Name: الشريان التاجي ربط Intramyocardial وحقن الفئران في نموذج من احتشاء (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 41 s
Description: تعلم تقنيات الجراحة الدقيقة لربط الشريان التاجي والحقن داخل عضلة القلب في الفئران. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة إصابات نقص التروية وإعادة التروية في نماذج احتشاء عضلة القلب.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأود أن أنوه إدارة البحوث والدراسات العليا لتوفير الأموال اللازمة لدعم بحثي ودائرة الطب المقارن ليقظتها والمساعدة. وأود أيضا أن تعترف وزارة فسيولوجيا لما قدموه من دعم وتوجيه وكذلك الطلاب والفنيين في المختبر بلدي لمساعدتهم. أخيرا ، أود أن أشكر لي بعد الدكتوراه معلمه ، والدكتور تشارلز إي المري ، لإتاحة الفرصة للتدريب خلال الوقت الذي تعلمت المجهرية الماوس.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توضع الأدوات الجراحية المعقمة (الجدول 1) و 3 تطبيقها القطن "يميل على underpad العقيمة. تشغيل جهاز التعقيم حبة (Germinator 500) على. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفئران (العمر :&gt; 6 أسابيع ؛ بالوزن :&gt; 18G) هي حقنة تخدير مع الملكية الفكرية من 20μl / ز BW من ثلاثي بروم إيثانول (250mg/kg ؛ مدة -- حوالي 40 دقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وهي مغلفة عند الفئران لا تستجيب لقرصة أخمص القدمين ، ومواد التشحيم العقيمة (دموع تجدد) يتم تطبيقها على العينين لحمايتها من الجفاف والجانب الأيسر من الصدر مع مزيل الشعر (نير مثلا) لإزالة الفراء من الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغتسل مزيل الشعر بعيدا مع الماء الدافئ وتشغيل betadine / الكحول يستخدم ينظف لتطهير المنطقة الجراحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع الماوس على وسادة دافئة متساوي deltaphase الذي هو ثابت إلى جدول شبكي. ويجمد كل طرف باستخدام الشريط ويوضع خيط سميك أفقيا تحت الأسنان لعقد قمة الفك العلوي في المكان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع الجدول عموديا وأشرق ضوء الالياف البصرية مباشرة على منطقة الرقبة للإنارة المريء. وهذا يتطلب وضع دقيق بحيث يتم عرضها في افتتاح الحلق باعتباره فوهة مضاءة جيدا ، وبالتالي تمكين القصبة الهوائية لتكون تصور لتسهيل إدخال الأنبوب PE. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم توصيل الأنابيب إلى التنفس الصناعي (متصلة O 95 ٪ 2 / 5 ٪ CO 2) لإدارة الضغط الايجابي المستمر للتهوية (TOPO التنفس ، معدل التنفس 125 / دقيقة ؛ ذروة الضغط الشهيقي 10-12 CMH O 2 ؛ * ملاحظة : ضبط تختلف مع السلالة والجنس 1-3). بمجرد تأكيد التهوية حركات الصدر متزامن ، تم إصلاح اتصال مع وسادة الشريط لتجنب نزع الأنبوب أثناء الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط مسنن لسحب ما يصل الجلد ، وبعيدا عن صدره ، وشفرة # 10 مشرط معقم تعلق على التعامل مع مشرط # 3 يستخدم لصنع شق 1.5cm موازية في الجلد لعظمة القص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتستخدم منحنية microscissors فانا لقطع العضلات الصدرية وجعل ثقب صغير في العضلات بين الضلوع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على التوالي ، وتستخدم لخفض microscissors حادة خلال 3 الأضلاع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويستخدم منظار 9MM العيون لدى الأطفال إلى التراجع القفص الصدري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الملقط المنحني ، وسحب بيريكارديوم بعيدا عن القلب ، واستخدام ملقط مسنن لتمزيق برفق فتح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام إبرة Castroviejo حامل ، وهذه نقطة 6mm مدبب المواضيع إبرة 08/03 وخياطة 8-0 البولي اثيلين تحت الأمامي النازل الأيسر الشريان التاجي (على طول المحور الطويل للقلب) عمودي على ذلك. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لربطة المؤقتة التي يمكن إزالتها عن ضخه توقيت غير مناسب ، يتم وضع معقم 0.5 - 1cm قطعة من PE90 على القلب بالتوازي مع الشريان التاجي. ويرتبط ثم خياطة ، الذي أول مرة منذ يحلق تحت الشريان التاجي ، للأنابيب. في ذلك الوقت هو أن يطلق سراحه ، وخففت ربطة. ويمكن تكرار هذا النحو المرغوب فيه ، ويمكن تعديل وقت إطباق / reocclusion 4. اعتمادا على طول البروتوكول ونوع من التخدير المستعملة ، مكملات قد يكون ضروريا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عن انسداد دائم ، مرتبط ببساطة ربطة الذي تغلب عليه اسهم تحت الشريان التاجي. تبييض وخلل الحركة كانت واضحة ويتم قطع في نهاية فترة طويلة من الدرز 5-10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هو عرض لحقن intramyocardial (ق) ، محقنة معقمة هاميلتون بإبرة معقمة قياس 30 مشطوف في قاعدة للقلب فوق منطقة الاصابة في الجانب الأيمن من ربطة. متقدمة ثم الإبرة في منطقة الاصابة وانسحب قليلا بحيث يمكن رؤية شطبة تقريبا في المنطقة الحدودية. يتم حقن بعض الحل في المحاقن (2 - 3μl) في القلب والتي عقدت في مكان الإبرة. يتم سحب آخر حقنة 1 - 3mm ويحقن بقية من الحل. يقام في مكان الحقنة حتى فقاعة التي يشكلها حل تبدد. ثم تتم إزالة الإبرة. إذا كان هناك أي نزيف ، والضغط برفق قضيب من القطن ذات الرؤوس على موقع الإدراج الإبرة حتى يتوقف النزيف 5-7. