Name: حقن المثانة الماوس الجدار (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 48 s
Description: تعلم تقنية الحقن الجراحي الدقيق في جدار المثانة الفأرية لدراسة الخلايا الجذعية وعلم الأورام. تتيح هذه الطريقة توجيه مكان زراعة الخلايا بدقة عالية مقارنة بالتقنيات التقليدية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

نحن الامتنان على الدعم من منحة رائدة من ستانفورد للأبحاث صندوق الأطفال و01 - K08DK087895 من جوائز كبيرة.

1. حقن المثانة الماوس الجدار وأملت اختيار سلالة الفأر ، والعمر ، والجنس ، وفقا لاحتياجات التجريبية. نستخدم الفئران بين 8 و 12 أسبوعا من العمر ، حيث أن هذه هي نافذة من النضج المناعية قبل الشيخوخة. كمبدأ عام ، يجب أن تصل الفئران على الأقل قبل أسبوع واحد للتلاعب التجريبية بغية تجنب التوتر الناجم عن عوامل خارجية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف سطح الطاولة الجراحية بالصابون والماء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح سطح الطاولة الجراحية مع احدث الضربات الشديدة أو مناديل مطهرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأوتوكلاف الأدوات الجراحية النظيفة قبل استخدامها في الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بالإضافة إلى ذلك ، مع تعقيم الأدوات الجراحية معقمة حبة الساخنة مباشرة قبل استخدامها ، وكذلك بين الحيوانات أثناء الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> محاقن نظيفة 100 ميكرولتر هاميلتون و 29 أو 30 مقياس (1 / 2 بوصة طويلة) بواسطة الإبر والحقن التطلع المتكررة مع الكحول المطلق قبل الاستخدام لأول مرة وعند نهاية الإجراء الجراحي النهائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل وشطف المحاقن المعقمة هاميلتون مع الفوسفات مخزنة المالحة بين كل الحيوانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران عن طريق وضعها في غرفة isoflurane الاستقراء ، مع مجموعة isoflurane بين 2-5 ٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> متى تم تحقيق التخدير العام ، وإزالة الماوس من الغرفة ووضعه في موقف ضعيف مع وسادة دافئة تحت للمساعدة في الحفاظ درجة حرارة الجسم طبيعية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقيق التخدير الصيانة عن طريق وضع أنف الحيوان في فوهة تحتوي على تبخير isoflurane (معاير من 1-3 ٪ حسب الضرورة للحفاظ على التخدير المناسبة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حلق جلد البطن مع لوس انجليس كليبرز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ، ثنى الجراحية المعقمة المتاح لتغطية فتحة الشرج لمنع تلوث برازي أثناء الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الثاني ، ثنى الجراحية المعقمة المتاح لتغطية الجراحي الميداني (أسفل البطن). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإعدادية في البطن مع ثلاث قطع من الشاش Betadine غارقة. كرر هذه الخطوة ثلاث مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مجهر تشريح للتضخم ، وجعل الدنيا شق البطن خط الوسط مع المقص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعرض المثانة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كانت المثانة ممتلئة ، ضغط جزئيا من قبل الضغط النزولي لطيف في القبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن محلول العينة (تصل إلى 50 ميكرولتر) ، وذلك باستخدام إبرة قياس 29 أو 30 والمحاقن ، في جدار القبة المثانة (حقن جماعية) مع شطبة من الإبرة التي تواجه صعودا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دفع المكبس من حقنة لحقن محلول العينة في جدار المثانة. وفقاعة جيدا المترجمة هو مؤشر على نجاح حقن الخلايا في جدار المثانة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المحاقن ، وإغلاق شق الجرح مع لقطات والسماح الماوس لاستعادة العافية الاقتصادية على منصة ارتفاع حرارة الارض. </li></ol> 2. ممثل النتائج : وفقاعة جيدا المترجمة التي لا تسرب السوائل ويبقى مستقرا في الحجم هو دليل على نجاح حقن الخلايا في جدار المثانة (الشكل 1). ويمكن إجراء التحليل النسيجي للتأكد من وجود حقن الخلايا في جدار المثانة. <img src="/files/ftp_upload/2523/2523fig1.jpg" alt="الشكل 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 1"> الشكل 1. مثال لنجاح حقن المثانة الحائط باستخدام الحبر الهند التوضيح. <img src="/files/ftp_upload/2523/2523fig2.jpg" alt="الشكل 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 2"> الشكل 2. تخطيطي الإجراءات التجريبية.

