Name: المبادئ الأساسية لتنقية باستخدام السوائل فوق الحرجة الكروماتوجراف -- إعلان (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-11T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 32 s
Description: تعلم مبادئ الكروماتوجرافيا فوق الحرجة التحضيرية لعزل المركبات بكفاءة عالية. يوضح هذا البحث تأثير معدل التدفق وذوبان العينة وانتقائية العمود على جودة الفصل وقابلية التوسع.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

1. تحضير العينة <ul class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيج مركب 1 : الكومارين ، ايبوبروفين ، وكاربامازيبين ؛ 20 ملغ / مل في كل من الميثانول </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيج مركب 2 : ايبوبروفين وكاربامازيبين ؛ 20 ملغ / مل في كل من الميثانول </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيج مركب 3 : ايبوبروفين وكاربامازيبين ؛ 20 ملغ / مل في كل DMSO (سلفوكسيد ثنائي ميثيل) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيج مركب 4 : 10 ملغ / مل فينوبروفين ، 15 ملغ / مل كيتوبروفين ، 20 ملغ / مل فلافون ، 20 ملغ / مل ايبوبروفين ، و 20 ملغ / مل الكومارين في الميثانول </li></ul> 2. الشروط التجريبية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجري التحليل اللوني على نظام أسلوب محطة مياه SFC. العمود : 2 - البلدي SFC Ethylpyridine العمود ، 5 ميكرون ، 4.6 × 150 مم ، الجزء رقم 186004937. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم تنفيذ التحضيرية اللوني على الإعدادية ووترز 100 نظام الأشعة فوق البنفسجية SFC إخراج. الأعمدة : <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> SFC البلدي العمود OBD - 2 Ethylpyridine ، 5 ميكرون ، 19 × 150 مم ، الجزء رقم 186004945 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> OBD البلدي السيليكا SFC العمود ، 5 ميكرون ، 19 × 150 مم ، الجزء رقم 186004918 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> SFC البلدي العمود OBD - 2 Ethylpyridine ، 5 ميكرون ، 19 × 100 مم ، الجزء رقم 186004944 </li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معلمات الطريقة الأخرى : <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> درجة الحرارة العمود : 40 درجة مئوية </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cosolvent : الميثانول </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حجم الحقن ، ومعدل التدفق ، والتدرجات : أفاد في أرقام </li></ul></li></ol> 3. ممثل النتائج معدل التدفق ويقتصر معدل التدفق المستخدمة في فصل LC التحضيرية من قبل عدد من العوامل بما في ذلك طول وقطر العمود ، وحجم الجسيمات ، والضغط الخلفي النظام. ثاني أكسيد الكربون المنخفضة اللزوجة ، والمكون الرئيسي للمرحلة المحمول في SFC ، وتمكن من استخدام معدلات التدفق من تلك التي تستخدم عادة في اللوني السائل. من الضغط الخلفي المرتبطة طول العمود أقل أيضا ، مما يعد استخدام الأعمدة لزيادة دقة. ارتفاع معدلات تدفق زيادة الإنتاجية عن طريق تقليل كمية من الوقت لاستكمال الانفصال. كما هو مبين في الشكل 1 ، والوضع الكروماتوغرافي هو نفسه في معدلات تدفق مختلفة شريطة أن المنحدر من التدرج في التغيير وأعرب في المائة في حجم العمود لا تزال مستمرة.. ويتم إنجاز ذلك عن طريق تقليل وقت التشغيل بنفس النسبة كما هو زيادة معدل التدفق. <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig1.jpg" alt="الشكل 1" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="الشكل 1"> حل عينة وتحميل المذيبات عزل المركبات من الخلائط يتطلب أن تكون العينة للذوبان تماما قبل الحقن. والميثانول ، والأكثر شيوعا المشترك المذيبات في SFC ، لا solubilize جميع العينات في التركيزات العالية المطلوبة عادة لفصل إعدادي نموذجي. يمكن أن كميات كبيرة من المذيبات مثل الميثانول تحد من قدرة كتلة العمود وذلك بسبب الآثار التي يمكن أن المذيبات قوية تشوه اللوني. تم تصميم معدل حقن تيار ، التكوين القياسية على براءة اختراع من جميع النظم ووترز SFC الإعدادية ، للحد من تأثير هذه المذيبات. يستخدم ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) بشكل منتظم في