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بمجرد التلاعب عضلة القلب كاملة ، تتم إزالة الكامشات الصدري وإغلاق تجويف الصدر 2-3 مع الغرز باستخدام فرشة 6-0 surgipro خياطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم تتم ليومين أو ثلاثة خيوط فراش لإغلاق العضلات الصدرية ، قطرات 1-3 من 1:10 marcaine 0.25 ٪ في ملحي معقم (0.1ml/25g الماوس) يتم تطبيقها على العضلات ومن ثم تتم 2-3 الغرز لفراش إغلاق الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الماوس من التنفس الصناعي. يتم التحقق من التنفس الايقاعي مرة واحدة ، سريعة ، الضحلة ، ويمكن extubated الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم حقن معقمة 0.5ml المالحة الدافئة في الفضاء تحت الجلد الظهرية ويتم وضع الماوس على لوحة الاحترار في قفص حتى تستعيد الحركة (1 الدنيا ساعة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البقاء للتجارب ، وضعت الفئران مرة أخرى في أقفاصها ، وعاد إلى الحظيرة حتى وقت التضحية. خلال الأيام الأولى 2 ، مبلل الغذاءوضعت على الأرض لتسهيل قفص التغذية (ما لم يكن لديهم لتصل والتي قد تسبب الألم) ، وينبغي أن تدار البوبرينورفين كل 6 - 12hr. الرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية تشمل أيضا الرصد اليومي للأسبوع الأول للتحقق من التنقل الكافي ، والاستمالة ، وعادات تناول الطعام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم محو الأدوات الجراحية النظيفة مع الإيثانول وإدراجها في حبة تعقيم قبل الجراحة المقبل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في وقت التضحية ، وتخدير الفئران مع الصوديوم بنتوباربيتال (65mg/ml ؛ 55-65 ملغ / كلغ). عندما يتحقق طائرة كافية من التخدير ، ويتم فتح التجويف الصدري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في حين أن القلب لا يزال الضرب ، والمحاقن مع إبرة قياس 23 الباردة التي تحتوي على كلوريد البوتاسيوم (بوكل ، 30mM) أو 2،3 butanedione - monoxime (BDM ؛ 10MM) تستخدم لثقب في المنطقة الخلفية القاعدية من البطين والحل هو حقن ببطء الى غرفة حتى يتم القبض على القلب في انبساط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بمجرد إزالة القلب ويستخدم حقنة تحتوي على برنامج تلفزيوني يروي retrogradely شطف القلب لإزالة أي الدم الذي لا يزال قائما. للدراسات حادة ، في نهاية الفترة ضخه ، هو إعادة LAD ligated عند نقطة الأصلي للانسداد. يتم حقن محلول يحتوي على 1 ٪ ايفان الازرق في الشريان الأورطي. مرة واحدة يتم استخراج القلب ، قطع عليه بالعرض الى 3 أقسام متساوية السماكة ، المحتضنة في 1 ٪ 2،3،5 - triphenyltetrazolium كلوريد ، وتصوير لتحاليل morphometric 11. للدراسات المزمن ، ثم يتم وضعها في قلب تثبيتي ، ثم معالجتها وجزءا لا يتجزأ وفقا للإجراءات الروتينية. ويمكن عندئذ أن تكون ملطخة الشرائح المصورة وتشريحيا للتحاليل morphometric (باستخدام المطعوم ، NIH J صورة ، أو صورة برو بلس) 9،10،12. </li></ol> ممثل النتائج : عندما يوظف بشكل صحيح ، وبقاء أسعار الفائدة في الفئران (ذكور : عمر 8-10 أسابيع ، 22 - 28g ؛ الإناث : سن 10-12 أسابيع ، 20 - 26g) هي : أكثر من 90 ٪ في نقص تروية حاد / ضخه الدماغية والتجارب شروط مسبقة ، على مدى 85 ٪ في الدراسات ربط الشريان دائمة ، وحوالي 80 ٪ للحقن intramyocardial. منذ الاصابة في وقت مبكر هو أيسر وضوحا عن التغيرات الأيضية بدلا من الهيكلية ، وتحديد حجم احتشاء في نقص التروية / ضخه ونقص تروية التجارب شروط مسبقة تتم عن طريق غرس 1 ٪ ايفان لصبغة زرقاء في الشريان الأورطي الذي سوف يروي القلب الذي لم يتم توفيره من قبل LAD ( الشكل 1A). بمجرد أن تتم إزالة القلب وخفض الى النصف بالعرض ، وحضنت النسيج في محلول 1 ٪ من كلوريد 2،3،5 - triphenyltetrazolium لقياس حجم احتشاء (1B الشكل). تقاس به المناطق المطعوم أو المعاهد الوطنية للصحة التصوير البرمجيات التي يمكن معايرتها باستخدام ميكرومتر المصورة في نفس التكبير. وتستخدم هذه الأرقام لحساب المنطقة في خطر / البطين الأيسر واحتشاء الحجم / 11 منطقة معرضة للخطر. يمكن أن ينتج سلالة الاختلافات اختلافات في وزن الجسم وحجم القلب ولذا يجب توخي الحذر لتطبيع هذه التدابير لوزن القلب ، ووزن الجسم ، أو طول الساق لأغراض المقارنة. نتائج دائمة ربط الشريان في تغييرات هيكلية مثل نخر الإجمالي ، جدار رقيق ، واتساع القاعة. ويمكن أيضا مقارنة آثار العلاج و / أو الوقت على حجم احتشاء ونخر النسبي إلى البطين الأيسر ، منطقة الغرفة ، الجدار الحاجز وغادر سماكة جدار البطين الحرة في النموذج انسداد دائم (الشكل 2A) يمكن قياسها باستخدام التصوير المطعوم أو المعاهد الوطنية للصحة البرمجيات. ويمكن استخدام الكولاجين مع picrosirius تلوين أحمر / أخضر سريع (الشكل 2B) لقياس تليف insterstitial الذي يرتبط المؤشرات الفنية للتشنج 80-10 الجدار. الصورة في الشكل (3) يمثل الحل توزيع 6ul (الأزرق ايفان ل) حقنها في المنطقة الحدودية من القلب بعد ربط الشريان دائمة. لاحظت أن هناك تسير في اتجاه الاصابة وكذلك تجاه القاعدة وtransmurally أيضا. <img src="/files/ftp_upload/2581/2581fig1.jpg" alt="الشكل 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 1"> الشكل 1. ألف ايفان 'ق بلو تحقن في الشريان الأورطي قبل الختان. هذه الصورة تبين مناطق perfused من القلب (الملون) ومنطقة المغطي (غير ملوثين). ايفان باء" ليالي الأزرق وتلطيخ TTC التالية الاصابة الإسكيمية / ضخه الحادة. هذه هي صورة الممثل (20X) تبين توزيع الصبغة الزرقاء التي تلطخ المناطق unoccluded فضلا TTC تلوين الأنسجة قابلة للحياة عملية الأيض (الحمراء). مناطق نخرية لا صمة وحتى تظل باهتة (المذكورة). <img src="/files/ftp_upload/2581/2581fig2.jpg" alt="الشكل 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 2"> الشكل 2. ألف الهيماتوكسيلين وصمة عار يوزين هذه هي صورة الممثل (20X) من تلطيخ H &amp; E من قلب فأر قطع بالعرض من خلال المنطقة احتشاء في 4 أيام بعد MI (20X). * يدل على نخر الأنسجة ، وأشر إلى أسهم النسيج الحبيبي ، RV = البطين الأيمن والبطين الأيسر LV = باء. Picrosirius أحمر وأخضر سريع وصمة عار ، وهذا هوصورة الممثل (20X) الأحمر picrosirius / تلطيخ الأخضر سريع لشريحة من قلب فأر آخر في 4 أسابيع - MI. البقع الخضراء السيتوبلازم وألياف الكولاجين والحمراء. <img src="/files/ftp_upload/2581/2581fig3.jpg" alt="الشكل 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 3"> الشكل 3. ايفان الازرق توزيع بقع صبغة التالية حقن intramyocardial 6ul. هذه هي صورة ممثل تبين التوزيع العالمية وبطريق الجدار صبغة ايفان الازرق في جميع أنحاء القلب بعد الحقن intramyocardial 6ul في المنطقة الحدودية على الفور بعد عملية ربط الشريان التاجي (12X).

