Name: تقييم خصائص اشارة من الظهارة الأدمة خلال التنمية الجمجمة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-24T11:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: اكتشف تقنية زرع الأديم الظاهر لإنشاء أجنة كيميرية ودراسة التشكل الوجهي الجمجمي. تساعد هذه الطريقة الباحثين على فهم تفاعلات الأنسجة أثناء التطور الجنيني.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل DE018234 - R01 R01 وDE019638.

1. إعداد الأنسجة المانحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعد وسائل الإعلام والثقافة ، وصقل الزجاج الدبابيس ، وشحذ الإبر التنغستن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الجنين من قذيفة ، ويغسل في الجليد الباردة برنامج تلفزيوني. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الحقنة 10 مل و إبرة قياس 18 مل من 1.0 إزالة الزلال من نهاية وأشار من قشرة البيضة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل ثقب صغير في الجزء العلوي من الغلاف باستخدام مقص نقطة ، وقطع دائرية ثم فتح للكشف عن الجنين </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الرأس والمكان الى DMEM (المصل الحرة ، ودرجة حرارة الغرفة) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عملية تشريح الجبهية من الجنين (أو غيرها من الجهات المانحة مثل موقع عملية الفك العلوي أو الفك السفلي) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في هضم 2.4U / مل dispase في برنامج تلفزيوني على الجليد ل20mins </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغطية الأنسجة مع DMEM مع جيش صرب البوسنة 1 ٪ لوقف عملية الهضم </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الإبر التنغستن شحذ إلى الأديم الظاهر منفصلة ، اللحمة المتوسطة ، وneuroectoderm </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين الأنسجة الكسب غير المشروع في جيش صرب البوسنة DMEM 1 ٪ على الجليد حتى المضيفة مستعدة للزرع </li></ol> 2. إعداد المضيف <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعرض الجنين <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الحقنة 10 مل و إبرة قياس 18 مل من 1.0 إزالة الزلال من نهاية وأشار من قشرة البيضة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل ثقب صغير في الجزء العلوي من الغلاف باستخدام مقص نقطة. ضع قطعة من الشريط فوق الحفرة ، وقطع دائرية ثم فتح للكشف عن الجنين. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 به زوجا من الملقط ، فهم السلى وبلطف المسيل للدموع لإحداث الثقب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استدارة الرأس بوضع زوج من ملقط على العين اليمنى والضغط. في حين عقد رئيس مطرد ، واستخدام إبرة لإزالة التنغستن الأديم الظاهر المضيف لاستيعاب الكسب غير المشروع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الكسب غير المشروع إلى المضيف باستخدام ماصة الزجاج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> موقف الكسب غير المشروع لتحل محل الأديم الظاهر إزالتها. اضافة الى وجود دبوس الزجاج في كل زاوية من النسيج المطعمة يعلقون الكسب غير المشروع في المكان. دبابيس لجعل الزجاج ، وسحب أنبوب microcapillary إلى نقطة غرامة على مدى اللهب الكحول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان الشريط بإحكام خلال ثقب والعودة الجنين الى حاضنة لمدة مناسبة من الوقت لتحليلها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انظر أيضا : 9 </li></ol> 3. ممثل النتائج : لتقييم الوهم ، ينبغي جمع الأجنة ومعالجتها لتحليل توزيع المضيفة والمانحة الأنسجة. للكشف عن خلايا السمان ، المناعية باستخدام أجسام مضادة QcPN (الموصوفة في : 3) يعمل ، وللكشف عن خلايا فأر في التهجين الموقع على أقسام البارافين يستخدم 6. وينبغي أن يقتصر الخلايا المانحة للظهارة ، وينبغي أن يكون هناك أي دليل على أنسجة المانحة الوسيطة (الشكل 1). وجود خلايا المانحة المعزولة في اللحمة المتوسطة يدل على وجود الخلايا العصبية التي تلوث قمة سوف نخلط أي تفسير الشكلية نظرا لتأثير هذه الخلايا على العديد من جوانب التنمية الوجه (على سبيل المثال ، 10). مرة واحدة على اقتناع بأن تقنية خالية من الكسب غير المشروع هو تلويث اللحمة المتوسطة ، ويمكن استخدام مزيد من التدابير نتائج المورفولوجية أو الجزيئي لتقييم الوهم. لأغراضنا ، اكتشفنا وجود حمل خارج الرحم الغضاريف والعظام التي تتوافق مع الازدواجية في الفك العلوي التي يسببها الأنسجة المزروعة (الشكل 2) ، والتغيرات الجزيئية في الأنسجة الوسيطة ردا على المطعمة الأديم الظاهر (الشكل 3) 5،6. <img src="/files/ftp_upload/2557/2557fig1.jpg" alt="الشكل 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 1"> الشكل 1. تقييم الخيمرية يستخدم (أ) مكافحة QcPN تلوين للكشف عن خلايا في السمان السمان ، فرخ الوهم. لا يوجد أي دليل على تلطيخ في اللحمة المتوسطة. يستخدم (B) في الموقع التهجين للكشف عن التعبير النصوص B2 شرط في الماوس الفرخ الوهم. ويقتصر التعبير على الأديم الظاهر تضم الكسب غير المشروع. <img src="/files/ftp_upload/2557/2557fig2.jpg" alt="الشكل 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 2"> الشكل 2. تلوين ثلاثي الألوان يظهر ازدواجية هيكل عظمي الفك العلوي في خيمر السمان ، الفرخ (A) و (B) الوهم الماوس الفرخ. <img src="/files/ftp_upload/2557/2557fig3.jpg" alt="الشكل 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 3"> الشكل 3 ، والأديم الظاهر regultes التعبير الجيني في اللحمة المتوسطة. (أ) عادي Bmp7 التعبير في اللحمة المتوسطة من جنين الفرخ (المشعة في الموقع التهجين مع الإيجابية الزائفة أحمر اللون في إشارة أدوبي فوتوشوب). (ب) هي التي يسببها Bmp7 التعبير في اللحمة المتوسطة المتاخمة للطعم (السهم) في أجنة خيالية.