المختبرات لتنقية solubilize العديد من أنواع مختلفة من المركبات. الشكلين 2 و 3 لتوضيح كيفية حقن DMSO في SFC يمكن أن يؤدي إلى ارتفاع التحميل ودقة أفضل للتطبيقات achiral مقارنة عينات حقنه في الميثانول. ملاحظة : للحصول على التطبيقات مراوان ، وينبغي النظر بحذر DMSO كما يمكن أن تضر بشدة المغلفة مراوان المرحلة التقليدية الثابتة. إذا كان يجب أن تكون هناك حاجة للذوبان في العينة DMSO ، ينبغي اختيار عمود يجمد مراوان. <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig2.jpg" alt="الشكل 2" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="الشكل 2"> <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig3.jpg" alt="الشكل 3" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="الشكل 3"> الانتقائية في SFC ، يتم اختبار روتيني لتحديد عدة أعمدة الذي يوفر أفضل وشكل القرار الذروة للمكونات في الخليط. قرار جيد بين المركبات يؤدي إلى العزلة من المركبات المستهدفة مع درجة نقاوة عالية. في المثال أدناه ، العمود 2 - ethylpyridine يبين الفصل ممتازة لجميع المركبات الخمسة في خليط العينة. الخليط نفس العينة تحليلها على عمود السيليكا يظهر سوى ثلاث قمم المكون لأنه يحتوي على الانتقائية المختلفة. الكومارين والإيبوبروفين coelute بنحو 0.8 دقائق وفلافون وcoelute فينوبروفين في وقت لاحق قليلا. فلافون والإيبوبروفين أيضا تغيير النظام شطف على العمود السيليكا. كيتوبروفين جيدا من كل فصل من قمم أخرى في كلا العمودين. <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig4.jpg" alt="الشكل 4" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="الشكل 4"> التحجيم عادة يتم تحليل عينة الخام مخاليط مع التدرج الفرز الذي يبدأ من نسبة منخفضة من المذيبات العضوية وينتهي عند نسبة أعلى من المذيبات العضوية في فترة زمنية قصيرة نسبيا. إذا كان يتم حلها بشكل جيد للمركبات ذات الأهمية ، قد يمكن تحجيمها التدرج مباشرة لتنقية. عندما تكون جميع المركبات أزل قبل عشر(ه) من إتمام الانحدار ويتم حلها بشكل كامل ، وتخفيض بسيط في طول التدرج هو مقبول. معدلات تدفق سريع المستخدمة في SFC جنبا إلى جنب مع التدرجات تعديل تقصير كبير في مجموع الوقت اللازم لتنقية المركبات المستهدفة. فصل التوسع يتطلب مطابقة الكيمياء العمود وحجم الجسيمات ، وكذلك حقن كميات تحجيم مناسب والتدرجات. مياه معبأة التحضيرية الأعمدة SFC مع تقنية OBD ، وضمان الاستقرار ممتازة السرير والأداء مقارنة الأعمدة ووترز SFC التحليلية. معبأة OBD أعمدة السرير التحضيرية لكثافة المباراة التي تعادل نحو وثيق العمود التحليلية. هذا الإجراء مبتكرة تنتج الأعمدة تحضيري مع الاستقرار ممتازة ، واستنساخ ، والكفاءة. وأجريت دراسة التحميل في نطاق ضيق لتحديد مدى يمكن تحميل كتلة العينة على العمود. والهدف هو تحقيق أقصى قدر من المشقة دون المساس القرار. القرار ذروة تحسن يؤدي إلى ارتفاع الأحمال وتحسين نقاء للمركبات معزولة. أعلى العمود تحميل يقلل من عدد من يدير المطلوبة للحصول على ما يكفي من المواد لإجراء التجارب اللاحقة. وصفت اللوني من الدراسة التحميل في الشكل 5. المحافظ 35 ميكرولتر يبين حجم الحقن قرار جيد بين جميع المركبات في المزيج وتحجيمها لاحقا لتشغيل التحضيرية على عمود كبير. تم حقن وحدة تخزين ما مجموعه 600 ميكرولتر على عمود 19 × 150 مم SFC التحضيرية. الشكل 6 يقارن به التدرج اللوني الصغيرة تعديل في الحمولة القصوى مع اللوني واسعة النطاق تستخدم لعزل. الانتقائية هي متطابقة ، عاملا حاسما عند استخدام اللوني التحليلية كأداة لعزل الكشفية والاختلاف في الوقت الاحتفاظ purification.The والقرار بين التحليلية وchromatograms التحضيرية يمكن أن تعزى إلى عوامل من بينها حجم ووضع نظام الحقن. على وجه الخصوص ، ويعمل على براءة اختراع معدل الدفق حقن * وضع لجميع النظم ووترز SFC التحضيرية ، والتقليل من تأثير المذيبات ، وبالتالي تحسين الإنتاجية والكفاءة. * براءة الاختراع الأمريكية # 6576125 <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig5.jpg" alt="الشكل 5" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="الشكل 5"> <img src="/files/ftp_upload/2604/2604fig6.jpg" alt="الشكل 6" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="الشكل 6">

