Name: مولد الرمع الفحص : خلايا منتسب (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-13T11:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: تعلم تقنية مولد الرمع الفحص لتقييم قابلية الخلايا الملتصقة على التكاثر بعد العلاج بالإشعاع أو المواد الكيميائية. تُستخدم هذه الطريقة في علم الأحياء الإشعاعي لاختبار المركبات الحامية أو المُحسّسة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ومن المسلم به بدعم من المعهد الأسترالي للعلوم والهندسة النووية. وكان TCK المستلم من الجوائز AINSE. يتم اعتماد مختبر الطب التي Epigenomic الوطني للصحة ومجلس البحوث الطبية في استراليا (566559). HR معتمد من قبل الاسترالي بعد التخرج والجوائز BakerIDI شرارة مشرق. ويتم تمويل هذا العمل من قبل لجنة حقوق الطفل للتنمية الطبية المحدودة التصوير (CRC - BID) ، التي أنشئت بموجب ودعمت الحكومة الأسترالية مراكز البحوث التعاونية البرنامج. ثاني أكسيد الكربون هو المستفيد استرالي بعد التخرج الجائزة وعلى منحة تكميلية CRC - BID.

1. الثقافة الخلية وتعيين ما يصل التجريبي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمسك الكيراتينية monolayers الإنسان كما في 75 سم 2 القوارير زراعة الأنسجة التي تحتوي على 15 مل من SFM - خلية كيراتينية (K - SFM) المتوسط ​​(GIBCO والمصل خالية متوسطة) تستكمل مع الجلوتامين L - (2 ملم) ، وعامل نمو البشرة (5 نانوغرام / مل) ، واستخراج الغدة النخامية البقري (40 ميكروغرام / مل) و 20 جنتاميسين ملغ / مل. تزرع الخلايا في بيئة ترطيب 5 ٪ CO 2 عند 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> والخلايا في المصنف 12 × 25 سم 2 القوارير زراعة الأنسجة التي تحتوي على 5 مل من K - SFM المتوسط. </li></ol> مستعدون تعليق خلية واحدة بواسطة trypsinization. تغسل الخلايا مع الفوسفات مخزنة المالحة وحضنت مع الحل التربسين / EDTA 0.05 ٪ لمدة 5-10 دقائق. عندما تبدأ الخلايا لتصبح مستديرة ومنفصلة ~ 30 ٪ ، يضاف 3 مجلدات متوسطة Dulbecco لتعديل النسر يحتوي على 10 ٪ مصل بقري جنيني لتحييد التربسين. يتم فصل الخلايا عن طريق pipetting صعودا وهبوطا (20 مرات). يتم عد الخلايا باستخدام عدادة الكريات. والأرقام المصنفة الخلية المناسبة وفقا للوقت مضاعفة خط الخلية (حوالي 20 ساعة من أجل الإنسان الكيراتينية - 1811 FEP). الهدف هو تحقيق 90 ٪ confluency ~ (~ 10 6 خلايا في قارورة) في يوم من التجربة. تجربة تتألف من 12 قوارير هو الأمثل لفحص مولد الرمع احد (ستة السيطرة غير المشع وستة قوارير المشع) والتي يمكن الانتهاء منه في أربع ساعات تقريبا. 2. والعلاج بالإشعاع <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علاج الخلايا لفترة مناسبة مع مجمع الإشعاع تعديل الخلايا ذات الصلة ، وفضح للإشعاع المؤين إما γ الإشعاع أو الأشعة السينية. </li></ol> بين ستة قوارير بمثابة كفاءة الطلاء (غير المعالجة) والضوابط المخدرات فقط. والمشع الستة الأخرى القوارير. في هذا المثال تعامل الإنسان مع التركيز الكيراتينية مختلف PF Cinnulin (CPF ؛ المغذيات النزاهة الدولية ، ربيع هيل ، تينيسي ، الولايات المتحدة ؛ بيانات تمثيلية للهو مبين 20 ميكروغرام / مل أدناه) ، وهو صياغة للذوبان في الماء الطبيعية المضادة للأكسدة ، لمدة 1 ساعة في 37 درجة مئوية. هي الخلايا المشع مع 4 غراي باستخدام مصدر سيزيوم 137 (1000 Gammacell irradiator النخبة ؛ Nordion الدولية ، ON ، كندا ؛ 1.6 غراي / دقيقة). 