Name: طريقة بسيطة لقياس حساسية الايثانول في الذباب (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-19T17:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 15 s
Description: تعلم قياس حساسية الإيثانول في ذباب الفاكهة Drosophila melanogaster باستخدام اختبار فقدان رد الفعل التصحيحي. تُستخدم هذه الطريقة لمقارنة سلالات مختلفة ودراسة التسامي الكحولي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نشكر Aylin رودان لقراءة نقدية للمخطوطة ، وأعضاء في مختبر للمناقشة مفيدة. ويدعم هذا البحث من قبل المعاهد الوطنية للصحة ، R01AA019526.

1. إنشاء غرفة التعرض <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع المكونات فيال في نصف باستخدام شفرة حلاقة. بدلا من ذلك ، استخدام كرات القطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دفع نصف قنينة المكونات ، أو القطن الكرة ، والجزء السفلي من قنينة الغذائية لجعل سطح أملس التي لن تتعثر فيها الذباب </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا جعل التعرض غرف متعددة ، تأكد من أن المكونات الغذائية القارورة ويستغرق نفس الحجم في كل من المجلسين. ويمكن لعلامة على جانب القنينة تسهيل ذلك. </li></ol> 2. تعريض الذباب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 8 جمع الذباب من جنس واحد ، والعمر 1-5 أيام ، في اليوم قبل التعرض الى قارورة الغذائية العادية دون الخميرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التسمية عليها في القانون ، بحيث يتم أعمى المجرب إلى التركيب الوراثي الفعلي / السلالة المستخدمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الذباب الثمانية في الدوائر التي تعرض تنصت. لا تخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة كمية صغيرة من صبغة الطعام ، مثل حمض الأزرق 9 ، إلى إيثانول برهان 200 لجعله مرئيا بسهولة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معطف قاع القارورة المكونات ، أو القطن الكرة ، مع الايثانول مل 0.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تضاف المكونات الإيثانول في قنينة التعرض. تأكد من أن يواجه الكحول في القارورة ، وليس تجاه جدار القارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء العد حتى الموقت. </li></ol> 3. سجل الإيثانول التي يسببها التسمم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وبدأت كل دقيقة بعد الموقت ، الاستفادة من غرفة التعرض على مقاعد البدلاء لجفل الذباب ومراعاة منها لمدة عشر ثوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل عدد من الذباب ثابتة لكل دقيقة. الذباب هي ثابتة اذا لم يتمكنوا من النزول ظهورهم ، البقاء في مكان واحد ، أو يهتز بسرعة أجنحتها طوال كامل الفترة الثانية عشرة للمراقبة. تعتبر ذبابة الأخير ثابتة ، لأن الغالبية العظمى من هؤلاء الذباب هي ثابتة بين فترات من حركة الجناح السريع. الذباب ليس ثابتا اذا كان بامكانهم النزول ظهورهم والابتعاد و / أو حتى جدار القارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انتهاء محاكمة التعرض عندما يتم تسجيل 4 أو أكثر من الذباب وثابتة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل الذباب ، والسماح للهواء الغرفة من التعرض لإعادة استخدامها في وقت