وتمت الموافقة على هذا البروتوكول من قبل الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعتها المؤسسات ورعاية الحيوان في اللجنة استخدم جامعة كارولينا الشرقية.

أمراض القلب والشرايين لا تزال تشكل وبائية وماليا كبيرا مشكلة صحية عامة. لا تزال هناك حاجة كبيرة البحوث الأساسية لفهم الآليات التي من الإصابات وإعادة تشكيل وكيفية المضي قدما العلاجات المحتملة قد تعدل هذه العمليات إذا أريد لها أن تكون المتقدمة للاستخدام السريري. هي الأكثر شيوعا القوارض ومجموعة واسعة من الفئران المعدلة وراثيا يجعل من هذه الأنواع المتاحة نموذج أكثر جاذبية. على الرغم من أن هناك اختلافات بين الفئران والأنواع الأخرى ، وهناك العديد من المزايا لنموذج الفئران. استخدام نطاق بسيط تشريح أو العدسة المكبرة ومضاءة جيدا ظروف تمكن من الأوعية الدموية بسهولة أن ينظر إليه (لتشريح تفصيلي لإجمالي الأوعية الدموية ، راجع سالتو تيليز ، وآخرون ، 2004 13). للحد من مخاطر وفيات بعد العمليات الجراحية ، من المهم جدا لتجنب قطع السفن الكبيرة منذ حجم الدم الكلي للماوس 25G أقل من 14 2ml. في حال حدوث نزيف حاد ، يمكن استخدام تطبيق لطيف الضغط أو الكي تحديد لوقف النزيف. ويمكن أيضا أن يتم تعديل هذا الإجراء في مجموعة متنوعة من الطرق. على سبيل المثال ، يمكن أن الفئران باستخدام تخدير isoflurane ، الكيتامين / زيلازين ، أو الصوديوم بنتوباربيتال ويتم تحديد الاختيار المناسب لمدة البروتوكول 15-18. منعكس في إصبع القدم قرصة هو المؤشر الأكثر استخداما لعمق التخدير. كذلك ، من أجل تحسين احتمال البقاء على قيد الحياة لمدة طويلة ، وبعض المحققين استخدام العقاقير مثل ارتفاع معدل ضربات القلب يدوكائين للحد من حالات عدم انتظام ضربات القلب المميتة من 19،20 ومع ذلك ، يجب أن يؤخذ في الاعتبار أنه قد تم مؤخرا أظهرت أن هذه الخصائص في antiapoptotic حادة نموذج 21. أيضا ، للحد من الألم بعد الجراحة ، يمكن أن تدار مثل المسكنات البوبرينورفين لأول 48 ساعة بعد الجراحة 3،16،17،22،23. للحفاظ على درجة حرارة الجسم أثناء الجراحة (وخاصة لفترة أطول بروتوكولات) ، وكثيرا ما يستخدم مسبار المستقيم في سلسلة مع وسادة التدفئة في المكان لوحة متساوي. لنقص التروية / ضخه و / أو قبل أو نقص تروية postconditioning : يمكن تغيير مدة إطباق (ق) وضخه (ق) ؛ ؛ لانسداد دائم ، ويمكن تعديل حجم احتشاء بتعديل موقع ضمد وحقن intramyocardial (خلايا مثلا ، والبروتينات) ، ويمكن أن تكون هناك أماكن الحقن 1-3 وحجم الواحد الحقن يمكن أن تصل إلى 15 24 ميكرولتر. إذا كان يتم حقن الخلايا ، وهو المقياس من الإبرة المستخدمة (26-30 عادة) وينبغي اختيار 5،25،26 استنادا إلى حجم الخلايا بحيث القطر الداخلي للإبرة كبيرة بما يكفي لتجنب sheering. لتجنب يفند بسبب العمليات الالتهابية الناجمة عن الجراحة ، وأفاد بعض المحققين باستخدام الفخ الذي يتلاعب فيفو السابقين لتسد وreperfuse في قلوب ماوس الصدر يغلق عند أي نقطة 27-29 بعد الجراحة. في الآونة الأخيرة ، وغاو وآخرون (30). أظهرت أنه لا يمكن أن يؤديها انسداد مؤقت ودائم من دون الحاجة للتهوية ومختبرات قليلة قد بدأت في استخدام الموجات فوق الصوتية لأداء المغلقة الصدر intramyocardial الحقن 25،31. منذ نشر أول دراسة تثبت جدوى ligating الشريان التاجي في الفئران عن طريق جونز وأولسون في عام 1954 32 ، وقد اعتمدت العديد من الآخرين على هذا النموذج وتعديله لدراسة الجوانب المختلفة لإصابة عضلة القلب وإعادة عرض 3،33-45. طبيعة الفئران من حيث الحجم ، والقدرة على الإنجاب ، وحساب أقل نسبيا لشراء وصيانة جعل هذه الأنواع وسيلة جذابة لمجموعة واسعة من الدراسات الفسيولوجية والفسيولوجية المرضية. كما التصغير التكنولوجيا من أجل التصوير في فيفو التقدم 46-49 ، فضلا عن وسائل لتنفيذ وتحليل الجينوم والبروتيوميات نطاق واسع ، وفحص المخدرات وفعالية من العلاجات المستندة إلى الخلايا و / أو البروتين وكذلك الحيوية 50-64 ، جنبا إلى جنب مع طائفة واسعة على نحو متزايد من التلاعبات الجينية التي توفرها في كل مكان معين أو الفئران المعدلة وراثيا أو الأنسجة متحولة / خروج المغلوب ، وهذا النموذج من الفئران احتشاء عضلة القلب مما لا شك فيه أن يستمر أداة لا تقدر بثمن في تقييم الإصابات القلبية الحادة وإعادة عرض على المدى الطويل. لذلك ، هناك قيمة لا يرقى إليه الشك في أن تكون قادرة على تنفيذ هذه التجارب بشكل موثوق وبتكاثر.