3. تصفيح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد العلاج ، ويتم الحصول على تعليق خلية واحدة كما هو موضح سابقا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم حساب عدد الخلايا في كل عينة باستخدام بعناية عدادة الكريات والمخففة هي المصنفة بحيث أعداد الخلايا المناسبة في أطباق بتري (خمسة مكررات كل الأطباق في 15 ملم). وينبغي توقع الطلاء الكفاءة و / أو كسر قيد الحياة عند البت في عدد من الخلايا على البذور في لوحة. الهدف هو تحقيق مجموعة من بين 20-150 المستعمرات. </li></ol> يتم ترتيب أطباق بتري في مربع الاستنساخ البلاستيك ترطيب والمحتضنة في بيئة 5 ٪ CO 2 عند 37 درجة مئوية لتشكيل مستعمرة. فترة حضانة لتشكيل مستعمرة يختلف من 1-3 أسابيع لخطوط مختلفة من الخلايا ، ومن المتفق عليه أن الوقت يجب أن يكون معادلا لانقسامات الخلية لا يقل عن ستة. في هذا المثال ، وأطباق لمراقبة الكيراتينية البشرية تتطلب ثمانية أيام لتشكيل استنساخ كبيرة بما فيه الكفاية التي تتكون من 50 أو أكثر من الخلايا. 4. تحديد ويلطخ المستعمرات أكمل الخطوات التالية في غطاء الدخان. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة بلطف وسائل الإعلام من كل من الصفائح التي كتبها الطموح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل كل لوحة المالحة مع 5 مل 0.9 ٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح المستعمرات مع 5 مل من حل 10 ٪ محايدة الفورمالين مخزنة عن 15-30 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وصمة عار مع 5 مل من الكريستال البنفسجي 0.01 ٪ (W / V) في DH 2 O ل 30-60 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل مع فائض البنفسجي الكريستال درهم 2 O والسماح الأطباق لتجف. </li></ol> 5. مستعمرة العد Stereomicroscope <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم عد المستعمرات التي تحتوي على أكثر من 50 خلايا فردية باستخدام stereomicroscope. </li></ol> التصوير الرقمي والتصوير العد باستخدام البرمجيات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم الحصول على الصور الرقمية من المستعمرات باستخدام الكاميرا أو جهاز المسح الضوئي </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم عد المستعمرات التصوير باستخدام حزم برمجيات التحليل على النحو المبين أدناه. </li></ol> عد الخلايا باستخدام ImageJ (فيجي الإصدار 1.44a) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح ملف الصورة في فيجي ، انتقل إلى ملف --&gt; فتح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا اقتضى الأمر تحويل الصورة إلى تنسيق 8 بت ، انتقل إلى الصورة --&gt; ضبط...-&gt; عتبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط عتبة للحد من مستويات غير محددة الخلفية بحيث يتم الكشف عنها فقط في المستعمرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عدد المستعمرات باستخدام ما يلي : اذهب إلى عملية --&gt; ثنائي --&gt; البحث عن ماكسيما. </li></ol> صورة لهذا الشكل ، يمكن تعيين التسامح الضوضاء إلى 0. تأكد من أن الخيار تكتك الخلفية الخفيفة ومعاينة ماكسيما الكشف للتأكد من أن تم الانتهاء من جميع المستعمرات الخلية مسجلة بشكل صحيح.

