثبيته بشريط أزرق للأوردة وأحمر للشرايين. أعد اختبار القسطرة لضمان سالكية ثم اشطفها واملأها ب 150 وحدة لكل مليلتر من محلول ملحي هيبارين لمنع التخثر.

أغلق جميع الشقوق بثلاثة خياطة حريرية. ضع الجرذ في وضع الانبطاح في قفص نظيف تحذير مسبقا مع سهولة الوصول إلى الطعام. بمجرد أن يستعيد الجرذ القدرة المتنقلة الكاملة واليقظة ، أعده إلى قفص المنزل.

اسمح للفأر بالتعافي لمدة ثلاثة إلى خمسة أيام مع مراقبة العدوى والألم والتغيرات في الوزن يوميا. من المهم الحفاظ على سالكية القسطرة طوال الدراسة. كل يوم بعد الجراحة، املأ محاقن طرف انزلاقية واحدة ب 150 وحدة لكل مليلتر من المحلول الملحي الهباريني وقم بتغطيتها بإبرة حادة عيار 22.

يتم إدخال الإبرة الحادة في 20 سم من أنابيب PE 50 مع مقرنة أنابيب من الفولاذ المقاوم للصدأ قياس 23 في الطرف الآخر. تأكد من إزالة جميع فقاعات الهواء من الخط قم بتثبيت الخط الشرياني الخارجي من الفئران باستخدام مرقئ. أسفل القابس مباشرة.

قم بإزالة سدادة القسطرة الفولاذية باستخدام زوج آخر من المرقئ. أدخل قارنة التوصيل الأنبوبية المتصلة بالمحقنة في الخط الشرياني وحرر مرقئ الدماغ الذي يحجب القسطرة الشريانية الخارجية. بعد ذلك ، استنشق الدم الشرياني للقسطرة في المحقنة.

إذا لم يتم سحب القسطرة بسهولة ، فقد يكون من الضروري دفع كمية صغيرة من المحلول برفق شديد عبر القسطرة لإزاحة الحافة. تعتبر القسطرة قد تم تطهيرها. عندما يصل الدم إلى المشبك المحقنة ، قم بتثبيت أنبوب P 50 بالقرب من حقنة المليلتر الواحد وتخلص من المحقنة.

استبدلها بحقنة جديدة مليئة بمحلول ملحي من الهيبارين الطازج. قم بفك المشبك الأنبوب وأثناء الإمساك بالمحقنة الجديدة في وضع مستقيم ، قم بنقر المحقنة الجديدة لإخراج فقاعات الهواء لأعلى وبعيدا عن الخط. حقن محلول ملحي هيبارين حتى يصبح خط القسطرة صافيا وخاليا من الدم.

قم بتثبيت الخط الشرياني أسفل مقرنة الأنبوب. قم بإزالة موصل المحقنة من خط القسطرة الشريانية واستبدله بسدادة أنابيب من الفولاذ المقاوم للصدأ. حرر انسداد المرقئ ، القسطرة الشريانية الخارجية.

كرر هذا الإجراء للخط الوريدي. بسبب الضغط الوريدي المنخفض قد لا يكون أخذ العينات ممكنا. بشكل عام ، إذا كان من الممكن غرس المحلول الملحي الهيباريني بأقل قدر من المقاومة ، فمن المحتمل أن تكون القسطرة في وضع جيد في الوريد.

قبل البدء في الإجراء ، يجب وزن وإعداد المحاليل وتجميع جهاز المشبك بعد وزن وتأكيد سالكية القسطرة ، ضعه في وعاء صغير به فراش يحد من الحركة ولكنه لا يقيدها. الصوم الفئران المستخدمة في هذه الدراسة لمدة خمس ساعات على الأقل وقد استوفت متطلبات زيادة الوزن بعد الجراحة. يحدد وزن الجرذ كمية الأنسولين المطلوبة هنا.

يتم إعطاء أربع وحدات ملي لكل كيلوغرام في الدقيقة بمعدل ميكرولتر في الدقيقة. قم بإعداد محلول سكر العنب بنسبة 50٪ وتأكد من وجود ما يكفي من كلا المحلولين ليستمر حوالي ساعتين هنا ، يتم استخدام ثلاث محاقن ملليلتر. أنت الآن جاهز لتجميع جهاز المشبك.