<ol><li>Dinney, C. P., Fishbeck, R., Singh, R. K., Eve, B., Pathak, S., Brown, N., Xie, B., Fan, D., Bucana, C., Fidler, I. J., Killion, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Characterization+of+Metastatic+Variants+from+Human+Transitional+Cell+Carcinoma+Passaged+by+Orthotopic+Implantation+in+Athymic+Nude+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Isolation and Characterization of Metastatic Variants from Human Transitional Cell Carcinoma Passaged by Orthotopic Implantation in Athymic Nude Mice.</a> The Journal of Urology. 154, 1532-1538 (1995).</li>
<li>Singh, A. V., Franke, A. A., Blackburn, G. L., Zhou, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soy+Phytochemicals+Prevent+Orthotopic+Growth+and+Metastasis+of+Bladder+Cancer+in+Mice+by+Alterations+of+Cancer+Cell+Proliferation+and+Apoptosis+and+Tumor+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Soy Phytochemicals Prevent Orthotopic Growth and Metastasis of Bladder Cancer in Mice by Alterations of Cancer Cell Proliferation and Apoptosis and Tumor Angiogenesis.</a> Cancer Res. 66, 1851-1858 (2006).</li>
<li>Yanagiuchi, A., Miyake, H., Nomi, M., Takenaka, A., Fujisawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+the+Microenvironment+by+Growth+Factors+Regulates+the+In+Vivo+Growth+of+Skeletal+Myoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">Modulation of the Microenvironment by Growth Factors Regulates the In Vivo Growth of Skeletal Myoblasts.</a> BJU International. 103, 1569-1573 (2009).</li>
<li>Miyake, H., Hara, I., Yamanaka, K., Gohji, K., Arakawa, S., Kamidono, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+Bcl-2+Enhances+Metastatic+Potential+of+Human+Bladder+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Overexpression of Bcl-2 Enhances Metastatic Potential of Human Bladder Cancer Cells.</a> British Journal of Cancer. 79, 1651-1656 (1999).</li>
<li>Chancellor, M. B., Yokoyama, T., Tirney, S., Mattes, C. E., Ozawa, H., Yoshimura, N., Groat, W. C. de, Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+Results+of+Myoblast+Injection+into+the+Urethra+and+Bladder+Wall%3A+a+Possible+method+for+the+Treatment+of+Stress+Urinary+Incontinence+and+Impaired+Detrusor+Contractility%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Preliminary Results of Myoblast Injection into the Urethra and Bladder Wall: a Possible method for the Treatment of Stress Urinary Incontinence and Impaired Detrusor Contractility.</a> Neurourol Urodyn. 19, 279-287 (2000).</li>
<li>Dinney, C. P., Tanguay, S., Bucana, C. D., Eve, B. Y., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravesical+Liposomal+Muramyl+Tripeptide+Phosphatidylethanolamine+Treatment+of+Human+Bladder+Carcinoma+Growing+in+Nude+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Interferon+Cytokine+Res%22%5BJournal%5D)">Intravesical Liposomal Muramyl Tripeptide Phosphatidylethanolamine Treatment of Human Bladder Carcinoma Growing in Nude Mice.</a> J Interferon Cytokine Res. 15, 585-592 (1995).</li>