<ol><li>Puck, T. T., Marcus, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Action+of+x-rays+on+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Action of x-rays on mammalian cells.</a> J Exp Med. 103, 653-666 (1956).</li>
<li>Hurlin, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progression+of+human+papillomavirus+type+18-immortalized+human+keratinocytes+to+a+malignant+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Progression of human papillomavirus type 18-immortalized human keratinocytes to a malignant phenotype.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 88, 570-574 (1991).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

في هذا المثال تم علاج الإنسان FEP - 1811 الكيراتينية بتركيزات مختلفة تصل الى 100 ميكروغرام / مل CPF ؛ تظهر البيانات لمدة 20 ميكروغرام / مل CPF لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية. وكانت الخلايا المشع بعد العلاج مع 4 غراي باستخدام مصدر سيزيوم 137 (1000 Gammacell irradiator النخبة ؛ Nordion الدولية ، ON ، كندا ؛ 1.6 غراي / دقيقة). لمراقبة ومطلي العلاجات والأدوية المعالجة فقط 100 خلية في كل طبق بتري وكانت مطلية 1000 خلية لكل طبق لعينات المشع. كما هو مبين في الجدول أعلاه ، احصي ا...

<table><tbody><tr><td>وسط استنبات الخلايا الكيراتينية الخالي من المصل (Keratinocyte-serum free medium)</td><td>وسط نمو</td><td>Invitrogen</td><td>17005042</td><td>مُدعم بـ 2mM L-glutamine، و 20&amp;#x03BC;g/ml gentamicin، وعامل نمو البشرة، ومستخلص النخامية البقري.</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>15400-054</td><td>0.05% trypsin / EDTA لفصل الخلايا الملتصقة؛ مخزون بتركيز 10x مُخفف في PBS خالٍ من Ca&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt;/Mg&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt;.</td></tr><tr><td>وسط Dulbecco المعدل الأساسي (Dulbecco&amp;rsquo;s modified essential medium)</td><td>وسط نمو</td><td>Invitrogen</td><td>11885-084</td><td>مُدعم بـ 10% FBS و 20&amp;#x03BC;g/ml gentamicin؛ يُستخدم لمعادلة trypsin/EDTA.</td></tr><tr><td>محلول ملحي بتركيز 0.09%</td><td>محلول</td><td></td><td></td><td>يُستخدم لغسل المستعمرات.</td></tr><tr><td>محلول فورمالين مُنظم متعادل بتركيز 10%</td><td>محلول</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td>~4% formaldehyde؛ يُستخدم لتثبيت المستعمرات.</td></tr><tr><td>البنفسج البلوري (Crystal violet)</td><td>مسحوق</td><td>SPI Supplies</td><td>02577-MB</td><td>محلول بنفسج بلوري بتركيز 0.01%، مُحضّر في dH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O، يُستخدم لصبغ المستعمرات.</td></tr><tr><td>جهاز التشعيع Gammacell 1000 elite</td><td></td><td>Nordion International Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>أطباق بتري</td><td>60 × 15 مم</td><td>Falcon BD</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>مقياس خلايا (Haemocytometer)</td><td></td><td>Hawksley; Medical and Laboratory Equipment</td><td>AC1000</td><td></td></tr><tr><td>صندوق استنساخ</td><td></td><td></td><td></td><td>صندوق بلاستيكي به ثقوب مثقوبة على جانبي الغطاء؛ لتخزين أطباق بتري أثناء الحضن المطول لتكوين المستعمرات.</td></tr><tr><td>مجهر ستيريو (Stereomicroscope)</td><td>طراز 102</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td>يُستخدم لعد المستعمرات التي تتكون من &amp;gt;50 خلية.</td></tr></tbody></table>