لاحق. </li></ol> 4. تحديد الوقت المناسب لتهدئة 50 ٪ الوقت لتخدير 50 ​​٪ (ST50) هو وقت بعد بدء التعرض الايثانول عند أربعة من الذباب ولا تزال هناك ثمانية ثابتة. يتم تحديد هذه على النحو التالي : إما : القياس الدقيقة الاولى عندما تماما أربعة الذباب هي ثابتة. أو : إذا كان أقل من أربعة الذباب (Y1) هي ثابتة عند نقطة زمنية واحدة (X دقيقة) ، وأكثر من أربعة (Y2) في نقطة القياس في المرة القادمة (الدقيقة X +1) ، ثم دس في ST50 خطيا باستخدام الصيغة : ST50 = (4 -- Y1) / (Y2 -- Y1) + X 5. تكرار التعرض لتحديد التسامح تعريض الذباب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد ST50 (بالوزن) للسيطرة سلالة من النوع البري المستخدمة في تجربتك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كشف المجموعات التجريبية من الذباب إلى إيثانول على النحو المبين أعلاه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس ST50 بهم (1) ، لكنها ما زالت تعرض حتى تصل في الوقت 2X ST50 (بالوزن). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الذباب العودة الى قارورة فارغة الغذائية ، وعقد لمدة 4 ساعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة فضح الذباب ، وتحديد ST50 (2) من التعرض 2. </li></ol> تحديد التسامح التسامح في حساب ٪ ك (ST50 (2) / ST50 (1) -- 1) X100. 6. ممثل النتائج : هو موضح هنا ، هي بعض النتائج التي حصلنا عليها مع ممثل 6-8 قارورة من الذباب في التركيب الوراثي والجرعة. إذا كان الخطأ هو معيار الخاص أكبر بكثير ، ثم حدثت مشكلة منهجية احتمالا. تأكد من أن يواجه الايثانول في غرف التعرض ، وبأن الدوائر هي نفس الحجم. <img src="/files/ftp_upload/2541/2541fig1.jpg" alt="الشكل 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 1"> الذباب يتعرض الاستجابة للجرعة الرقم 1. منحنى نوع البرية لنسب متزايدة من الايثانول. تعرضت ثماني قنينات من الذباب في جرعة والجنس. الذباب الذكور والإناث تظهر ST50 نفسه في كل جرعة (P&gt; 0.22 ، 2 - طريقة ANOVA) ، بينما عبر جرعات ST50 يقلل بشكل ملحوظ مع زيادة الجرعة الإيثانول (P &lt;0.001). يمكن أن نلاحظ أن أكثر من الذباب المزدحمة زجاجات يكون أصغر بكثير من تلك الزجاجات من الأصحاء ، وهذا الاختلاف يمكن أن تؤثر على حجم ST50. البذور كل زجاجة مع الإناث 15-20 زرع لمدة 1-2 أيام للحصول على كثافة اليرقات الأمثل للزجاجة الواحدة. <img src="/files/ftp_upload/2541/2541fig2.jpg" alt="الشكل 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 2"> الشكل 2. تعريض الذباب إما الايثانول 90 ٪ ، أو 100 ٪ يستنسخ الموصوفة سابقا الايثانول المقاومة التي يسببها الأبيض rabbit1 (ANOVA ع &lt;0.001 ، 2 - الطريقة) mutation2. <img src="/files/ftp_upload/2541/2541fig3.jpg" alt="الشكل 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 3"> الشكل 3. كرر التعرض لالإيثانول بنسبة 100 ٪ ، متباعدة عن طريق الانتعاش فاصل 4 ساعات ، يؤدي إلى زيادة كبيرة في ST50 بعد التعرض الثاني (P &lt;0.001 ، ر الاقترانللتجارب). علما أن تعرضت لمدة 24 دقيقة الذباب خلال أول تعرض (الموافق لقد مرتين على ST50 غ). ولم تعرض لأقصر فترة من الوقت (12 دقيقة) لا تسبب زيادة كبيرة في ST50 عند التعرض إعادة (لا تظهر البيانات).

