عزل الحمض النووي الجينوم من الذيول ماوس

إذن هذا جرو فأر يبلغ من العمر 10 أيام وسأقوم بأخذ خزعة الذيل وبعد ذلك سأستخرج الحمض النووي الجيني من ذيله. لذا ما سأفعله هو قص القليل من ذيله ، حوالي ثلاثة ملليمترات تقريبا ، ثم أضع قطعة الذيل في أنبوب إينور وسأضع أنبوب إينور على الجليد الجاف. الآن ، لتجنب التلوث من فأر إلى آخر ، عادة ما أضع علامة على شفرة الحلاقة في الجزء الذي أجريت فيه القطع الأخير.

بهذه الطريقة بالنسبة للماوس التالي ، سأكون متأكدا من استخدام قطعة نظيفة من شفرة الحلاقة لأخذ خزعة الذيل التالية. من أجل التمييز بين الفئران المختلفة في فضلاتك ، ستحتاج إلى طريقة للتعرف على الفئران. تتمثل إحدى طرق القيام بذلك في إحداث ثقب في آذانهم باستخدام أداة ثقب الأذن الموضحة هنا.

خذ الماوس برفق من قفصة رقبته ، لذا اقلبه واضغط على ذيله بين أصابعك. خذ ثقب ثقب الأذن في اليد الأخرى وقم بقص سريع في أذن الماوس هناك. انظر كيف كان ذلك غير مؤلم؟

حسنا ، يمكنك الآن أن ترى أن لدي بعض قطع الذيل في أنابيب einor هذه والآن سأضيف المحاليل التي ستساعدهم على الهضم. أولا سأضيف 720 ميكرولتر من محلول STE ، ثم سأضيف 30 ميكرولترا من البروتين. Ace K.So إليك نظرة على قطعة الذيل التي قطعناها قبل الهضم.

الآن سأضع قطع الذيل على كتلة تسخين 55 درجة. تتطلب العديد من البروتوكولات حركة متواصلة تهتز عند 55 درجة ، لكن لأغراضي ، لن يكون هذا ضروريا لأنني سأقوم بتدوير قطع الذيل. الآن سأقوم بتدوير قطعة الذيل لمدة ثانيتين.

واحد اثنان. إذن بعد الدوامة ، إليك نظرة على ما تبقى داخل أنبوب einor هنا ، ويمكنك أن ترى أن قطعة الذيل قد تم إذابتها تماما وتنشيط البروتيناز K عند 70 درجة مئوية لمدة خمس دقائق. ارويها على الجليد لمدة خمس دقائق.

قم بتدوير قطع الذيل في جهاز طرد مركزي صغير لمدة 10 دقائق بأقصى سرعة. في جهاز الطرد المركزي الصغير هذا ، تبلغ السرعة الكاملة 13 ، 000 دورة في الدقيقة. أثناء دوران ذيول الجهاز الهضمي لأسفل ، قم بتسمية بعض أنابيب einor تملأ أنابيب einor ب 750 ميكرولتر من الأيزوبروبانول.

بعد تدوير الذيول المهضومة ، سيشكل الشعر والمواد غير المهضومة حبيبات في الجزء السفلي من صب الأنبوب. سيبدأ المحلول الذي يحتوي على المادة المهضومة ، STE و proteinase K في أنبوب einor الذي يحتوي على الحمض النووي الأيزوبروبانول في الخروج من المحلول ، وسيبدو شبحا وشبيهة بالريش ، وهناك يسبح حول تلك الفقاعة هو الحمض النووي الجيني الذي تم عزله من ذيل الفأر. بعد خلط محلول الأيزوبروبانول و STE ، سيخرج الحمض النووي الجيني من المحلول ويظهر على أنه هذه الكرة الصغيرة هنا ، تدور الحمض النووي الجيني المترسب لمدة خمس دقائق بأقصى سرعة في جهاز طرد مركزي صغير.

هناك في الجزء السفلي من الأنبوب نظرة على الحمض النووي الجيني المحبب. الآن سأقوم بشفط المحلول داخل الأنبوب ، تاركا ورائي فقط حبيبات الحمض النووي الجيني. في كل مرة أشتح فيها أنبوبا آخر ، سأقوم بتغيير الأنبوب.

طرف الأليفة على طرف هذا الشفاطة. بعد شفط STE والأيزوبروبانول ، سأضيف ملليلتر واحد من 70٪ من الإيثانول لغسل حبيبات الحمض النووي الجيني. نظرا لأن حبيبات الحمض النووي الجيني عادة ما تلتصق بجانب أنبوب الصخور الدقيقة ويصعب النزول لغسلها جيدا في 70٪ من الإيثانول ، فستحتاج إلى إشعالها عبر رف أنبوب fuge الصغير الموجود هنا.

يمكنك أن تفعل ذلك على هذا النحو. إذن إليك نظرة على الحمض النووي الجيني بعد أن تم تكويبه وغسله في 70٪ من الإيثانول. سأقوم بتدوير هذا مرة أخرى بأقصى سرعة لمدة خمس دقائق ثم أستطيق 70٪ من الإيثانول أسفل كريات الحمض النووي الجينومية بعد غسلها.

70٪ من الإيثانول لمدة خمس دقائق بأقصى سرعة ، وسوف يستنشق 70٪ من الإيثانول ويترك الحمض النووي يجف لمدة خمس دقائق. هناك نظرة على حبيبات الحمض النووي الجينومية في الجزء السفلي من الأنبوب ، وهذا جاف بقدر ما تريد الحصول عليه. لقد جففت حبيبات الحمض النووي الجيني من ذيول الفأر ، والآن سأضيف مائة ميكرولتر من 40 ملليمولار تريس عند درجة الحموضة ثمانية.

لذلك لدي الحمض النووي الجيني عند 50 درجة مئوية ، حيث سيدخل في المحلول بسرعة أكبر من إضافة درجة حرارة الغرفة. بعد حوالي ساعة أو نحو ذلك عند 50 درجة ، سأقوم إما بتجميده أو وضعه عند أربع درجات حتى أرغب في تشغيل تفاعلات تفاعل البوليميراز المتسلسل لمعرفة الفئران الإيجابية للجين المعدل وراثيا.