مولد الرمع الفحص : خلايا منتسب

Clonogenic Assay: Adherent Cells

تم تأسيس (أو تشكيل مستعمرة) مولد الرمع مقايسة لأكثر من 50 عاما ، وقد نشرت الورقة الأصلية التي تصف هذه التقنية في عام 1956 1. وبصرف النظر عن توثيق الأسلوب ، ولدت في دراسة المعالم الأولية أول منحنى الاستجابة للجرعة الاشعاع بالأشعة السينية المشع خلايا (هيلا) الثدييات في الثقافة 1. في الأساس ، وفحص مولد الرمع تمكن من إجراء تقييم للاختلافات في البقاء الإنجابية (قدرة الخلايا على إنتاج ذرية ، أي خلية واحدة لتشكيل مستعمرة من 50 أو أكثر من الخلايا) بين الخلايا والخلايا غير المعالجة السيطرة التي خضعت العلاجات المختلفة مثل التعرض والإشعاع المؤين ، والمركبات الكيميائية المختلفة (وكلاء السامة للخلايا ، مثلا) أو في الحالات الأخرى التلاعب الجيني. أصبح مقايسة التقنية الأكثر قبولا في البيولوجيا الإشعاعية واستخدمت على نطاق واسع لتقييم مدى حساسية الإشعاع من خطوط مختلفة من الخلايا. كذلك ، يستخدم عادة لفحص مولد الرمع لرصد فعالية مركبات تعديل والإشعاع لتحديد تأثيرات العوامل السامة للخلايا وغيرها من العلاجات المضادة للسرطان على قدرة تشكيل مستعمرة ، في خطوط مختلفة من الخلايا. وبقاء مولد الرمع نموذجية التجربة باستخدام الخلايا الملتصقة خطوط ينطوي على ثلاثة عناصر متميزة ، 1) معالجة المونولاير خلية في قوارير زراعة الأنسجة ، 2) إعداد تعليق خلية واحدة والطلاء عدد مناسب من الخلايا في أطباق بتري و 3) تحديد وتلطيخ المستعمرات بعد فترة حضانة ذات الصلة ، والتي يمكن أن تتراوح بين 1-3 أسابيع ، اعتمادا على خط الخلية. نحن هنا لشرح اجراءات عامة لأداء مولد الرمع مقايسة مع خطوط الخلايا الملتصقة مع استخدام لخلد الإنسان خط خلية خلية كيراتينية (FEP - 1811) 2. أيضا ، ويهدف لدينا هي لوصف الخصائص المشتركة للالمقايسات مولد الرمع بما في ذلك حساب الكفاءة والطلاء والكسور البقاء بعد التعرض للإشعاع من الخلايا ، ومثالا على التعديل استجابة للإشعاع مع استخدام صيغة الطبيعية المضادة للأكسدة.

وقد أنشئت انطباق مقايسة لتقييم جدوى مولد الرمع الإنجابية لأكثر من 50 عاما. نحن هنا لشرح اجراءات عامة لأداء مولد الرمع مقايسة مع خلايا ملتصقة.

لقد تم اعتماد مقايسة تشكيل المستعمرات (أو المقايسة المكونة للمستعمرات) منذ أكثر من 50 عاماً؛ حيث نُشر البحث الأصلي الذي يصف هذه التقنية في عام 1956.