<ol><li>Bainton, R. J., Tsai, L. T. -Y., Singh, C. S., Moore, M. S. Curr. Biol. 10, 187-194 (2000).</li>
<li>Rothenfluh, A., Threlkeld, R. J., Bainton, R. J., Tsai, L. T. -Y. Cell. 127, 199-211 (2006).</li>
<li>Devineni, A. V., Heberlein, U. Curr. Biol. 19, 2126-2132 (2009).</li>
<li>Scholz, H., Ramond, J., Singh, C. S., Heberlein, U. Neuron. 28, 261-271 (2000).</li>
<li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A., Tanouye, M. A., Phelan, P. Semin. Cell Dev. Biol. 17, 31-41 (2006).</li>
<li>Feany, M. B., Bender, W. W. Nature. 404, 394-398 (2000).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

في هذا العرض ، وقد أوجزنا طريقة بسيطة لتحديد الإيثانول التي يسببها التسمم بناء على فحوصات السابقة التي وصفها Bainton آخرون. 2000 1 ، وRothenfluh آخرون. 2006 2. منذ يرتبط الكحول بفعل التخدير مع تفضيل شرب الكحول 3 ، هذا الاختبار هو ذات الصلة لدراسة الاضطرابات الناجمة عن تعاطي الكحول. ويستند في وصفها على مقايسة باغت السلبية الناجمة عن انجذاب بالجاذبية ، وكيف أن التعرض للكحول يتداخل مع هذه الاستجابة الفطرية. قبل البدء في التعرض للتأكد من كل ما تبذلونه من الذباب تظهر استجابة طبيعية لجفل من هذا القبيل ، أي بعد التنصت باستمرار على الذباب في قارورة الغذاء ، فإنها ينبغي أن يتحرك كل من القاع في غضون فترة زمنية 10 الملاحظة الثانية. أمثلة من الذباب وجود انجذاب بالجاذبية السلبية تشمل خفض المسوخ الاستيلاء الانفجار حساسة 5 ، والتي تعاني من نقص تنقل الذباب الناجم عن تنكس الخلايا العصبية الدوبامين 6. على الرغم من أن الفحص وصف بسيط نسبيا ، المتغيرين تستحق أكبر قدر من الاهتمام لضمان تحقيق نتائج يمكن استنساخه. أولا ، يجب أن تكون كل قارورة من التعرض لنفس الحجم. وهذا يشمل التأكد من أن الجزء السفلي من قنينة تحتوي على نفس الحجم من المواد الغذائية الكرة فيال المكونات / القطن + ، فضلا عن إدراج المكونات التي تحتوي على الإيثانول على مسافة واحدة مقابل كل قنينة. ويمكن استخدام قارورة فارغة تماما لهذا الاختبار ، لكنه يؤدي إلى قيم ST50 أطول ، وانخفاض الإنتاجية للمقايسة. هذا الاختبار هو أيضا مناسبة لتحديد كمية من الذباب التسامح عند التعرض تطوير الإيثانول تكرار. وينبغي النظر في عدد من المتغيرات عند القيام التعرض للتكرار. الأول ، هو موضح هنا الفاصل الزمني بين التعرض إلى 4 ساعات. يمكن تغيير هذا المتغير ، ولكن من المستحسن ألا يكون أقل من 2 ساعة ، لضمان إزالة الألغام من الايثانول من التعرض الأولى. انظر شولتس وآخرون. 2000 4 لحركية التنمية التسامح الإيثانول والاضمحلال. المتغير الثاني هو أن تنظر إلى مدة التعرض الأولى. هذا ومن الواضح أن تكون هي نفسها لمراقبة والذباب التجريبية. ولكن هذا قد لا يؤدي في نفس المقدار من الايثانول تسليمها الى كل من هذه السلالات يطير. الذباب مخدرا استيعاب المزيد من الايثانول من الذباب النشط 2 ، لذا فإن السلالة التي sedates في وقت سابق قد تتلقى جرعة أعلى من سلالة المسكنة في وقت لاحق ، وبالتالي وضع مزيد من التسامح بسبب جرعة أولية أعلى. اننا نحذر بشدة القارئ عند مقارنة تطور سلالات من التسامح التي تظهر الاختلافات في ST50 الأولي (1). في مقايسة وصفنا هنا هو أداة مفيدة في تحديد بسهولة وبتكاثر الذباب الاستجابات السلوكية للكحول.

<table><tbody><tr><td>قوارير التعريض</td><td>www.flystuff.com</td><td>32-116</td><td></td></tr><tr><td>سدادات</td><td>www.flystuff.com</td><td>49-102</td><td></td></tr><tr><td>Acid Blue 9</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>861146</td><td></td></tr></tbody></table>

طريقة بسيطة لقياس حساسية الايثانول في الذباب

A Simple Way to Measure Ethanol Sensitivity in Flies

الجرعات المنخفضة من الذباب تسبب الايثانول ليصبح مفرط ، في حين جرعات عالية من المسكنة. ويرتبط حساسية الإيثانول الناجم عن التخدير من سلالة يطير مع إعطاء أفضلية الايثانول أن سلالة ثانية ، وبالتالي التخدير هو مقياس ذات أهمية كبيرة لدراسة علم الوراثة من الاستجابات الكحول والشرب. نحن يبرهن على وجود طريقة بسيطة للكشف عن الذباب لالإيثانول وقياس آثاره المسكرة. يمكن للمقايسة وصفنا تحديد الحساسية الحادة ، فضلا عن التسامح الإيثانول الناجم عن التعرض للتكرار. أنها لا تتطلب إعداد تشارك من الناحية الفنية ، وبالتالي يمكن تطبيقه في أي مختبر مع الأدوات الأساسية لثقافة الطيران.

وفحص بسيط لقياس الآثار المسكنة للإيثانول على<em&gt; ذبابة الفاكهة</emيوصف&gt; الذباب ، واستنادا إلى فقدان المنعكس التقويمي.