<ol><li>Noden, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+the+Neural+Crest+in+Patterning+of+Avian+Cranial+Skeletal%2C+Connective%2C+and+Muscle+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The Role of the Neural Crest in Patterning of Avian Cranial Skeletal, Connective, and Muscle Tissues.</a> Developmental Biology. 96, 144-144 (1983).</li>
<li>Bronner-Fraser, M., Stern, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Mesodermal+Tissues+on+Avian+Neural+Crest+Cell+Migration%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Effects of Mesodermal Tissues on Avian Neural Crest Cell Migration.</a> Developmental Biology. 143, 213-213 (1991).</li>
<li>Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+can+form+cartilages+normally+derived+from+mesoderm+during+development+of+the+avian+head+skeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Neural crest can form cartilages normally derived from mesoderm during development of the avian head skeleton.</a> Developmental Biology. 208, 441-441 (1999).</li>
<li>Couly, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+Hox-negative+cephalic+neural+crest+cells+and+the+foregut+endoderm+in+patterning+the+facial+skeleton+in+the+vertebrate+head%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Interactions between Hox-negative cephalic neural crest cells and the foregut endoderm in patterning the facial skeleton in the vertebrate head.</a> Development. 129, 1061-1061 (2002).</li>
<li>Evans, D. J., Noden, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+relations+between+avian+craniofacial+neural+crest+and+paraxial+mesoderm+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Spatial relations between avian craniofacial neural crest and paraxial mesoderm cells.</a> Dev Dyn. , (2006).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+zone+of+frontonasal+ectoderm+regulates+patterning+and+growth+in+the+face%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A zone of frontonasal ectoderm regulates patterning and growth in the face.</a> Development. 130, 1749-1749 (2003).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+organization+of+the+frontonasal+ectodermal+zone+in+birds+and+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Unique organization of the frontonasal ectodermal zone in birds and mammals.</a> Dev Biol. 325, 200-200 (2009).</li>
<li>Le Lièvre, C. S., Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+derivatives+of+the+neural+crest%3A+analysis+of+chimaeric+quail+and+chick+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Embryology+and+Experimental+Morphology%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal derivatives of the neural crest: analysis of chimaeric quail and chick embryos.</a> Journal of Embryology and Experimental Morphology. 34, 125-125 (1975).</li>
<li>Bollag, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+repetitive+mouse+B2+element+to+identify+transplanted+mouse+cells+in+mouse-chick+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Use of a repetitive mouse B2 element to identify transplanted mouse cells in mouse-chick chimeras.</a> Exp Cell Res. 248, 75-75 (1999).</li>
<li>Korn, M. J., Cramer, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Windowing+chicken+eggs+for+developmental+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Windowing chicken eggs for developmental studies.</a> J Vis Exp. , (2007).</li>
<li>Eames, B. F., Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quail-duck+chimeras+reveal+spatiotemporal+plasticity+in+molecular+and+histogenic+programs+of+cranial+feather+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Quail-duck chimeras reveal spatiotemporal plasticity in molecular and histogenic programs of cranial feather development.</a> Development. 132, 1499-1499 (2005).</li>
<li>Odent, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+Sonic+hedgehog+%28SHH+%29+gene+during+early+human+development+and+phenotypic+expression+of+new+mutations+causing+holoprosencephaly%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Expression of the Sonic hedgehog (SHH ) gene during early human development and phenotypic expression of new mutations causing holoprosencephaly.</a> Hum Mol Genet. 8, 1683-1683 (1999).</li>
<li>Szabo-Rogers, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+skeletogenic+patterning+roles+for+the+olfactory+pit%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Novel skeletogenic patterning roles for the olfactory pit.</a> Development. 136, 219-219 (2009).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

