تقييم الاختراق ، عش البناء ، واكتناز في الفئران

يهدف هذا الإجراء إلى توصيف السلوكيات النوعية النموذجية في الفئران. أولاً، يتم دراسة سلوك الحفر عن طريق ملء أنبوب بمادة ما وقياس الكمية التي يزيلها الحيوان. كما يتم وضع مواد تعشيش في القفص وقياس مدى اكتمال العش كمعيار لتقييم سلوك التعشيش.

يتم فحص سلوك الاكتناز عن طريق وضع فأر في صندوق يتيح له الوصول إلى نفق مليء بكريات الطعام، وقياس الكمية التي يسترجعها الحيوان من النفق. وتوضح نتائج هذه السلسلة من الاختبارات ما إذا كانت الفئران تمارس أنشطتها الحياتية اليومية. وعادةً ما يمكن أن تمتد تداعيات هذه التقنية نحو البحث عن علاجات للخرف، لأن السلوكيات المتشابهة وظيفياً تكون معطلة لدى كل من نوع الفأر والإنسان.

يمكن تشبيه السلوكيات النمطية في الفئران بأنشطة الحياة اليومية لدى البشر. وتتمثل الآثار الأولى لمرض الزهايمر في تثبيط القدرة على أداء الأنشطة اليومية المعتادة، مثل تحضير وجبة الإفطار، أو ربط أربطة الحذاء، أو التخطيط لوجبة، أو الذهاب للتسوق. وبالنسبة للفئران التي نستخدمها في نموذج مرض الزهايمر، نجد أن السلوكيات النمطية لهذا النوع تكون مثبطة بشكل كبير.

لدينا هنا نموذج مباشر، وهو نموذج متماثل تقريباً بين أنشطة الحياة اليومية كما تظهر لدى مرضى ألزهايمر في المنزل وفي العيادة، وتثبيط السلوكيات النوعية في الفأر. يتم إنشاء جحر من أنبوب بلاستيكي بقطر 68 مليمتر وطول 20 سنتيمتر. يتم سد أحد الطرفين بسدادة مصنوعة من MDF بسمك 12 مليمتر.

بعد ذلك، قم بثقب ثقبين، على بُعد سنتيمتر واحد من الطرف المفتوح لأنبوب الحفر بزاوية 90 درجة. أدخل برغيًا آليًا بطول خمسة سنتيمترات في كل ثقب وأحكم ربطهما في مكانهما. يجب أن يكون الأنبوب الآن مرتفعًا بنحو ثلاثة سنتيمترات عن الأرض.

املأ أحد طرفي الجحر بـ 200 grams من حبيبات الطعام وضع الجحر في القفص الرئيسي للسماكنة طوال الليل. إذا كانت الفئران مُصنفة في مجموعات، فسيكون التعود أسرع وأكثر شمولاً بسبب تأثير التيسير الاجتماعي. ومع ذلك، يجب إجراء الاختبارات المرجعية على الفئران التي يتم إيواؤها بشكل فردي.

وبعد ذلك، يمكن أيضاً استخدام مواد غير غذائية لقياس سلوك الحفر. وتشمل بعض الأمثلة كرات الصلصال، وحصى البازلاء، والرمل. وبعد تعويد الحيوانات، ضع جحراً كاملاً في قفص الاختبار في تمام الساعة 4:00 مساءً تقريباً لإجراء اختبار خط الأساس.

يُوصى بإجراء اختبارين أساسيين بفارق 48 ساعة بينهما. وبعد مرور ساعتين، يتم قياس وزن المادة المتبقية في الجحر عن طريق تفريغ المحتويات في وعاء موزون.

أعد المواد غير المستهلكة إلى الأنبوب وأعده إلى القفص الأصلي في صباح اليوم التالي. قم بإزالة الأنبوب ووزن أي مواد متبقية لغرض الاختبار. كرر هذا الإجراء بعد مرور 48 ساعة على الأقل من آخر قياس خط الأساس.

عادةً ما تقوم فئران C 57 black six بحفر حوالي 70 جراماً في أول ساعتين وقرابة 200 جرام طوال الليل. وغالباً ما تحفر الفئران التي تعاني من آفات في الحصين أقل من خمسة جرامات. كما يثبط مرض Pion عملية الحفر، وكذلكما يفعل عديد السكريد الشحمي (lipopolysaccharide).