تسبب الجرعات المنخفضة من الإيثانول حالة من فرط النشاط لدى الذباب، بينما تؤدي الجرعات العالية إلى التخدير. وتعتمد الحساسية تجاه التخدير الناجم عن الإيثانول في سلالة معينة من الذباب...

مرحباً، أنا توماس مابلز من مختبر الدكتور أدريان روثن في قسم الطب النفسي بمركز جامعة تكساس ساوث ويسترن الطبي في دالاس. سأقوم اليوم بشرح إجراء بسيط لتحديد مدى حساسية الذباب للتخدير بالإيثانول. يعتمد هذا المقايسة على فقدان الذباب لمنعكس التصحيح والقدرة على المشي بعد التعرض للإيثانول.يمكن استخدام هذا المقياس لتحديد الاختلافات في الحساسية للكحول بين سلالات مختلفة من ذباب الفاكهة (drosophila) والطفرات. كما يمكننا استخدام هذا الاختبار لتحفيز التحمل في الذباب، ويُقصد بالتحمل هنا استجابة منخفضة للكحول بعد التعرض المتكرر. لنبدأ الآن.لهذه التجربة، ستحتاج إلى الأنابيب التالية. مع ثماني ذبابات فاكهة، من تلك التي جمعتها قبل يوم أو يومين. يمكنك إجراء التعريضات باستخدام الذكور أو الإناث.ومع ذلك، يجب أن تحتوي كل قارورة على جنس واحد فقط. قارورة غذاء فارغة لا تحتوي على ذباب، وشفرة حلاقة، وسدادتان للقوارير مصنوعتان من مادة قطنية. إذا لم تتوفر لديك هذه الأنواع من السدادات، يمكنك أيضاً استخدام كرات قطنية، وماصة دقيقة سعة 1000 microliter مع رؤوس مخصصة لها، وإيثانول بتركيز 200 proof يحتوي على صبغة غذائية يمكن الحصول عليها من أي متجر بقالة، ومؤقت زمني.أول ما يجب القيام به هو تجهيز غرفة تعريض، حيث سنقوم بتعريض الذباب للإيثانول ومراقبة حركيتها. ولإنشاء هذه الغرفة، ابدأ بقطع سدادة الأنبوب إلى نصفين باستخدام شفرة حلاقة، ثم ادفع أحد النصفين إلى قاع الأنبوب بحيث يغطي الغذاء.يؤدي ذلك إلى تكوين سطح مستوٍ غير لزج لتمشي عليه الذباب. في حال استخدام كرة قطنية، اضغط عليها لأسفل بسلاسة وحاول جعلها أقل وبرية قدر الإمكان حتى لا يعلق الذباب في خيوط القطن. إذا كنت تقوم بإعداد غرف متعددة، فتأكد من أن الغذاء وسدادة الأنبوب يشغلان نفس القدر من المساحة في كل غرفة.يضمن ذلك تعرض الذباب في كل حجرة إلى الإيثانول بنفس الحجم. ومع الممارسة، يصبح من السهل تعريض ثلاث قوارير من الذباب بشكل متوازٍ. وبمجرد تجهيز حجرات التعريض، يمكننا الآن تعريض الذباب للإيثانول.أولاً، انقل قارورة تحتوي على ثماني ذبابات إلى غرفة تعريض، ثم أغلق الغرفة باستخدام السدادة الخاصة بالقارورة التي كانت تحتوي على الذبابات في الأصل. بعد ذلك، اسحب بالماصة 500 µL من الإيثانول المصبوغ بالتركيز الذي اخترته وضعها على أحد طرفي سدادة قارورة قطنية. ثم استبدل سدادة غرفة التعريض بالسدادة المطلية بالإيثانول، مع إدخال الطرف المطلي بالإيثانول داخل الغرفة.ابدأ تشغيل المؤقت فور إضافة السدادة المغطاة بالإيثانول إلى غرفة التعريض. يساعد الصبغ الموجود في الإيثانول في ضمان توجيه جهة الإيثانول نحو غرفة التعريض وليس نحو جدار القارورة. وهذا أمر بالغ الأهمية خاصة عند استخدام كرات القطن بدلاً من سدادات buzz، لأن أي جانب من كرة القطن يمكن أن يواجه القارورة.