مرحباً، اسمي Lum وأقوم حالياً بدراسة الدكتوراه في معهد BE IDI للقلب والسكري تحت إشراف الدكتور Tom Carianne، رئيس مختبر الطب الإبيجينومي. سأقوم في هذا الفيديو بشرح الإجراء المعروف باسم مقايسة بقاء المستعمرات (Clon Genic Survival Assay). وهي تقنية يعود تاريخها إلى 50 عاماً، وتسمح بتقييم تأثير العلاجات المختلفة، مثل التعرض للإشعاع أو العوامل الكيميائية، على القدرة التكاثرية للخلايا.يعتبر مقايسة بقاء الخلايا متجانسة السلالة تقنية مركزية في علم الأحياء الإشعاعي لتقييم الحساسية الإشعاعية لخطوط خلوية مختلفة واختبار فعالية المركبات المختلفة الواقية من الإشعاع أو المحسسة له. عند استخدام خط خلوي ملتصق، تتكون مقايسة البقاء بالتبريد من ثلاث مراحل. أولاً، معالجة طبقة واحدة من الخلايا الملتصقة.ثانياً، تحضير معلق خلوي أحادي وتوزيع عدد معروف من الخلايا في أطباق مطلية، وثالثاً، صبغ وعدّ المستعمرات المتكونة بعد فترة من الحضن. في هذا الفيديو، سأستخدم خلايا مخلدة من سلالة human cino site لتوضيح كيفية استخدام مقايسة polygenic Bible لتحديد خصائص الوقاية الإشعاعية لمضاد أكسدة طبيعي. يتم استزراع الخلايا مسبقاً في دوارق T25 بـ 5 mL من الوسط الغذائي، بحيث يكون هناك 1 مليون خلية في كل دورق في يوم التجربة.يتم إضافة 50 µL من العقار بتراكيز مختلفة إلى 5 mL من الوسط الغذائي في كل دورق مُعلم بشكل مناسب لتحقيق التركيز المطلوب؛ حيث تُستخدم خمسة تراكيز بالإضافة إلى مجموعة ضابطة واحدة باستخدام المذيب (vehicle control)، وهو في هذه الحالة PBS. وبعد إضافة العقار، تُحضن الخلايا لمدة ساعة واحدة في الظروف المناسبة لسلالة الخلايا المستخدمة. وبعد الحضن، تُعرض الدوارق، باستثناء المجموعة الضابطة، للإشعاع بالجرعة المختارة، والتي تبلغ في هذه الحالة 4 Gy الناتجة عن مصدر سيزيوم باعث لأشعة غاما.بعد التشعيع، يتم سكب الأوساط الغذائية وغسل كل قارورة بـ 2 mL من PBS لمدة خمس دقائق. وبعد سكب الـ PBS، يُضاف 2 mL من trypsin بتركيز 0.05% إلى كل قارورة لفصل الخلايا الملتصقة من جدار القارورة. ثم يُضاف 5 mL من DMEM الذي يحتوي على 10% fetal bovine serum إلى كل قارورة لإبطال مفعول الـ trypsin.يتم بعد ذلك نقل كامل محتويات القارورة إلى أنابيب فالكون سعة 10 milliliter مصنفة. وبمجرد الانتهاء، تُوضع هذه الأنابيب في جهاز الطرد المركزي لمدة خمس دقائق، وبعد ذلك يتم التخلص من المادة الطافية بعناية دون تعكير الراسب، ويُضاف 5 mils من وسط crecy إلى كل أنبوب. كما يتم حساب تركيز الخلايا لكل عينة، بالإضافة إلى الحجم المطلوب من كل عينة لتحقيق التركيز النهائي للخلايا المراد توزيعها في خمسة أطباق بتري لكل عينة، مع إضافة خمسة milliliters من الوسط لكل طبق.على سبيل المثال، بالنسبة للمجموعة الضابطة، يتم زرع 100 خلية في كل طبق، وبناءً على ذلك يتم حساب الحجم اللازم لتحقيق 500 خلية لكل 25 ملليلتر؛ أما بالنسبة للعينات الأكثر تركيزاً، فيتم إجراء تخفيف بمقدار 10 مرات أو تخفيف تسلسلي بمقدار 100 مرة لتقليل الخطأ الناتج عن استخدام أحجام أقل من 100 µL. والآن، يتم تحضير الحجم المحسوب سابقاً في أنبوب Falcon يحتوي على 25 ملليلتر من الوسط الغذائي لكل عينة. ويمكن الآن نقل العينات إلى أطباق تم تسميتها مسبقاً، مع إضافة خمسة ملليلتر إلى كل طبق لتسهيل عملية المناولة والنقل.تُحفظ الأطباق في حاوية كبيرة معقمة أو مطهرة. ثم توضع الأطباق في حضانة رطبة تحت الظروف المناسبة وتُحضن لمدة ثمانية أيام. في حال استخدام الخلايا الكيراتينية بعد ثمانية أيام، تُزال الأطباق بعناية من الحضانة وتوضع جميعها واحدة تلو الأخرى داخل خزانة استخلاص الأدخنة.احرص على التعامل مع الأطباق برفق حتى لا تضطرب أي مستعمرات قد تكونت. قم بإزالة الأغطية وأضف 5 mls من المحلول الملحي بتركيز 0.9% إلى كل طبق لغسله. وجه رأس الماصة نحو زاوية الطبق وتجنب لمس قاع الطبق حتى لا يتم كشط أي مستعمرات عن طريق الخطأ.بعد مرور خمس دقائق، يتم سحب المحلول الملحي بعناية. الآن، تُثبت المستعمرات باستخدام ثلاثة ملليلتر من تركيز 4%، ويجب استبدال الأغطية لتجنب التبخر. بعد مرور 15 دقيقة إلى نصف ساعة، يتم سحب المحلول والتخلص منه بشكل مناسب.أصبحت المستعمرات الآن جاهزة للصبغ باستخدام Crystal violet بتركيز 0.1%، حيث يُضاف خمسة مليليترات إلى كل طبق، ثم تُعاد الأغطية بعد مرور نصف ساعة إلى ساعة واحدة. بعد ذلك، يُغسل الصبغ بالماء المقطر، وتُقلب الأطباق وتُترك لتجف طوال الليل. الآن أصبحت المستعمرات جاهزة للعد.يمكن عد المستعمرات يدويًا باستخدام مجهر تشريحي. وتعتبر أي مجموعة من الخلايا تحتوي على 50 خلية أو أكثر بمثابة مستعمرة. وبهذا نكون قد انتهينا من عرض اختبار بقاء السلالات المتجانسة (Congenic survival assay).تكمن الميزة الرئيسية لهذا المقايسة مقارنة بالتقنيات الأخرى في حساسيتها العالية وقدرتها على كشف البقاء على مدى واسع حتى بعد قتل الخلايا بمقدار ستة لوغاريتمات. ويتحقق هذا المستوى من الحساسية عن طريق زراعة أعداد أكبر من الخلايا. ويمكن استخدام هذه المقايسة بسهولة لأغراض أخرى، مثل اختبار السمية الخلوية.شكراً للمشاهدة.