<li>Mohamedali, K. A., Kedary, D., Sweeney, P., Kamaty, A., Davisy, D. W., Evey, B. Y., Huangy, S., Thorpez, P. E., Dinney, C. P., Rosenblum, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Vascular-targeting+Fusion+toxin+VEGF121%2FrGel+Inhibits+the+Growth+of+Orthotopic+Human+Bladder+Carcinoma+Tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">The Vascular-targeting Fusion toxin VEGF121/rGel Inhibits the Growth of Orthotopic Human Bladder Carcinoma Tumors.</a> Neoplasia. 7, 912-920 (2005).</li>
<li>Slaton, J. W., Perrotte, P., Inoue, K., Dinney, C. P., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-%CE%B1-mediated+Down-Regulation+of+Angiogenesis-related+Genes+and+Therapy+of+Bladder+Cancer+Are+Dependent+on+Optimization+of+Biological+Dose+and+Schedule%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Interferon-α-mediated Down-Regulation of Angiogenesis-related Genes and Therapy of Bladder Cancer Are Dependent on Optimization of Biological Dose and Schedule.</a> Clinical Cancer Research. 5, 2726-2734 (1999).</li>
<li>Yokoyama, T., Huard, J., Pruchnic, R., Yoshimura, N., Qu, Z., Cao, B., De Groat, W. C., Kumon, H., Chancellor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle-Derived+Cell+Transplantation+and+Differentiation+into+Lower+Urinary+Tract+Smooth+Muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Muscle-Derived Cell Transplantation and Differentiation into Lower Urinary Tract Smooth Muscle.</a> Urology. 57, 826-831 (2001).</li>
<li>Chan, E., Patel, A., Heston, W., Larchian, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Orthotopic+Models+for+Bladder+Cancer+Research%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">Mouse Orthotopic Models for Bladder Cancer Research.</a> BJU International. 104, 1286-1291 (1988).</li>
<li>Russell, P. J., Jelbart, M., Wills, E., Singh, S., Wass, J., Witherspoon, J., Raghavan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+a+new+human+bladder+cancer+cell+line+showing+features+of+squamous+and+glandular+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of a new human bladder cancer cell line showing features of squamous and glandular differentiation.</a> Int. J. Cancer. 41, 74-74 (1988).</li>
<li>Ahlering, T. E., Dubeau, L., Jones, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+in+vivo+model+to+study+invasion+and+metastasis+of+human+bladder+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A new in vivo model to study invasion and metastasis of human bladder carcinoma.</a> Cancer Res. 41, 6660-6660 (1987).</li>
<li>Heaney, J. A., Omellas, E. P., Daly, J. J., Lin, J. C., Rout, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+growth+of+human+bladder+cancer+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Urol%22%5BJournal%5D)">In vivo growth of human bladder cancer cell lines.</a> Invest. Urol. 15, 380-380 (1978).</li>
<li>Hadaschik, B., Black, P., Sea, J., Metwalli, A., Fazli, L., Dinney, C., Gleave, M., So, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumor+inoculation+and+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumor inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU International. 100, 1377-1384 (2007).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