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

<ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن تطبيق المبادئ الأساسية للاللوني السائل اللوني السائل فوق الحرج (SFC). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن تشغيل اللوني السائل فوق الحرج في معدلات التدفق المتزايد العزلة صنع أسرع وزيادة الإنتاجية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن حله مع عينات محدودة للذوبان في ثنائي ميثيل سلفوكسيد وتنقيتها باستخدام SFC. باستخدام عينة DMSO عن حل يجعل عملية تنقية أسهل عن طريق الحد من عدم اليقين المرتبط الذوبان في العينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن تحسين القرار وتحميل العينات الذائبة في DMSO بالمقارنة مع نفس العينات الذائبة في الميثانول. أفضل نموذج القرار يؤدي إلى المنتجات مع ارتفاع النقاء. أعلى تحميل يحسن كفاءة عملية التنقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الانتقائية العمود آثار فصل مكونات الخليط. فرز أعمدة مختلفة مع التدرجات سريع يؤدي إلى اتخاذ قرار حول أي عمود التحضيرية لاستخدامها لعزل المركبات الموجودة في العينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> القدرة على النطاق بين التحليلية وأعمدة التحضيرية OBD يؤدي إلى فصل مماثلة على مستويات كل صغيرة وكبيرة ، شريطة أن يتم تحجيم حجم الحقن ، والمنحدر ، والوقت بشكل صحيح التدرج والكيمياء وحجم الجسيمات تظل ثابتة. التدرجية العمود يزيل الغموض في تحديد الذروة ، مما يسهل عملية تنقية أعلى كفاءة. </li></ul>