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

هذا البروتوكول فيديو يوضح كيفية تميز بحسن نية وتعداد الخلايا الجذعية العصبية في يسكنها خليط من الخلايا العصبية باستخدام السلائف فحص الخلايا العصبية المكونة للمستعمرة.

العصبية تشكيل مستعمرة الفحص الخلوي : إن الفحص تميز بحسن نية الخلايا الجذعية العصبية من الخلايا العصبية السلف

هذا البروتوكول هو بسيط مقايسة التصاق البكتيريا التي تتكون في عد الأرقام من مستعمرة بكتيرية تشكيل الوحدات التي انضمت على الخلايا المستنبتة. درس مستقل للadhesin للمقايسة وقوية ، وتستخدم العديد من الاختلافات في معظم المختبرات تعمل على المرضية البكتيرية.

الفحص في المختبر من الالتصاق الجرثومي على الخلايا الظهارية الثدييات

يصف هذا الفيديو مقايسة تكوين المستعمرة ، والتي تساعد في تحديد قدرة خلايا سرطان الرئة على التكاثر إلى أجل غير مسمى وتشكيل مستعمرات فردية. يمكننا تحليل تأثير عامل مضاد للسرطان على الخلايا المكونة للمستعمرة من خلال تحليل التغيرات في عدد و / أو حجم المستعمرات الناتجة.

مقايسة تكوين المستعمرة: تقييم فعالية العوامل المضادة للسرطان على خلايا سرطان الرئة المكونة للمستعمرات

في هذا الفيديو ، نجري فحصا استماضيا للخلايا الكيراتينية التي تم حصادها من الفئران البالغة لتحديد قدرة الخلايا الفردية على التكاثر وتشكيل المستعمرات. تقنية حصاد الخلايا الكيراتينية هذه مفيدة لدراسة الجوانب النهائية الأخرى للتسرطن الكيميائي الجلدي وتعزيز الورم.