باستخدام هذا الأسلوب زرع سمح لنا لتحديد الأديم الظاهر أن يحتوي على معلومات يشير إلى أن ينظم قطبية ظهري بطني والإرشاد proximodistal من الفك العلوي. التشابه في النتائج عند استخدام الماوس السمان أو الأديم الظاهر ، والحفاظ على الاشارات الجزيئية في هذا النسيج من بين العديد من الأنواع 6،11 يشير إلى أن هذا هو مركز للغاية الحفظ إشارات بين الفقاريات. وعلاوة على ذلك ، استخدمت محققين آخرين تقنيات مشابهة لاختبار خصائص إشارات من مناطق مختلفة من الأديم الظاهر سطح رأسي وكشفت وجود العد...

<table><tbody><tr><td>محلول منظم من الفوسفات الملحي بتركيز 1x (1x PBS)</td><td>Tektronix, Inc.</td><td>TEKZR114</td><td></td></tr><tr><td>وسط DMEM</td><td>جامعة كاليفورنيا - سان فرانسيسكو</td><td>CCFDA003</td><td></td></tr><tr><td>ألبومين المصل البقري (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>ديسبيز (Dispase)</td><td>GIBCO، من شركة Life Technologies</td><td>17105-041</td><td></td></tr><tr><td>طبق بتري بمقاس 35×10 مم</td><td>Falcon BD</td><td>1008</td><td></td></tr><tr><td>ملقط Dumont رقم 5</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>مقص</td><td>Fine Science Tools</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>مقصات نابضية</td><td>Fine Science Tools</td><td>15010-11</td><td></td></tr><tr><td>حامل إبرة</td><td>Fine Science Tools</td><td>26016-12</td><td></td></tr><tr><td>إبرة تنغستن</td><td>Fine Science Tools</td><td>26000</td><td></td></tr><tr><td>أنبوب شعري دقيق </td><td>Drummond Scientific</td><td>3-000-225-G</td><td></td></tr><tr><td>ماصات باستور</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-6B</td><td></td></tr><tr><td>مقصات زنبركية</td><td>Fine Science Tools</td><td>15010-11</td><td></td></tr><tr><td>حامل الشفرة</td><td>Fine Science Tools</td><td>10052-11</td><td></td></tr><tr><td>شفرة حلاقة</td><td>Fine Science Tools</td><td>10050-00</td><td></td></tr></tbody></table>

تقييم خصائص اشارة من الظهارة الأدمة خلال التنمية الجمجمة

Assessing Signaling Properties of Ectodermal Epithelia During Craniofacial Development