في هذه التجربة، نستخدم كحولاً بتركيز 100%، والذي ينتشر الآن في غرفة التعرض حيث تستنشقه الذباب من الهواء. سنقوم، في كل دقيقة تلي إضافة السدادة المطلية بالإيثانول إلى غرفة التعرض، بحساب عدد الذباب الذي أصبح ساكناً، وهو ما يعني عدم قدرتها على تقليب نفسها أو المشي. وكلما ظلت الذباب متحركة لفترة أطول، زادت مقاومتها عند كل فاصل زمني مدته دقيقة واحدة.قم بإثارة الذباب عن طريق النقر على الحجرة فوق المنضدة للتأكد من أن جميع الذباب القادر على الحركة يتحرك بالفعل. راقب الذباب لمدة 10 ثوانٍ بعد النقر لمنحه الوقت لبدء الحركة أو التقليب لكل فاصل زمني مدته دقيقة واحدة. قم بتدوين عدد الذباب الساكن من بين الذباب الثمانية في بداية التجربة.سوف تندفع معظم الذباب بسرعة إلى أعلى جانب القارورة بعد إفزاعها. وبعد حوالي ست دقائق من التعرض لـ 100% ethanol، تبدأ في التحرك ببطء وأحياناً بشكل غير منتظم بحلول الدقيقة 12. وستكون معظم الذباب ساكنة، حيث تكون غير قادرة على المشي أو تقليب نفسها عند استلقائها على ظهورهـا.يجب إحصاء الذباب القادر على تعديل وضعيته والمشي فقط على أنه ذباب متحرك، بينما يجب إحصاء الذباب الذي يكتفي بتحريك أرجله أو أجنحته في مكانه على أنه ذباب ساكن. كما يجب إحصاء الذباب الذي يبقى على ظهره طوال فترة الملاحظة على أنه ساكن، لأن عدم قدرته على تعديل وضعيته تعد علامة على التسمم. وبالمثل، يجب إحصاء الذباب الذي يهز أجنحته بقوة طوال فترة الملاحظة البالغة عشر ثوانٍ على أنه ساكن، حتى لو تغير موقعه؛ حيث أن الغالبية العظمى من هذا الذباب تظل ساكنة بين فترات الحركة السريعة للأجنحة.وباختصار، تُعتبر الذباب القادرة على تقليب نفسها والمشي ذباباً متحركاً، بينما يُعتبر الذباب غير القادر على التقليب، والذي يحرك أرجله وأجنحته في مكانها أو يهز أجنحته بسرعة، ذباباً ساكناً. وإذا طبقنا هذه القواعد، نلاحظ أن عدداً أكبر من ذباب النوع البري يصبح ساكناً مع زيادة دقائق التعرض لأبخرة الإيثانول. والقيمة التي يستخدمها هذا الفحص لقياس الحساسية للإيثانول هي متوسط وقت التخدير أو MST.نُعرّف زمن السكون المتوسط (MST) بأنه عدد دقائق التعرض للإيثانول اللازمة لتصبح أربع من أصل ثماني ذباب في غرفة التعرض في حالة سكون. يتم تحديد هذه القيمة بسهولة إذا كان هناك أربع ذباب بالضبط في حالة سكون عند فترة ملاحظة محددة. على سبيل المثال، إذا كانت أربع ذباب بالضبط في حالة سكون بعد 11 دقيقة من التعرض، فإن قيمة MST تكون 11.