مقايسة تكوين مستعمرة الخلايا الكيراتينية: اختبار في المختبر لتقييم قدرة الخلايا الكيراتينية على النمو إلى مستعمرات

&lt; p class = 'jove_content'&gt; قمنا بتطوير نموذج في المختبر للسكون في نخاع العظام لخلايا سرطان الثدي الحساسة للإستروجين. الهدف من هذا البروتوكول هو إثبات استخدام النموذج لدراسة البيولوجيا الجزيئية والخلوية للسكون ولتوليد فرضيات للاختبار اللاحق في الجسم الحي.

ل<em&gt; في المختبر</em&gt; الخمول نموذج من الاستروجين تراعي سرطان الثدي في نخاع العظام: أداة للدراسات الآلية الجزيئية والجيل الفرضية

الخلايا الجذعية العصبية (NSCs) تشير إلى الخلايا التي يمكن تجديد الذات والتمايز إلى الأنساب العصبية ثلاثة. هنا، نحن تصف بروتوكول لتحديد تردد مجلس الأمن القومي في عدد السكان خلية معينة باستخدام neurosphere تشكيل والتمايز في ظل ظروف نسيلي.

تعداد الخلايا الجذعية العصبية باستخدام نسيلي فحوصات

نحن تصف طريقة لوضع العلامات مستقر من xenografts المستمدة من المريض (PDXs) مع جزيئات lentiviral التعبير عن بروتين ووسيفيراز صحفيين الأخضر الفلورسنت. وتسمح هذه الطريقة لتتبع نمو PDXs في الموقع الأساسي، وكذلك الكشف عن الانبثاث عفوية والتجريبية استخدام في أنظمة التصوير الجسم الحي.

وضع العلامات لسرطان الثدي Xenografts المستمدة من المريض مع يمكن عزوها مراسلون لنمو الأورام والدراسات الانبثاث

نقدم هنا منهجية لتحليل الاستنساخ من سلائف الخلايا الجذعية المكونة للدم أثناء التطور الجنيني مورين. أن نجمع بين مؤشر فرز الخلايا المفردة من منطقة الشريان الاورطي-الغدد التناسلية-ميسونيفروس الجنينية مع خلية غشائي ثقافة المشارك وزرع لتوصيف الخصائص المظهرية وإمكانات engraftment السلائف المكونة للدم واحد.

تحليل الاستنساخ من سلائف الخلايا الجذعية الجنينية المكونة للدم باستخدام مؤشر وحيد الخلية الفرز جنبا إلى جنب مع الخلية البطانية مكانة ثقافة المشارك

يعد الاستهداف الدوائي للقنوات الأيونية نهجا واعدا لعلاج الأورام الصلبة. يتم توفير بروتوكولات مفصلة لتوصيف وظيفة القناة الأيونية في الخلايا السرطانية وفحص آثار معدلات القناة الأيونية على صلاحية السرطان.

فحص القنوات الأيونية في الخلايا السرطانية

تلفيق والتحقق من منصة الإضافية التي توفر تعزيز الرقابة على الأوكسجين المكاني والزماني في صفيحة 6 - جيدا. الجهاز قابل للتكيف لعدد من النظم والثقافة ، ويمكن استخدامها للتحقق من آثار الأوكسجين على التئام الجروح.

تصنيع وتشغيل إدخال الأوكسجين للثقافات الخلوية منتسب

تعلم تقنية مولد الرمع الفحص لتقييم قابلية الخلايا الملتصقة على التكاثر بعد العلاج بالإشعاع أو المواد الكيميائية. تُستخدم هذه الطريقة في علم الأحياء الإشعاعي لاختبار المركبات الحامية أو المُحسّسة.

مولد الرمع الفحص : خلايا منتسب

استكشف المزيد من الفيديوهات