مما يدل على استخدامات مطياف الرواية قوة الجاذبية على التمدد وقياس البروتينات الليفية

تتكون مواصفات قوة الجاذبية من قاعدة تثبيت علوية، ومجهر ضوئي عادي، وكاميرا رقمية، وجهاز كمبيوتر. ونستخدم هذا النظام لإجراء تحليل الجزيء الواحد. حيث يمكننا تسجيل توازن القوة أو توفير قوة متدرجة عن طريق التنقيط.

للبدء، نحتاج إلى تحضير شريحة زجاجية دقيقة حتى يمكن إتمام هذا النوع من العمليات. لقياس حوالي 10 milligrams من الحبوب التي ستُستخدم، أقوم عادةً بتحضير 2K. لدينا هنا خمسة milliliters من مادة سنقوم بإجراء three triology بها.

هنا سنقوم بتجهيز الأنبوب النهائي الأول. قم بخلط المزيج جيداً باستخدام الماصة، ثم انقل 2 mL من المزيج فوق حبيبات الـ bead cake. اترك حبيبات الـ bead cakes لمدة دقيقتين، ثم قم بالرج باستخدام جهاز الفورتكس (vortex) جيداً لمدة دقيقتين.

أكل الأسفل الاثنين المبللين. تريد بيورين واحد في ماء مقطر مرتين. ربط عند pH 6.

لذا، قم ببساطة بإضافة 5 mL من محلول الربط المنظم (coupling buffer) إلى كل خرزة، حيث يجعل هذا الربط الخرزات قابلة للالتصاق. بعد ذلك، يتم ربط الأجسام المضادة، ثم يتم الرج باستخدام جهاز الفورتكس (vortex) لمدة دقيقة واحدة. قم بتثبيتها لمدة خمس دقائق، وإذا كان المحلول المجمد عالي التركيز، فستقوم بتخفيفه من أي تركيز كان إلى 5% باستخدام محلول الربط المنظم.

بعد ذلك، خذ 2 mL من هذا المحلول وأضفه، مما سيسمح لـ TER بالاقتران مع النهايات الموجودة بالفعل على جهاز الفورتكس (vortex). كرر هذه العملية مرتين، ثم قم بالتدوير لمدة 3 دقائق. اتبع إجراء محلول الاقتران (coupling buffer).

أضف خمسة ملليلترات مرة أخرى من محلول الربط المنظم (coupling buffer) إلى قرص التغذية. ثم اخلط، وقم بالدوران، واشفط السائل. في المرة الرابعة، يتبقى بعض السائل فوق القرص، مما يسمح للجسم المضاد بالتحرك بحرية.

هذا هو الجسم المضاد لدينا هنا. قم بقياس هذا الحجم بدقة. يتم تدوير الأجسام المضادة الرطبة، حيث يتم تخفيفها بتركيز 1 molar باستخدام الماء المقطر المزدوج، ويتم تدوير الخليط لمدة 30 دقيقة أو للوقت المناسب.

لإخماد كافة الغراء غير المتفاعل، وجهًا لوجه. سيتم إجراء عملية الطرد المركزي للتخلص من الـ S. بعد ذلك، يجب إعداد المحتويات التي تمثل البروتوكول. خذ خمسة مللي لتر من الخرز، إليك الخرز، ثم ضعه لأسفل.

كرر هذه الخطوة ثلاث مرات، ثم افعل الشيء نفسه مع أي مقايسة أخرى تقوم بها. لبدء التحضير، نحتاج أولاً إلى الحصول على البروتين. في هذه الحالة، اذهب إلى المجمد عند درجة حرارة -70، حيث يتم تخزين البروتين، ومن المهم إذابة هذا البروتين وتسخينه.

سيكون هذا الآن أكثر تركيزاً مما نريد استخدامه في المقايسة الخاصة بنا. لذا، سنقوم بتقليل الكمية إلى حوالي 15، وسنضع جزءاً منها في الطرف. ولكن يجب أن يكون ذلك لأن الحجم الدقيق بعد تقليل كمية الحجم إلى حوالي 5 µL في الخرزات الكبيرة، سنأخذ حجماً أكبر، سيكون 10 µL من هذه الخرزة المثال.