قم بإعداد الخطوط ومضخات التسريب كما هو موضح هنا. ضع محاقن الجلوكوز والأنسولين على مضخة المحقنة. قم بتثبيت الخطوط والسماح للفأر بالاسترخاء لمدة 30 دقيقة قبل بدء التجربة.

لبدء الإجراء ، خذ عينة أساسية من الأنسولين والهيماتوكريت يضمن أخذ عينات الهيماتوكريت الحفاظ على حجم الدم طوال التجربة. بشكل عام ، يجب ألا تنخفض مستويات الهيماتوكريت أكثر من 10٪ من القيمة الأولية. احصل على عينة الجلوكوز الأساسية وحدد مستوى الجلوكوز المراد تثبيته.

هنا نقوم بتثبيت نسبة السكر في الدم على U أو خمسة مللي مولار. بعد كل عينة دم ، اغسل الخط الشرياني بحجم صغير يبلغ 10 وحدات لكل مليلتر من محلول ملحي هيباريني لمنع التخثر. بعد تحديد مستوى الجلوكوز المراد تثبيته ، ابدأ في ضخ محلول الأنسولين.

سجل نسبة الجلوكوز في الدم على فترات من خمس إلى 10 دقائق واضبط معدل ضخ الجلوكوز كما هو مطلوب حتى يتم تحقيق حالة مستقرة. هذه بشكل عام عملية تجربة وخطأ ويمكن أن تستغرق من 30 دقيقة إلى أكثر من ساعتين. يعتمد مستوى الجلوكوز المطلوب للحفاظ على نسبة السكر في الدم على البروتوكول التجريبي.

الأنواع والظروف الموجودة من أجل اعتبارها مثبتة ، يجب أن تقع ثلاث قراءات متتالية ضمن نطاق محدد. تشير ثلاث قراءات في حدود ملليمولار واحد تقريبا من بعضها البعض إلى أن مستويات الجلوكوز قد وصلت إلى مستوى قياسي في حالة مستقرة. معدل ضخ الجلوكوز المطلوب للحفاظ على نسبة السكر في الدم لمدة 30 دقيقة ، يمكن الحصول على عينات دم إضافية خلال هذا الوقت على الأقل.

يجب جمع عينة ثانية من الهيماتوكريت الأنسولين في البلازما بمجرد اكتمال إجراء المشبك. يمكن استخدام لمزيد من الاختبارات أو القتل الرحيم في الأنسجة التي تم جمعها لمزيد من التحليل. اعتمادا على القسطرة الحيوانية ، يمكن أن تظل خطوط براءة اختراع لمدة خمسة إلى سبعة أيام عند إجراؤها بشكل صحيح.

يمكن لإجراء المشبك قياس حساسية الأنسولين في الحالة المستقرة. من الضروري تسجيل مستويات الأنسولين والجلوكوز وكذلك معدلات ضخ الجلوكوز وقيم الهيماتوكريت. يتم الوصول إلى الحالة المستقرة عندما تظل مستويات الجلوكوز في حدود ملليمولار واحد من بعضها البعض على مدى 30 دقيقة زمنية.

يكشف معدل ضخ الجلوكوز عن مستوى الجلوكوز الخارجي المطلوب للحفاظ على نسبة السكر في الدم على شكل حرف U حيث يجب تطعيم المعدل بمرور الوقت بدلا من متوسط نقطة زمنية واحدة. يجب الإبلاغ عن كل من مستويات الأنسولين الصائم والمشدود. تؤكد هذه المقاييس أن الأنسولين قد تم تسليمه بنجاح وستكشف عن أي اختلافات في استجابة الأنسولين بين مجموعات العلاج التي تقيس مستويات الهيماتوكريت عند خط الأساس ، ومرة أخرى بعد الإجراء يؤكد أن المستويات لم تنخفض أكثر من 5٪ من خط الأساس على مدار التجربة بعد هذا الإجراء.

يمكن استخدام طرق أخرى مثل إدارة تتبع النظائر لتقييم استخدام الجلوكوز الخاص بالجسم والأنسجة بالكامل.