إذا كانت أربع ذباب بالضبط في حالة سكون بعد 11 دقيقة من التعرض، وظل الوضع كما هو حتى الدقيقة 12، يتم اعتماد القيمة الأولى لأنها تمثل الوقت الذي وصل فيه الذباب لأول مرة إلى حالة السكون (ST). أما إذا لم يكن هناك أربع ذباب في حالة سكون عند فترة ملاحظة محددة، فمن الضروري إجراء استيفاء خطي (linear interpolation) للوقت الذي أصبح عنده أربع ذباب في حالة سكون. على سبيل المثال، إذا قفز عدد الذباب الساكن من ثلاثة إلى خمسة، بين الدقيقة التاسعة والعاشرة من التعرض، يمكن تحديد أن متوسط وقت السكون (MST) هو 9.5 عن طريق التمثيل البياني. وتظهر البيانات التالية التي جُمعت باستخدام هذا المقايسة أن هذا التصميم التجريبي يعد طريقة دقيقة لقياس الحساسية للإيثانول.تم استخدام عدد (N) يتراوح بين ست إلى ثماني قارورات في التجارب التالية، وهو ما تمت الإشارة إليه ضمن الأعمدة. يبلغ متوسط وقت البقاء (MST) للذباب من النوع البري الذكور المعرض لـ 100%Ethanol حوالي 11 دقيقة مع خطأ معياري منخفض. إن التباين اليومي منخفض وغير دال إحصائيًا في الغالب، ولكننا لا نزال نوصي بقياس العينات التجريبية والضوابط بالتوازي في اليوم نفسه.يُرجى ملاحظة أيضاً أن الذباب الذي تعرض للمادة في اليوم A واليوم B ليسوا هم أنفسهم الأفراد ذاتهم. هؤلاء أشقاء يمثلون نفس السلالة الجينية؛ حيث لم تظهر ذباب الذكور والإناث المعرضة لـ 100%Ethanol أي اختلاف في MST. ومع ذلك، فإننا نوصي بالالتزام بجنس واحد.إذا قمنا بتعريض ذباب الذكر والأنثى لجرعات متزايدة من الإيثانول، نحصل على منحنى استجابة للجرعة يظهر انخفاضاً ذا دلالة إحصائية في MST كدالة لزيادة تركيز الإيثانول. كما يعيد هذا الاختبار إنتاج الأنماط الظاهرية المنشورة سابقاً والتي تم قياسها باستخدام إعداد تبخير إيثانول أكثر تعقيداً؛ حيث أظهر الذباب الذي يحمل طفرة right rabbit one زيادة ملحوظة في MST. وقد لوحظت هذه الزيادة عند تركيز 100% وكذلك 90% من الإيثانول.باستخدام هذا المقاييس، يمكننا أيضاً تحفيز وقياس تحمل الإيثانول في الذباب. ويُعرّف التحمل بأنه انخفاض في الاستجابة للكحول بعد التعرض المسبق له لتحفيز هذا التحمل. قم بتعريض قارورة من الذباب للإيثانول لمدة تعادل ضعف قيمة MST الخاصة بها تقريباً.على سبيل المثال، نقوم بتعريض ذكور سلالة Berlin البرية هذه إلى إيثانول بتركيز 100% لمدة 24 دقيقة. وبعد تعريضها، يتم النقر بلطف لإعادة الذباب الثمانية إلى قارورة الغذاء الخاصة بها حيث تُترك للتعافي لمدة أربع ساعات. قم بتسجيل زمن الصمود في حالة التخدير (MST) الأصلي للذباب على القارورة الخاصة بها بعد أربع ساعات من التعافي، ثم أعد تعريض نفس الذباب إلى نفس الجرعة من الإيثانول وسجل زمن الصمود في حالة التخدير (MST) الثاني لها.كما يتضح في هذا الرسم البياني، فإن زمن التخدير (MST) في التعرض الثاني للإيثانول أعلى بكثير من زمن التخدير في التعرض الأول، مما يشير إلى أن الذباب قد اكتسب تحملاً للتأثيرات المهدئة للإيثانول. ويتم حساب مقياس التحمل عن طريق قسمة زمن التخدير الثاني لمجموعة معينة من الذباب في القارورة على زمن التخدير الأول لنفس الذباب ثم طرح واحد؛ وتُعبر هذه القيمة عن نسبة التحمل المئوية، والتي تبلغ في حالتنا حوالي 50%. شكراً للمشاهدة وبالتوفيق في تجربتكم.