وقد ساعدت سهولة الحصول على أجنة الطيور علم الجنين التجريبي فهم مصائر الخلايا أثناء التطور ودور الأنسجة التي تنظم التفاعلات الزخرفة والتشكل من الفقاريات (على سبيل المثال ، 1 ، 2 ، 3 ، 4). هنا ، نحن لتوضيح أسلوب الذي يستغل هذا الوصول لاختبار الإشارات وخصائص الزخرفة الأدمة من أنسجة الوجه أثناء تطوير. في هذه التجارب ، فإننا نخلق السمان ، فرخ 5 أو الماوس الفرخ 6 من زرع الوهم في الأديم الظاهر السطحي الذي يغطي الرأس والفك العلوي من السمان أو الماوس على المنطقة إما نفسه أو في منطقة خارج الرحم لافراخ الدجاج. وقد تم تطوير استخدام السمان والأنسجة المانحة للزرع في الدجاج للاستفادة من علامة موجودة في نويي السمان ولكن الخلايا لا الفرخ ، وبالتالي السماح للمحققين تميز المضيفة والمانحة الأنسجة 7. وبالمثل ، وهو عنصر المتكررة موجودة في جينوم الفأر ، ويعبر بتواجد مطلق ، والذي يسمح لنا أن نميز بين المضيفة والمانحة في الأنسجة الفرخ الفأر الوهم 8. سيتم استخدام الماوس كما الأديم الظاهر تمديد الأنسجة المانحة إلى حد كبير فهمنا لهذه التفاعلات الأنسجة ، وذلك لأن هذا سوف يسمح لنا لاختبار خصائص الإشارات من الأديم الظاهر المستمدة من أجنة متحولة مختلفة.

توضح هذه المقالة تقنية زرع الانسجة التي تم تصميمها لاختبار الإشارات وخصائص الزخرفة من الأديم الظاهر سطح الرأس أثناء تطوير القحفي.

لقد ساعدت سهولة الوصول إلى أجنة الطيور علماء الأجنة التجريبيين على فهم مصائر الخلايا أثناء النمو ودور الأنسجة...