<table><tbody><tr><td>مقصات فانا الطويلة</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-159</td><td></td></tr><tr><td>مقصات تشريح دقيقة</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-161</td><td></td></tr><tr><td>ملقط &amp;#8211; مستقيم، بسنتين 1x2</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>105-205</td><td></td></tr><tr><td>مقبض مشرط رقم 3</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>105-64</td><td>شفرة معقمة رقم 10</td></tr><tr><td>ملقط &amp;#8211; نصف منحني ومسنن</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-19</td><td></td></tr><tr><td>مقصات أنسجة</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>105-410</td><td></td></tr><tr><td>حامل إبر كاستروفيجو</td><td>Miltex Inc.</td><td>18-1828</td><td></td></tr><tr><td>مبعد عين كوك</td><td>Miltex Inc.</td><td>18-63</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II 8-0</td><td>Suture Express</td><td>VP-900-X</td><td></td></tr><tr><td>Prolene 6-0</td><td>Suture Express</td><td>8776</td><td></td></tr><tr><td>جهاز تعقيم بالخرز Germinator 500</td><td>Cellpoint Scientific</td><td>65369-1</td><td></td></tr><tr><td>وسادة Deltaphase متساوية الحرارة</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>39DP</td><td></td></tr><tr><td>سرنجة هاميلتون - 25&amp;mu;l</td><td>Hamilton Co</td><td>80430</td><td></td></tr><tr><td>إبرة مشطوفة قياس 30</td><td>Hamilton Co</td><td>7803-07</td><td></td></tr><tr><td>جهاز تنفس صناعي</td><td>Kent Scientific</td><td>TOPO</td><td></td></tr></tbody></table>