يمكن أن يكشف سلوك الحفر عن مرض البريون في غضون 10 إلى 12 أسبوعاً بعد حقن متجانس الدماغ المصاب، بينما لا تظهر العلامات السريرية إلا في الأسبوع 22. وقد ثبت أن الحفر حساس للاختلافات بين السلالات وتعطيل الوحدات الفرعية لقناة أيونات البوتاسيوم. لقياس سلوك التعشيش، قم بإعداد أقفاص فردية وغطِّ الأرضية بمادة فرش بسمك 0.5 centimeters.

ضع مربعاً من قطن التبطين المضغوط بمقاس خمسة سنتيمترات، يُسمى العش، في كل قفص. ضع فأراً واحداً في كل قفص تعشيش قبل حوالي ساعة واحدة من بدء المرحلة المظلمة، ثم قم بتقييم النتائج في صباح اليوم التالي.

قم بوزن كمية المادة المكونة للعش غير الممزقة، ثم قم بتقييم العش وفق مقياس مكون من خمس نقاط. تُعطى درجة واحدة عندما تكون مادة العش غير ملموسة إلى حد كبير، وتُمنح الدرجة خمسة للعش شبه المكتمل الذي تم تمزيق أكثر من 90% من مادته. يقوم كل من الذكور والإناث ببناء الأعشاش لأن الغرض منها هو التنظيم الحراري بالإضافة إلى ارتباطها بالتكاثر.

تتراوح درجات بناء العش لدى ذكور وإناث فئران C 57 black six في النطاق ذاته. وعلى الرغم من أننا لم نجرِ مقارنة مضبوطة في دراسة واحدة، إلا أن معظم فئران C 57 black six تسجل من أربعة إلى خمسة درجات في بناء العش. ولكن عند إحداث آفة في الحصين، تصبح الدرجة الوسيطة في حدود درجتين.

من غير المرجح أن تتجاوز الدرجة ثلاثة. ولقياس سلوك الاكتناز، قم بتجهيز الصندوق الذي سيعمل كقاعدة منزلية عن طريق إدخال زجاجة مياه وحفر ثقب في الجانب حيث سيتم تركيب أنبوب الاكتناز. اصنع أنبوب الاكتناز عن طريق لف قطعة من الشبكة السلكية بطول 45 سنتيمتر حول أنبوب قطره 40 مليمتر.

قم بتثبيته باستخدام مشابك ألن (Allen clips) أو بلف الأسلاك. ثم قم بتثبيته بالضغط فوق أنبوب أسود بقطر 40 مليمتر وطول 10 سنتيمتر. بعد ذلك، قم بتوصيل أنبوب التخزين بالصندوق الذي تم تجهيزه مسبقاً، وسد الطرف القريب باستخدام سدادة خشبية قابلة للإزالة.

قم بتجهيز صندوق المنزل باستخدام نفق كرتوني وفرشة ملوثة من القفص المنزلي. تأكد من منع الوصول إلى أنبوب التخزين. ضع الفأر في الصندوق في وقت مبكر من اليوم من أجل الاعتياد لاحقاً، ثم قم بإزالة أنبوب التخزين وملء طرفه البعيد بمزيج من حبيبات الطعام الكبيرة والصغيرة، بإجمالي 100 grams.

قبيل بداية المرحلة المظلمة، قم بإزالة السدادة الخشبية للسماح للفأر بالوصول إلى أنبوب التخزين في صباح اليوم التالي. ومرة أخرى، فإن التوقيت ليس حرجاً.

قم بجمع ووزن حبيبات الطعام التي تم تخزينها في صندوق القاعدة الرئيسية. باستخدام إناث الفئران من سلالة C 57 black six. ستكون الكمية المتوسطة المخزنة حوالي 50 إلى 70 grams.

تؤدي الآفات في الحصين إلى تثبيط قوي لسلوك الاكتناز، بينما يكون للآفات في القشرة أمام الجبهية تأثير ضعيف فقط. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تقييم السلوكيات النموذجية للنوع في الكتلة.