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء أجنة خيمرية (chimeric embryos) عن طريق نقل الأديم الظاهر من أجنة مانحة إلى الفك العلوي النامي لأجنة الدجاج. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق إزالة الأديم المانح للنقل، ثم يتم تحضير موقع المضيف للتطعيم.تتمثل الخطوة النهائية من الإجراء في وضع النسيج المانح على موقع المضيف وتثبيت الطعم في موضعه. وفي النهاية، يمكن الحصول على نتائج تظهر انغراسًا حصريًا للأديم الظاهر المانح، ومن خلال التحليل الجزيئي والمورفولوجي، يمكن تحديد وظيفة الأديم الظاهر المانح المعاد ترميزه. ويمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على أسئلة رئيسية في علم الأحياء النمائي، مثل تحديد دور الأنسجة المختلفة أثناء التخلق الشكلي.سوف تقوم الدكتورة Diane، وهي باحثة أولى من مختبرنا، بشرح الإجراء. قبل البدء في هذا الإجراء، قم بتحضير الأوساط الزراعية وتأكد من توفر جميع المحاليل المطلوبة وأنها في درجة الحرارة الصحيحة. بعد ذلك، وأثناء ارتداء واقي العين المناسب، قم بسحب الأنابيب الشعرية الدقيقة لتصل إلى نقطة دقيقة فوق لهب كحولي.لصنع دبابيس زجاجية تهدف إلى شحذ إبر التنجستن، يتم تثبيت الإبر في لهب مشعل البروبان. ابدأ عملية استخراج الجنين المانح من القشرة بوضع قطعة من الشريط اللاصق على طرف البيضة. استخدم بعد ذلك سن إبرة تشريح لإحداث ثقب صغير في مركز الشريط اللاصق.أدخل محقنة سعة 10 milliliter وإبرة تحت الجلد قياس 18 gauge في الثقب، واسحب 1 milliliter من الألبومين من البيضة. ثم باستخدام إبرة تشريح، اصنع ثقباً صغيراً في الجزء العلوي من القشرة. ضع قطعة ثانية من الشريط اللاصق لتغطية هذا الثقب.اصنع فتحة دائرية في البيضة باستخدام زوجين من الملاقط. أمسك بالجنين وضعه في طبق يحتوي على PBS بارد جداً لغسله. بعد إزالة رأس الجنين، ضعه في طبق زراعة أنسجة يحتوي على DMEM خالي من المصل في درجة حرارة الغرفة.ضع الطبق تحت مجهر التشريح مع تثبيت الرأس باستخدام الملقط. استخدم مقصاً نابضاً لإجراء تشريح عياني للفك العلوي واللجون وفصلهما عن بقية الرأس. ثم باستخدام حامل شفرات مزود بشفرة حلاقة حادة، قم بتشذيب النتوء الأنفي الجبهي من الفك العلوي.استخدم ماصة لنقل النتوء الأنفي الجبهي إلى طبق بتري بقطر 30 مليمتر يحتوي على حجم كافٍ من diss في PBS، ثم قم بالتحضين على الثلج لمدة 20 دقيقة. بعد انقضاء وقت التحضين، قم بشفط محلول dispa دون تحريك النسيج. بعد ذلك، قم بتغطية الأنسجة تماماً بوسط DMEM المحتوي على 1%BSA.لإيقاف عملية الهضم، انقل النسيج إلى طبق زراعة جديد. ثم، أثناء العمل تحت مجهر تشريحي، ثبت النسيج باستخدام إبرة تنجستن غير مدببة وباستخدام إبرة تنجستن مدببة.افصل الأديم الظاهر عن طريق تقشيره بعيداً عن الأنسجة الأخرى. وبمجرد تحضيره، احفظ النسيج المطعّم في وسط DMEM مع BSA على الثلج حتى يصبح المضيف جاهزاً لعملية الزرع. وباستخدام الطريقة الموضحة سابقاً، قم بإنشاء نافذة في بيضة الدجاج.ضع البيضة التي تحتوي على الجنين تحت مجهر التشريح باستخدام زوجين من الملاقط. أمسك بغشاء IGN والسلى وقم بتمزيقهما برفق لإحداث فتحة وكشف جنين المضيف. قم بتدوير الرأس بوضع ملقط على العين اليمنى والضغط عليها مع تثبيت الرأس.استخدم ملقطاً وإبرة لإزالة أدمة المضيف لتهيئة مكان الطعم. أضف 2 µL من الأحمر المتعادل إلى طبق بتري الذي يحتوي على الطعوم المُحضرة. استخدم ماصة زجاجية لنقل الطعم إلى المضيف.ضع الطعم في الموضع المخصص ليحل محل الأديم الظاهر الذي تمت إزالته. أدخل دبوسًا زجاجيًا في كل زاوية من زوايا النسيج المطعّم لتثبيت الطعم في مكانه بعد عملية الزرع. أغلق النافذة بإحكام باستخدام شريط لاصق.أعِد الجنين إلى الحاضنة حتى يصل إلى مرحلة النمو المطلوبة للتحليل، تظهر هذه الصورة نسيجاً من الـ URA لصيص سمان تم صبغه بجسم مضاد نوعي للسمان anti Q-C-P-N-A. يقع النسيج المطعّم بين السهمين. لا يوجد دليل على صبغ QCPN في نسيج الـ meen kind من كيميرا فأر وصيص تظهر هنا، ومرة أخرى، يقع النسيج المطعّم بين السهمين في C، والتهجين في 2 باستخدام مسبار نوعي للتسلسل المتكرر sign B two.يكشف محاكاة جينات الفئة الأولى أن تعبير sign B two يقتصر على الوم الذي يتكون من الطعم الموضح هنا كصورة لـ chime mirror لجنين سمان، والذي خضع لصبغ ثلاثي (trichrome stained)؛ حيث تظهر الصبغة الثلاثية الكولاجين والعظام باللون الأزرق. ويظهر تضاعف هيكل الفك العلوي كما يشير السهم. وتوضح هذه الصورة chime mirror لجنين فأر خضع بدوره للصبغ الثلاثي مرة أخرى.يظهر تضاعف في هيكل الفك العلوي. تُظهر هذه الصورة تهجيناً موضعياً مشعاً في C لتعبيير BMP seven الطبيعي في الميزنشيم لجنين دجاج مُطعم، والنسيج المعروض هنا هو من كيميرا بين فأر ودجاج. ويمكن ملاحظة أن تعبير BMP seven قد تم تحفيزه في الميزنشيم المجاور للطعم كما يشير السهم.بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية التعامل مع أجنة الدجاج لتقييم الآليات التي تنظم تطور النتوء الجبهي والأنفي.

assessing-signaling-properties-ectodermal-epithelia-during

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

ويخضع اللحمة المتوسطة الجمجمة الحركات المثيرة التي توفر morphogenic المرجح قوة دافعة للارتفاع طيات...

مقايسة لتقييم سلوك يزدرع الخلوية من اللحمة المتوسطة القحف

الأنسجة محددة تحليل لتجديد بصيلات الشعر باستخدام نموذج الفيروسة البطيئة للتوسط ربح أو خسارة وظيفة.

تحليل سريع لالوراثية طلائي-الوسيطة اشارة خلال تجديد الشعر

يوصف بروتوكول للفصل الجنين الأديم الظاهر الوجه واللحمة المتوسطة. نستخدم Dispase II لعلاج الأجنة كلها أولا، تشريح الوجه كله من البروز، ومن ثم فصل الأديم الظاهر الوجه واللحمة المتوسطة.