الشريان التاجي ربط intramyocardial وحقن الفئران في نموذج من احتشاء

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

تعد نماذج الفئران أداة قيمة لدراسة الإصابة الحادة وإعادة التشكيل المزمن لعضلة القلب in vivo. ومع ظهور التعديلات الجينية للكائن الحي بأكمله أو لعضلة القلب، ومجموعة من المواد البيولوجية و/أو الاصطناعية، هناك إمكانات كبيرة لأي مزيج من هذه الوسائل للتخفيف من مدى الإصابة الإقفارية الحادة ومنع حدوث فشل القلب الناتج عن إعادة تشكيل عضلة القلب.
نقدم هنا المواد والطرق المستخدمة لإجراء هذه الجراحة المجهرية بشكل موثوق، والتعديلات المتبعة في دراسات انسداد الشريان التاجي المؤقت (مع إعادة التروية) أو الدائم، بالإضافة إلى عمليات الحقن داخل عضلة القلب. وسيتم التحقق من الفعالية من خلال مراقبة التأثيرات على القلب التي يمكن ملاحظتها أثناء الإجراء وعند نهاية التجربة، بالإضافة إلى التقييم النسيجي.
باختصار، تتضمن التحضيرات الجراحية تخدير الفئران، وإزالة الفراء من منطقة الصدر، ثم تعقيم منطقة الجراحة. ويتم إجراء التنبيب الرغامي عن طريق الإضاءة عبر المريء باستخدام ضوء الألياف البصرية، ثم يتم توصيل الأنبوب بجهاز تنفس اصطناعي. وبإجراء شق في الصدر، تظهر العضلات الصدرية التي يتم قصها لرؤية الأضلاع. وفي دراسات نقص التروية/إعادة التروية، يتم استخدام قطعة من أنبوب PE بطول 1 cm توضع فوق القلب لربط الرباط بها، بحيث يمكن تخصيص عملية الانسداد/إعادة التروية. أما بالنسبة للحقن داخل عضلة القلب، فتُستخدم حقنة Hamilton مع إبرة مشطوفة معقمة قياس 30gauge. وعند الانتهاء من عمليات معالجة عضلة القلب، يتم إغلاق القفص الصدري والعضلات الصدرية والجلد بالتتابع. ويتم تحقيق التسكين عن طريق حصار الأعصاب (line block) باستخدام marcaine بتركيز 0.25% في محلول ملحي معقم، حيث يُطبق على الطبقة العضلية قبل إغلاق الجلد. تُعطى الفئران حقنة تحت الجلد من المحلول الملحي وتوضع في غرفة تدفئة حتى تصبح في وضعية الاستلقاء الظهري. بعد ذلك، يتم إعادتها إلى وحدة تربية الحيوانات (vivarium) وإيواؤها في ظروف قياسية حتى موعد جمع الأنسجة. وعند وقت التضحية، يتم تخدير الفئران، وإيقاف القلب في مرحلة الانبساط باستخدام KCl أو BDM، ثم شطفه بالمحلول الملحي وغمره في المادة المثبتة. لاحقاً، يتم تنفيذ الإجراءات الروتينية للمعالجة، والصب، والتقطيع، والتلوين النسيجي.
إن عملية التنبيب غير الجراحي للفأر والتلاعبات الجراحية المجهرية الموضحة تجعل من هذا النموذج تحدياً تقنياً في التعلم وتحقيق القابلية للتكرار. كما أن هذه الإجراءات، مقترنة بصعوبة إجراء تلاعبات متسقة لرباط الربط لتحقيق انسدادات محددة زمنياً وإعادة التروية أو الحقن داخل عضلة القلب، يمكن أن تؤثر أيضاً على معدل البقاء على قيد الحياة، لذا فإن التحسين والاتساق أمران بالغا الأهمية.