a-simple-way-to-measure-ethanol-sensitivity-in-flies

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

وقد برزت ذبابة الفاكهة كنظام نموذج كبير للتشريح الأسس الخلوية والجزيئية من الاستجابات السلوكية للكحول. هنا نقدم بروتوكول لجمع البيانات حساسية الكحول في سياق الإيقاعية التي يمكن تطبيقها بسهولة على التجارب الأخرى ومناسبة تماما للبحوث الجامعية.

وFlyBar: إدارة الكحول الذباب

المقايسات المباشرة لقياس حساسية الإيثانول والتسامح السريع في ذبابة الفاكهة تسهل استخدام هذا الكائن الحي النموذجي للتحقيق في هذه السلوكيات المهمة المتعلقة بالإيثانول. هنا ، يتم وصف اختبار بسيط نسبيا وقابل للتطوير لقياس حساسية الإيثانول والتسامح السريع في الذباب.

و، الفحص السلوكية قابلة غير مكلفة لقياس الإيثانول التخدير الحساسية والتسامح السريع في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

C. elegans هو نموذج مفيد لدراسة تأثيرات الإيثانول على السلوك. نقدم اختبارًا سلوكيًا يقيس تأثيرات الإيثانول على سرعة الحركة من الديدان الزاحفة؛ يمكن قياس كل من الحساسية الأولية وتطور التسامح الوظيفي الحاد للإيثانول مع هذا الاختبار.

على الفحص لقياس آثار الإيثانول على سرعة تحرك من<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

نحن تصف بروتوكول لإحداث مجزية وnonrewarding الخبرات في ذباب الفاكهة (ذبابة الفاكهة) باستخدام استهلاك الإيثانول الطوعي كمقياس للتغييرات في دول مكافأة.

طريقة بسيطة لقياس التغيرات في السلوك المكافأة التماس طريق<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

اختبار CApillary FEeder (CAFE) هو طريقة بسيطة وصديقة للميزانية وموثوقة للغاية للتحقيق في الآليات الكامنة وراء تناول الطعام. يستخدم مع الكائن الحي النموذجي الجيني متعدد الاستخدامات ذبابة الفاكهة السوداء ، ويوفر وسيلة قوية لاكتساب رؤى جديدة حول الآليات التنظيمية لتناول الطعام.

الشعيرات الدموية المغذية الفحص يقيس كمية الطعام في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

تم تصميم الطرق الحالية لقياس حساسية الكحول في دروسوفيلا لاختبار مجموعات من الذباب. نحن نقدم بسيطة، منخفضة التكلفة، وعالية الإنتاجية قياس لتقييم حساسية حساسية التأنق الكحول في أعداد كبيرة من الذباب واحد. لا تتطلب الطريقة أدوات متخصصة ويمكن إجراؤها في أي مختبر باستخدام مواد مشتركة.

طريقة عالية الإنتاجية لقياس وقت تقس الكحول من الكلينوفيلا الفردية

يقيس قياس Flypub السلوكيات التي تعرضها ذبابة الفاكهة Drosophila melanogaster تحت تأثير الإيثانول. يمكن أن يتقن الفحص بسهولة من قبل المجربين على جميع المستويات وتطبيقها على مختلف المحفزات المتبخرة ، مما يسهل تعاطي المخدرات ودراسات الإدمان.

Flypub لدراسة الإيثانول الناجم عن تثبيط السلوكية والتوعية

والشعيرية والتعامل مع الاختبارات Capellini من البراعة forepaw الاستفادة من الميل الطبيعي للالقوارض لمعالجة المواد الغذائية باستخدام forepaw ماهرا والحركات أرقام. وأثناء التعامل مع الحيوانات شريط فيديو قصير من خيوط المعكرونة الجافة غير مطبوخة. بطء تشغيل الفيديو الاقتراح يسمح لتقدير حجم التعديلات forepaw.

والشعيرية والتعامل مع الاختبارات Capellini : تدابير كمية بسيطة من وظيفة forepaw حاذق في الجرذان والفئران

الفئران والجرذان ، وذلك بسبب الحذر بهم الفطرية ، في البداية بطيئا في استهلاك الغذاء الرواية ، ولا سيما في مكان الرواية. ويمكن بسهولة أن تقاس هذه hyponeophagia في المختبر ، على الرغم من الحيوانات المختبرية هي اقل بكثير من القلق من نظرائهم...

Hyponeophagia : قياس القلق في الماوس

وهناك طريقة لتحديد مسار الوقت للتركيز الإيثانول في أدمغة الفئران من خلال الإيثانول فعال يوصف الإدارة الذاتية. يتم استخدام اللوني للغاز مع الكشف عن تأين اللهب لتحديد الايثانول في عينات ديالة، لأنه لديه حساسية المطلوبة لكميات صغيرة التي يتم إنشاؤها.

Microdialysis من الإيثانول خلال فعال الإيثانول الإدارة الذاتية والايثانول تقرير بواسطة جهاز الكروماتوجرافي الغازي

تعلم قياس حساسية الإيثانول في ذباب الفاكهة Drosophila melanogaster باستخدام اختبار فقدان رد الفعل التصحيحي. تُستخدم هذه الطريقة لمقارنة سلالات مختلفة ودراسة التسامي الكحولي.

طريقة بسيطة لقياس حساسية الايثانول في الذباب

استكشف المزيد من الفيديوهات