فصل الأدمة الجنينية الماوس الوجه واللحمة المتوسطة

تقنية لزرع "المتطرفة الأمامي المجال" بين أنسجة الوجه القيطم المورق وقد تم تطوير الأجنة. يمكن نقل الأنسجة من احد خلفية التعبير الجيني إلى أخرى، والسماح للدراسة المتطلبات المحلية للتنمية والقحفي للانزعاج التفاعلات بين مناطق الوجه.

زرع الوجه في<em&gt; القيطم المورق</em&gt; الأجنة

يصف هذا البروتوكول كيفية تشريح premigratory قمة العصبية القحفية (NC) من القيطم neurulas المورق. هذه إإكسبلنتس يمكن مطلي على فبرونيكتين وتربيتها في المختبر، أو المطعمة مرة أخرى إلى الأجنة المضيفة. هذه التقنية تسمح بدراسة آليات NC ظهارة إلى اللحمة المتوسطة التي تمر بمرحلة انتقالية، والهجرة، والتمايز.

تشريح<em&gt; القيطم المورق</em&gt; العصبية كريست ل<em&gt; في المختبر</em&gt; يزدرع الثقافة أو<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; زرع

الوقت الفاصل بين التصوير متحد البؤر هي تقنية قوية مفيدة لوصف التطور الجنيني. هنا، نحن تصف منهجية وتميز التشكل القحفي في البرية من نوع، وكذلك pdgfra، smad5، وSMO الأجنة متحولة.

تحليل الجمجمة التشكل في الزرد عن طريق 4D متحد البؤر المجهري

توضح هذه المقالة طريقة لتوليد أجنة خيالية التي تم تصميمها لاختبار المساهمات أنواع محددة من قمة العصبية و / أو الأنسجة الأخرى في التنمية القحفي.

تقييم مساهمات أنواع محددة لتنمية الجمجمة عن طريق الوهم السمان بطة

تم وصف البروتوكولات التي تستخدم حواجز غير منفذة لمنع أحداث التحريض بين أنسجة محور الجسم الرئيسي والجناح في جنين الفرخ المطلوبة لتكوين الأطراف. تستخدم الخرزات المنقوعة في الإشارات الاستقرائية المرشحة للتغلب على تأثير وضع الحاجز ويؤكد تحليل التعبير الجيني ذلك.

تطبيق الحواجز غير نفاذ جنبا إلى جنب مع المرشح عامل الخرز غارقة لدراسة إشارات الاستقرائي في الفرخ

هنا، نقدم بروتوكول مفصل للكشف عن وقياس مستويات البروتين أثناء تكوين الجمجمة والوجه / مسببات الأمراض عن طريق التلطيخ المناعي باستخدام أنسجة الجمجمة والوجه الماوس كأمثلة. وبالإضافة إلى ذلك، فإننا نصف طريقة لإعداد واستئصال التبريد من الأنسجة الصلبة undecalcified من الفئران الشباب لتلطيخ المناعة.

إعداد الأنسجة وتلطيخ المناعة من أنسجة الفئران القحفية والعظام غير الصائق

توضح هذه المقالة تقنية زرع الأنسجة التي تم تصميمها لاختبار خصائص الإشارات والأنماط للدماغ الأمامي القاعدي أثناء النمو القحفي الوجهي.

إنشاء كيميرا الدماغ الأمامي للطيور لتقييم نمو الوجه

يقدم البروتوكول طريقة لعزل محللات بروتين الخلية الكاملة عن عمليات الوجه الجنينية للفئران التشريحية أو خلايا اللحمة الحنكية الجنينية للفئران المستزرعة وإجراء النشاف الغربي اللاحق لتقييم مستويات البروتين المفسفر.

عزل تحلل بروتين الخلية الكاملة عن عمليات وجه الماوس وخلايا اللحمة المتوسطة الحنكية المستزرعة لتحليل البروتين الفوسفوبروتين

اكتشف تقنية زرع الأديم الظاهر لإنشاء أجنة كيميرية ودراسة التشكل الوجهي الجمجمي. تساعد هذه الطريقة الباحثين على فهم تفاعلات الأنسجة أثناء التطور الجنيني.

تقييم خصائص اشارة من الظهارة الأدمة خلال التنمية الجمجمة

استكشف المزيد من الفيديوهات