يتم فرضه التلاعب الجيني عديدة و / أو الحقن intramyocardial من الجينات والبروتينات ، والخلايا ، و / أو المواد الحيوية على البعد من الوقت في دراسة إصابات نقص التروية / ضخه الحادة والمزمنة في إعادة عرض الفئران. هذا الفيديو يوضح الإجراءات المجهرية لنقص التروية / ضخه دائمة ربط الشريان التاجي ، والدراسات intramyocardial الحقن.

الشريان التاجي ربط Intramyocardial وحقن الفئران في نموذج من احتشاء

تُعد نماذج الفئران أداة قيمة لدراسة الإصابة الحادة وإعادة التشكيل المزمن لعضلة القلب في الجسم الحي. ومع ظهور التعديلات الجينية لـ...

الهدف العام من التجربة التالية هو توضيح الطرق الجراحية المجهرية لإجراء ربط مؤقت أو دائم للشريان التاجي، بالإضافة إلى الحقن داخل عضلة القلب في قلب الفأر. ويتم تحقيق ذلك أولاً من خلال تحضير وتعقيم المنطقة الجراحية. ثم يتم إجراء تنبيب للفأر باستخدام أنبوب PE 90 لتوفير تهوية بضغط إيجابي أثناء عملية بضع الصدر.بمجرد عزل الشريان التاجي، يمكن إغلاقه إما بشكل مؤقت أو دائم. بالإضافة إلى ذلك، يمكن حقن مادة في القلب. ويتم الحصول على نتائج توضح درجة الإصابة التي لحقت بالقلب بناءً على نقاط النهاية النسيجية والمورفومترية، وعلامات بروتين الأنسجة والمصل، بالإضافة إلى المؤشرات الوظيفية.اسمي TKA Rag وأعمل في قسم الفسيولوجيا بكلية برودي للطب في جامعة شرق كارولينا. الغرض من هذا الفيديو هو توضيح الإجراءات الجراحية المجهرية المستخدمة في ربط الشريان التاجي المؤقت والدائم، بالإضافة إلى الحقن داخل عضلة القلب في قلب الفأر. للبدء، ضع الأدوات الجراحية المعقمة ومسحات قطنية بطول ثلاث بوصات على وسادة امتصاص معقمة.قم بعد ذلك بتشغيل جهاز تعقيم الخرز ليكون جاهزاً لتعقيم الأدوات بين العمليات الجراحية الفردية. ولتحضير الحيوان للجراحة، ضع مزلقاً معقماً على عيني فأر مخدّر. بعد ذلك، قم بإزالة الفراء من الجانب الأيسر من الصدر باستخدام عامل إزالة الشعر، مثل nare.امسح كريم إزالة الشعر جيداً لتجنب حدوث حروق كيميائية أو التهاب الجلد. ضع الفأر على وسادة متساوية الحرارة من طور دلتا مثبتة على طاولة من البلكسي جلاس. قم بتثبيت كل طرف باستخدام شريط لاصق، وضع خيطاً سميكاً تحت الأسنان العلوية لتثبيت الفك العلوي في مكانه.امسح موقع الجراحة باستخدام Betadine ثم الكحول لثلاث مرات إجمالاً. استخدم ضوءاً بالألياف البصرية لإضاءة منطقة الرقبة للمساعدة في رؤية الرغامي أثناء إدخال أنبوب PE. وبمجرد الإضاءة، أدخل الأنبوب بعناية عبر الفم.قم بتوصيل الأنابيب بجهاز تنفس اصطناعي لإعطاء تهوية بالضغط الإيجابي. وبمجرد التأكد من التهوية من خلال حركات الصدر المتزامنة، قم بتثبيت التوصيلة على الوسادة باستخدام شريط لاصق لإبقائها في مكانها. وأثناء الجراحة، استخدم ملقطاً مسنناً لسحب الجلد للأعلى وبعيداً عن الصدر ولإجراء شق جراحي بطول 1.5 سنتيمتر في الجلد بشكل موازٍ لعظمة القص.بعد ذلك، استخدم مقصات Vana الدقيقة المنحنية لقطع العضلات الصدرية ولعمل ثقب صغير في العضلة الوربية. بعد إزاحة العضلة، استخدم مقصات دقيقة مستقيمة غير حادة للقطع عبر ثلاثة أضلاع. استخدم المباعد لإزاحة القفص الصدري.افتح كيس التأمور برفق لرؤية القلب باستخدام حامل إبر TRO Viejo وخيط إبرة مدبب، مع وضع غرزة بولي إيثيلين أسفل الشريان التاجي الأمامي النازل لعمل رباط مؤقت يمكن إزالته. من أجل إعادة التروية الموقوتة، اقطع قطعة من PE 90 بطول 0.5 إلى 1 سم وضعها على القلب. وبشكل موازٍ للشريان التاجي، اربط الغرزة الملتفة أسفل الشريان التاجي بالأنبوب. بعد مرور فترة زمنية محددة، قم بفك الرباط للسماح بإعادة التروية لإجراء انسداد دائم.يتم ربط الرباط الممرر تحت الشريان التاجي. يجب أن يظهر الشحوب واختلال الحركة. يتم قطع الطرف الطويل من الخيط الجراحي من أجل الحقن داخل عضلة القلب، ثم يتم إدخال إبرة معقمة عيار 30 في قاعدة القلب فوق منطقة الإصابة إلى يمين الرباط.