حقن الفأر جدار المثانة يسمح للزرع خلايا معينة في مناطق محددة من جدار المثانة. هذه التقنية لها تطبيقات واسعة لنماذج الماوس من مرض سرطان المثانة ، العضلات الملساء ، وبيولوجيا الخلايا الجذعية. بحكم التعريف ، وحقن الماوس جدار المثانة يسهل إدخال سرطان المثانة أو الخلايا الجذعية في مكان مثلي بحيث يمكن دراستها نموها والتمايز في سياق التشريحية ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية. في الواقع ، Dinney وآخرون. أول وصف لهذه التقنية من أجل دراسة مثلي سرطان المثانة الإنسان xenografts في الفئران عار...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> Isoflurane (Aerrane) </td><td> باكستر </td><td> NDC 10019-773-60 </td></tr><tr><td> الإبر قياس 29 أو 30 </td><td> هاميلتون </td><td> 7803-06 أو 7803-07 </td></tr><tr><td> 100 ميكروليتر حقنة </td><td> هاميلتون </td><td> 7656-01 </td></tr></tbody></table>

حقن المثانة الماوس الجدار

Mouse Bladder Wall Injection

حقن الفأر جدار المثانة هي تقنية مفيدة لدراسة الظواهر orthotopically المثانة ، بما في ذلك الخلايا الجذعية ، العضلات الملساء ، وعلم الأحياء السرطان. قبل البدء في الحقن ، يجب تنظيف المنطقة الجراحية بالماء والصابون ومحلول مطهر. يجب تعقيم المعدات الجراحية قبل الاستخدام ، وبين كل حيوان. يتم وضع كل الماوس تحت التخدير isoflurane استنشاقه (2-5 ٪ للتحريض ، 1-3 ٪ للصيانة) والمثانة لها كشفها بواسطة صنع شق خط الوسط في البطن مع المقص. إذا كانت المثانة ممتلئة ، فمن ضغط جزئيا لطيف الضغط بين إصبعين. يتم حقن intramurally تعليق خلية من الاهتمام في جدار القبة المثانة باستخدام إبرة قياس 29 أو 30 و 1 سم أو أصغر المحاقن. ثم يتم إغلاق الجرح باستخدام مقاطع الجرح وسمح لاسترداد الماوس على لوحة الاحتباس الحراري. حقن المثانة الجدار هو أسلوب المجهرية الدقيقة التي يمكن أن يتقن مع الممارسة.

حقن الفأر جدار المثانة هو نهج مفيد لدراسة orthotopically المثانة الخلايا الجذعية وعلم الأحياء السرطان. يمكن أن يتقن هذه الطريقة المجهرية الدقيقة مع تقنية دقيقة والممارسة.

يعد الحقن في جدار مثانة الفأر تقنية مفيدة لدراسة ظواهر المثانة في موقعها التشريحي، بما في ذلك بيولوجيا الخلايا الجذعية والعضلات الملساء والسرطان.

الهدف العام من هذا الإجراء هو إدخال الخلايا في مناطق محددة من جدار المثانة. ويتم تحقيق ذلك عن طريق إجراء شق بطني أولاً لكشف المثانة. وتتمثل الخطوة التالية من الإجراء في إدخال شطبة الإبرة داخل جدار المثانة.تتمثل الخطوة النهائية من الإجراء في دفع مكبس المحقنة لحقن الخلايا المستهدفة في جدار المثانة. ويُستدل على نجاح زرع الخلايا بتكون فقاعة محددة الموضع جيداً لا تسرب السوائل وتظل مستقرة في الحجم. وتكمن الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنةً بالطرق الحالية، مثل التلقيح عبر الإحليل للخلايا في الفئران، في أنها تتيح توجيه مكان استقرار الخلايا داخل المثانة.يعد العرض المرئي لعضلة المصرة أمراً بالغ الأهمية نظراً لصعوبة تعلم خطوات الحقن. كما أن معرفة الزاوية الصحيحة وموضع دخول الإبرة إلى المثانة أمر أساسي لنجاح هذه التقنية. اختر عمر وجنس وسلالة الفئران بناءً على احتياجات التجربة هنا.تُستخدم فئران تتراوح أعمارها بين 8 إلى 12 أسبوعاً؛ ابدأ بتنظيف سطح طاولة الجراحة بالصابون والماء. بعد ذلك، امسح سطح طاولة الجراحة بمناديل مبللة أو مناديل مطهرة. يجب تعقيم الأدوات الجراحية في جهاز التعقيم (autoclave) قبل الجراحة.امسح الأدوات بـ 70%ethanol قبل الاستخدام مباشرة، وأعد تعقيمها باستخدام معقم الخرز الساخن بين العمليات الجراحية الفردية. قم بتنظيف حقنة Hamilton سعة 100 microliter متصلة بإبرة مقاس 30 gauge عن

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

وهذا الفيديو شرح طرق للحث على transurethrally التهابات المسالك البولية والماوس تحديد مدى الإصابات الناجمة عن ذلك.