<table><tbody><tr><td>طريقة محطة SFC نظام</td><td>المياه</td><td>مزيد من المعلومات متوفرة في www.waters.com</td><td>نظام SFC التحليلي</td></tr><tr><td>SFC-UV Prep 100</td><td>Waters</td><td>مزيد من المعلومات متوفرة في www.waters.com</td><td>Preparative SFC System</td></tr><tr><td>Viridis&# 8482; SFC 2-إيثيل بيريدين ، 4.6 × 150 مم ، 5 مو ؛ م عمود</td><td>ووترز</td><td>186004937</td><td>عمود كروماتوغرافيا SFC التحليلي</td></tr><tr><td>Viridis &# 8482 ؛ SFC 2-Ethylpyridine OBD &# 8482 ؛ ، 19 × 150 مم ، 5 & م عمود</td><td>المياه</td><td>186004945</td> عمود <td>كروماتوغرافيا SFC الإعدادي</td></tr><tr><td>Viridis &# 8482 ؛ SFC السيليكا OBD & # 8482 ؛ ، 19 × 150 مم ، 5 & م عمود</td><td>المياه</td><td>186004918</td><td>عمود كروماتوغرافيا SFC التحضيري</td></tr><tr><td>Viridis &# 8482 ؛ SFC 2-Ethylpyridine OBD &# 8482 ؛ ، 19 × 100 مم ، 5 & م عمود</td><td>المياه</td><td>186004944</td><td>عمود كروماتوغرافيا SFC التحضيري</td></tr></tbody></table>

المبادئ الأساسية لتنقية باستخدام السوائل فوق الحرجة الكروماتوجراف -- إعلان

Basic Principles for Purification Using Supercritical Fluid Chromatography - ADVERTISEMENT

على الرغم من فوق الحرج اللوني السائل (SFC) ليست تقنية جديدة ، إعدادي SFC أصبح أكثر شعبية متزايدة مع التقدم في مجال البرمجيات ، والأجهزة والكيمياء. المبادئ الأساسية لعزل المركبات مع SFC مشابهة للقواعد الأساسية للواسعة النطاق اللوني السائل التحضيرية. في هذه الدراسة ، نحن لتوضيح تأثير معدل التدفق ، وانحلال العينة المذيبات ، والانتقائية العمود على عزل المركبات من الخليط. أعمدة السرير محملة الكثافة المثلى (OBD) التكنولوجيا (1) والمطابقة مع الكيمياء ضمان قابلية سهلة ويمكن التنبؤ بها من النطاق الضيق إلى فصل أكبر التحضيرية.

المبادئ الأساسية لفصل مخاليط من مركبات باستخدام اللوني السائل فوق الحرج (SFC) مماثلة لأساسيات اللوني السائل التحضيرية.

Although supercritical fluid chromatography (SFC) is not a new technique, preparative SFC is becoming increasingly more popular with advances in ...

basic-principles-for-purification-using-supercritical-fluid

Without Section

ويتم تحديد تركيبة الدهون مقتطفات القطبية وتكوين الأحماض الدهنية glycerolipids الفردية في التجربة الدهون التنميط بسيطة وقوية. لهذا الغرض ، يتم عزل glycerolipids بواسطة طبقة رقيقة اللوني وتعرضوا لنقل الميثيل من مجموعاتهم أسيل. وكميا methylesters أسيل الدهنية بواسطة الغاز السائل اللوني.

Arabidopsis thaliana التنميط Glycerolipid القطبية التي اللوني طبقة رقيقة (TLC) اقترن اللوني الغاز السائل (GLC)

تم وصف طريقة لقياس علامات الحيوية في الأطفال حديثي الولادة نقص الأكسجين ، نقص التروية. هذا النهج يستخدم ارتفاع ضغط اللوني السائل (HPLC) واللوني للغاز طيف الكتلة (GC / MS).

البيوكيميائية قياس حديثي الولادة نقص الأكسجة

ويقدم وسيلة لتحديد الآلية المناسبة اللوني تفاعل مسعور (HIC) وسائل الاعلام لاستخدامها في عملية تنقية البروتين. أسلوب يستخدم لاللوني السائل المتوسطة بما في ذلك الضغط نظام مزج العازلة الآلي، وحقن الديناميكية حلقة العينة، واختيار عمود متسلسلة، وتحليل متعدد الطول الموجي، وجمع الانقسام شطافة الكسر.

آلية التفاعل اللوني مسعور اختيار عمود للاستخدام في تنقية البروتين

هنا ، نحن تصف وضع بروتوكول لتنقية نشطة للغاية Hsp104 ، وهو AAA + hexameric البروتين من الخميرة ، والتي المائي ATP الأزواج على تصنيفها البروتين. هذا المخطط يستغل بناء His6 الموسومة لتنقية تقارب...