قم بدفع الإبرة وصولاً إلى منطقة الإصابة واسحبها قليلاً بحيث يظهر شطب الإبرة تقريباً عند المنطقة الحدية. احقن كمية صغيرة من المحلول وثبّت الإبرة في مكانها. اسحب المحقنة مسافة تتراوح بين واحد إلى ثلاثة مليمترات أخرى، ثم احقن بقية المحلول.ثبّت المحقنة في مكانها حتى يتلاشى الدم الذي تشكل بسبب المحلول. وبمجرد تلاشيه، اسحب الإبرة. وفي حالة حدوث نزيف، اضغط برفق باستخدام مسحة قطنية على الموقع حتى يتوقف النزيف.بمجرد الانتهاء من عمليات معالجة عضلة القلب، قم بإزالة مباعدات الأضلاع وإغلاق التجويف الصدري باستخدام غرزتين إلى ثلاث غرز مرتبية. بعد ذلك، قم بإغلاق العضلات الصدرية بغرزتين إلى ثلاث غرز مرتبية. ضع قطرة إلى ثلاث قطرات من marking بتركيز 0.25% في محلول ملحي معقم على العضلة، واستخدم غرزتين إلى ثلاث غرز مرتبية إضافية لإغلاق الجلد.قم بإزالة الفأر من جهاز التنفس الاصطناعي وتحقق من وجود تنفس سطحي سريع وإيقاعي. احقن 0.5 milliliters من المحلول الملحي المعقم الدافئ في الحيز تحت الجلد الظهري، ثم ضع الفأر في قفص يحتوي على وسادة تدفئة حتى يستعيد القدرة على الحركة. بالنسبة لتجارب البقاء على قيد الحياة، يُعاد وضع الفئران في أقفاصها الأصلية وتُرجع إلى مكان التربية (vivarium) حتى يحين وقت التضحية.امسح الأدوات الجراحية جيداً باستخدام الإيثانول وأدخلها في جهاز التعقيم بالخرز. وللتحضير للجراحة التالية لجمع العينات من أجل التحليل، قم بعزل القلب وثقب المنطقة القاعدية الخلفية للبطين باستخدام إبرة تحتوي على كلوريد البوتاسيوم البارد، أو محلول ثنائي أكسيد البيوتان. احقن المحلول ببطء في الحجرة حتى يتوقف القلب في مرحلة الانبساط. ثم أخرج القلب وقم بترويحه باستخدام PBS لإزالة أي بقايا دم.بمجرد انتهاء عملية التروية، يُغمر القلب في المثبت، ثم يتمت معالجته وطمره وفقاً للإجراءات الروتينية. ويمكن رؤية الإصابة الحادة الناتجة عن الربط المؤقت من خلال التلوين. في هذه الصورة، تتوزع الصبغة الزرقاء في المناطق المسدودة من القلب، بينما يشير تلوين TTC إلى الأنسجة الحية استقلابياً.تظهر المناطق النخرية باللون الأحمر حيث لا تصبغ وبالتالي تظل باهتة. يمكن استخدام برنامج التصوير لحساب المنطقة المعرضة للخطر كدالة للبطين الأيسر، ومساحة الاحتشاء كدالة للمنطقة المعرضة للخطر. في هذا المثال، تم قطع قلب مصاب عرضياً عبر منطقة الاحتشاء، بعد أربعة أيام من احتشاء عضلة القلب (mi)، وصُبغ باستخدام hemat و hematin و eoin.تشير النجمة إلى نخر الأنسجة بينما تشير الأسهم إلى صبغ الكولاجين في النسيج الحبيبي باستخدام صبغة prose. ويمكن استخدام صبغتي الأحمر السيريس (Sirius red) والأخضر السريع (fast green) لقياس التليف الخلالي، والذي يرتبط بالمؤشرات الوظيفية لتصلب الجدار. تُظهر هذه الصورة لقلب فأر بعد أربعة أسابيع من احتشاء عضلة القلب (mi) السيتوبلازم باللون الأخضر وألياف الكولاجين باللون الأحمر.تمثل هذه السلسلة من الصور توزيع ستة ميكرولترات (6 µL) من محلول صبغة إيفانز الزرقاء (Evan's blue) التي حُقنت في المنطقة الحدودية للقلب بعد ربط الشريان بشكل دائم. لاحظ أن الصبغة تتقدم في اتجاه الإصابة وكذلك نحو القاعدة، وأيضاً عبر الجدار. إن تصوير الشريان التاجي وإغلاقه بشكل موثوق يمثل تحدياً كبيراً ويتطلب الكثير من الممارسة لإتقانه.من المهم جداً تذكر تجنب ثقب الرئتين أثناء الإجراء، بالإضافة إلى تجنب إخراج الأنبوب الرغامي من الحيوان خلال المناورات الجراحية.

coronary-artery-ligation-intramyocardial-injection-murine-model

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

هذا الفيديو يوضح كيفية استخدام نموذج سريعة وموثوق بها لدراسة العمليات الفيزيولوجية المرضية وpathobiological من نقص تروية عضلة القلب.