عبر الاحليل تحريض العدوى ماوس المسالك البولية

قياس المثانة هي تقنية فعالة لقياس وظيفة المثانة من الحيوانات...

استعمال قياس المثانة في القوارض الصغيرة: دراسة في Chemosensation المثانة

إنشاء ورم المثانة orthotopic نموذج لتقييم آثار antitumor من سارنا تسليم intravesically ونمو الورم الرصد بواسطة الموجات فوق الصوتية والتصوير bioluminescent.

ورم في المثانة Orthotopic النموذجي وتقييم المعالجة سارنا داخل المثانة

المصدر: أوبراين، في. بي.، وآخرون، عدوى متكررة في المسالك البولية بسبب التعرض للمثانة المهبلية في الفئران . تجربة J. Vis. (2020)يوضح هذا الفيديو استخدام المجهر الإلكتروني الماسح لتصوير استعمار البكتيريا وتفاعلات المضيف مع الممرض في ظهارة المثانة لنموذج فأر مسبق العدوى.

تحضير نسيج مثانة الفئران لرؤية العدوى البكتيرية

في هذا الفيديو ، نصف عملية زرع تقويم العضيات لورم المثانة المزروعة في مثانة الفئران لدراسة دور بيئة الأعضاء في تطوير الأورام.

النموذج العضوي لورم المثانة: طريقة لزرع عضيات المثانة في مثانة الفئران المتلقية

في هذا الفيديو ، نصف الإجراء داخل المثانة لتوصيل الخلايا السرطانية إلى مثانة نموذج الفأر. يساعد هذا الإجراء في إنشاء نموذج ورم المثانة التقويمي الذي يمكن استخدامه لتطوير استراتيجيات علاجية.

نمذجة ورم المثانة التقويمي في نموذج الفأر: إجراء للإعطاء داخل المثانة للخلايا السرطانية في مثانة الفئران

تقنية أنشئت لتطعيم الغازية مثلي xenografts سرطان المثانة الأولية يتطلب فتح البطن وتعبئة المثانة. هذا الإجراء يلحق قسط كبير من المراضة على الفئران، هي صعبة وتستغرق وقتا طويلا من الناحية الفنية. لذا قمنا بتطوير الدقة العالية، عن طريق الجلد باستخدام نهج توجيه الموجات فوق الصوتية.

مؤسسة المناظير الفئران مثلي المثانة Xenografts

ما يقرب من 3-8 ملايين شخص في الولايات المتحدة يعانون من متلازمة ألم التهاب المثانة الخلالي / المثانة (IC / BPS)، وهي حالة تتميز المنهكة في جزء من آلام الحوض. من أجل دراسة المساهمات الجهاز العصبي إلى حالة، يتم استخدام نموذج الفسيولوجية للألم المثانة البولية في الفئران والجرذان.

الردود المثانة البولية انتفاخ مستدعى الحشوي الحركي نموذجا لألم المثانة في الفئران

يصف هذا البروتوكول جيل من الفئران أورام المثانة مثلي في الإناث C57BL / 6J الفئران ورصد نمو الورم.

والفئران مثلي المثانة نموذج ورم والورم نظام لكشف

تقطير transurethral هو إجراء صعبة ولا يوصف كذلك في الأدب. والهدف من هذه المخطوطة لوصف تقنية لإدخال قسطرة لتسليم إينترافيسيكال من السوائل المحتوية على المواد النشطة في المثانة و/أو البروستاتا في الفئران الذكور البالغين ترانسوريثرال.

تقطير ترانسوريثرال الداخلي في الماوس الذكور البالغين

تعلم تقنية الحقن الجراحي الدقيق في جدار المثانة الفأرية لدراسة الخلايا الجذعية وعلم الأورام. تتيح هذه الطريقة توجيه مكان زراعة الخلايا بدقة عالية مقارنة بالتقنيات التقليدية.

حقن المثانة الماوس الجدار

استكشف المزيد من الفيديوهات