تنقية Hsp104 ، وهو بروتين Disaggregase

سيوضح هذا البروتوكول استخراج وتحليل الأحماض الدهنية النشطة بيولوجيا الحرة والأستريفة من الخلايا. يتم قياس الأحماض الدهنية بدقة باستخدام تخفيف النظائر المستقرة ، والكروماتوغرافيا السائلة اللولبية ، والتأين الكيميائي في الغلاف الجوي ، وقياس الطيف الكتلي لمراقبة التفاعل المتعدد (SID-LC-ECAPCI-MRM / MS).

الخلوية لاستخراج الدهن المستهدفة التخفيف النظائر المستقرة تحليل السائل الطيف اللوني القداس

ووصف طريقة سريعة لتحليل مركب متطاير في الفاكهة. ويفصل بسرعة المتطايرة موجودة في فراغ الرأس من جناسة من العينة والكشف مع اللوني للغاز فائقة السرعة (GC) إلى جانب وجود سطح الموجة الصوتية (SAW) الاستشعار. ويناقش أيضا إجراء لمعالجة البيانات وتحليلها.

تحليل الفاكهة المتطايرة باستخدام الأنف الالكتروني

يوصف بروتوكول الأساسية للانفصال شظايا من الحمض النووي باستخدام الجل الاغاروز الكهربائي.

الاغاروز الكهربائي للهلام لفصل أجزاء الحمض النووي

العظة حاسة الشم التوسط السلوكيات المختلفة في الحشرات، وغالبا ما تكون معقدة هي مزيج يتألف من عشرات إلى مئات من مركبات طيارة. باستخدام كروماتوغرافيا الغاز مع تسجيل متعدد القنوات في الفص antennal الحشرات، ونحن تصف طريقة لتحديد المركبات النشطة بيولوجيا.

تحديد مواد متطايرة الشم باستخدام الغاز اللوني موضوع وحدة تسجيلات (GCMR) في الفص Antennal الحشرات

التنميط غير المستهدف عن طريق الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء إلى جانب قياس الطيف الكتلي (UPLC-MS) هي تقنية قوية للتحقيق في عملية التمثيل الغذائي.  توضح هذه المقالة سير العمل النموذجي المستخدم في تحديد ملامح الأيض غير المستهدف للمصل بما في ذلك تنظيم العينة وإعدادها ، والحصول على البيانات ، وتحليل البيانات ، ومراقبة الجودة ، وتحديد المستقلب.

نطاق واسع غير المستهدفة التنميط Metabolomic من المصل بواسطة الترا الطيف الأداء اللوني الكتلة السائل (UPLC-MS)

يوفر تشتته الايض فرضية توليد قطة من الملف الشخصي الأيضية. سوف يشكل هذا البروتوكول شرح استخراج وتحليل نواتج الأيض من الخلايا، المصل، أو الأنسجة. يتم شملهم الاستطلاع مجموعة من نواتج الأيض باستخدام الاستخلاص في الطور السائل السائل، تتدفق ultraperformance السائل اللوني / عالية الدقة قياس الطيف الكتلي (UPLC-HRMS) إلى جانب لبرامج التحليل التفاضلي.

الايض غير مستهدفة من مصادر بيولوجية عن طريق Ultraperformance اللوني السائل عالية الدقة الطيف الكتلي (UPLC-HRMS)

تعلم مبادئ الكروماتوجرافيا فوق الحرجة التحضيرية لعزل المركبات بكفاءة عالية. يوضح هذا البحث تأثير معدل التدفق وذوبان العينة وانتقائية العمود على جودة الفصل وقابلية التوسع.

المبادئ الأساسية لتنقية باستخدام السوائل فوق الحرجة الكروماتوجراف -- إعلان

استكشف المزيد من الفيديوهات