LAD - الربط : نموذج الفئران من احتشاء عضلة القلب

العملية الجراحية المستخدمة للحث على احتشاء عضلة القلب التجريبية في الفئران يبدأ بضع الصدر الأيسر بين الثالث والرابع في الأضلاع أجل رؤية سطح الأمامي للقلب والرئة اليسرى. وligated التاجي الأيسر الشريان، يتم إغلاق الصدر ويسمح الماوس لاسترداد تلقائيا.

تقنية لربط تعديل الشريان التاجي في الفئران

في هذا الفيديو ، نصف إجراء جراحيا لتوليد نموذج فأر لاحتشاء عضلة القلب عن طريق ربط الشريان التاجي الأمامي الأيسر الهابط بشكل دائم.

توليد نموذج الفئران لاحتشاء عضلة القلب: إجراء جراحي للربط الدائم للشريان التاجي الأمامي الأيسر الهابط في نموذج الفأر

ونحن نقدم طريقة جراحية للحث التجريبية نقص التروية / ضخه (I / R) إصابة لمحاكاة احتشاء عضلة القلب (MI) في نماذج الماوس التي تسمح لمزيد من الوضوح في تحديد المواقع للربط على الشريان الأمامي الأيسر تنازلي (LAD) لزيادة التكاثر من التجارب MI في الفئران.

A الفئران نموذج من عضلة القلب إصابة نقص التروية، ضخه من خلال ربط الشريان الأمامي اليسار تنازليا

تم وصف نموذج قابل للتكرار بدرجة كبيرة لاحتشاء عضلة القلب في الفئران ذات الحد الأدنى من التلاعب الغازي. يمكن تنفيذ النموذج بسهولة ، مما يؤدي إلى ارتفاع معدل التكاثر والبقاء على قيد الحياة. وبالتالي ، فإن النموذج الموصوف سيقلل من عدد المطلوبة كما هو مطلوب في مبدأ 3R (الاستبدال والصقل والتخفيض).

الحد الأدنى من الإجراءات الجراحية للتحريض احتشاء عضلة القلب في الفئران

قصور القلب هو السبب الرئيسي للدخول إلى المستشفى وسبب رئيسي للوفاة. يتم تطبيق نموذج للربط الدائم للشريان التاجي الأمامي الأيسر الهابط في الفئران للتحقيق في إعادة تشكيل البطين والخلل الوظيفي في القلب بعد احتشاء عضلة القلب. يتم تقديم تقنية قياسات ديناميكا الدم الغازية في الفئران.

ربط دائم في الشريان التاجي الأيسر الأمامي تنازلي في الفئران: نموذج ما بعد إعادة تشكيل عضلة القلب احتشاء وقصور القلب

نحن نقدم طريقة موثوقة لربط الشريان الهابط الأمامي الأيسر (LAD) في نموذج الفأر. هذه الطريقة أقل توغلا نسبيا من الطرق الأخرى ، بما في ذلك التنبيب الرغامي ، ونهج بضع الصدر على الجانب الأيسر ، وبزل الصدر. يمكن استخدام هذه الطريقة كنموذج لكل من احتشاء عضلة القلب الحاد والمزمن (MI).

الفئران اليسار الأمامي تنازلي (LAD) التاجي ربط الشريان: نموذج تحسين والمبسطة لاحتشاء عضلة القلب

هنا نقوم بوصف إجراء جراحي يوضح كيفية تحقيق الربط الدائم للشريان التاجي الأمامي الأيسر في الفئران. هذا النموذج ذو أهمية كبيرة للتحقيق في الفيزيولوجيا المرضية لاحتشاء عضلة القلب والعمليات البيولوجية المصاحبة.

نموذج احتشاء عضلة القلب Murine باستخدام الربط الدائم للشريان التاجي الأمامي الأيسر

يوضح هذا المقال نموذجا لدراسة إعادة عرض القلب بعد إصابة التبريد عضلة القلب في الفئران.

نموذج الإصابة بالتبريد لدراسة احتشاء عضلة القلب في الماوس

يظهر هنا إجراء جراحي للربط الدائم للشريان التاجي الأيسر في الفئران. يمكن استخدام هذا النموذج للتحقيق في الفيزيولوجيا المرضية والاستجابة الالتهابية المرتبطة بها بعد احتشاء عضلة القلب.

ربط الشريان التاجي الأيسر: نموذج الفئران الجراحي لاحتشاء عضلة القلب

تعلم تقنيات الجراحة الدقيقة لربط الشريان التاجي والحقن داخل عضلة القلب في الفئران. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة إصابات نقص التروية وإعادة التروية في نماذج احتشاء عضلة القلب.

الشريان التاجي ربط Intramyocardial وحقن الفئران في نموذج من احتشاء

استكشف المزيد من الفيديوهات