وهذا سيعطينا نتيجة جيدة، سنقوم هنا بإضافة حوالي 350 µL إضافية من محلول التخزين الخاص بالمقايسة (assay buffer) إلى أنبوب الميكروسنترغ لنوصل إلى التركيز النهائي. والآن سنقوم بتنفيذ ذلك كما فعلنا مع aex your will A، سنقوم هنا بتدوير الأنبوب حرفياً وسنفعل ذلك. والآن حان الوقت لبناء التدفق الذي ستستقر عليه الخرزات الخاصة بنا وتكون موجودة فيه.

أقوم بوضع شريحة مجهرية قياسية في محلول بتركيز 1%، وهو عبارة عن غراء لضمان تثبيت الركائز على سطح القطعة الزجاجية المقصوصة وشرائح المجهر والغطاء. لقد قمت بالفعل بتجهيز الحواف، وسأقوم بوضع هذه القطعة الزجاجية الرقيقة فوق شريحة أكثر سمكاً. ستكون هذه الحجرة صغيرة نسبياً.

إليك جزء صغير هنا، وهو في وضع تالف. واحد آخر من هؤلاء الأشخاص يمسكون به كل يوم. يجعلني العامل أفضل، أو بشكل أفضل.

سنقوم هنا بتمرير آخر قطعتين من العينات التي يبلغ عمرها 25 عاماً للتذوق المحتمل قبل أن نبدأ في إضافة البسكويت والجبن. وقد فاتك بعضها، فعدد قليل فقط من الأشخاص قد تذوقوا القليل منها.

وهنا، إذا نظرت عن كثب، يمكنك في الواقع رؤية الخرزة. أما بالنسبة للطرف، فإن ما أفعله هو البدء ببساطة بالنقر على المنطقة التي توجد بها الخرزة، وبعد ذلك، أقوم بملء بقية سطح الشريحة هنا، بنسبة 40% تقريباً، حتى نتمكن من وضع هذه الشريحة في اتجاهات مختلفة دون القلق من احتمالية هجرة الخرزات إلى الأسفل. لا تحتاج إلى أي برغي لتثبيت العينة، بل أقوم بوضع العينة في مؤخرة الخط، وقد أقوم بتثبيت الشريحة واستخدام مشبك إضافي للحفاظ على استقرار الأشياء بشكل أكبر، ومن ثم يمكننا وضع العدسة الشيئية.

هذا جهاز تحكم عن بعد نستخدمه لتحديد موضع الشريحة هنا، وكل شيء قيد التشغيل بما في ذلك الكاميرا. يمكننا البدء في مراقبة الخرزات المحتملة من خلال مراقبة شاشة الفيديو ببساطة. العينة الموجودة على اليسار تحتوي على خرزة أصغر، وتبدو هذه الخرزة الصغيرة مشابهة للخرزات الصغيرة الأخرى الموجودة على سطح القطرة.

ومع ذلك، فإن زوج الخرزات يحتوي على خرزة تصبح بؤرية عندما يكون سطح الخرزة البعيدة عن LOP خارج التركيز، مما يشير إلى أن تلك الخرزة تقع في مستوى بؤري مختلف عن الخرزة الأخرى على الشريحة، وبذلك يشكلان زوجاً؛ حيث يوضح الشكل A الموجود على اليمين كيفية عمل الأزواج على الشريحة. لذا نقوم بوضع الشريحة أثناء إجراء عملية التدوير بزوايا مختلفة، مما يمنحنا أطوالاً مختلفة، ثم نستخدم التدوير. ونرى هنا تمثيلاً لما قد يبدو عليه زوج الخرزات باستخدام الحاسوب.

لقد وجدنا كليهما. في هذه الحالة، يمكننا حساب وإلغاء القياس المقدم، وهنا يتم إلغاء F وأيضاً إلغاؤه. شكراً للمشاهدة.

حظاً موفقاً في اضطرابك. لقد حان وقت الرقص. علاوة على ذلك، لا تظن أن أحداً لن يفوز بما لدي.

أصدقائي مشغولون بمحاولة الحصول عليه. لقد تُرِكْتُ وحدي في الخلف. أين تلك الفتاة التي أتيتُ معها؟

إنها ترحل مع صديقي. هي تعتقد حقاً أنها كذلك. ألا تعرف معنى الرجل الحقيقي.

اركبه مجددًا، اتجه يمينًا مجددًا، الثور الميكانيكي. اتركه ينطلق. يمينًا، يمينًا، يمينًا هناك في المكسيك.

أحب الطريقة التي تسير بها الجولات الليلة. الثور الميكانيكي. لا تبطئ سرعتك.

أعطني 5 ثوانٍ لكي أستقر عندما تنتهي من يدي اليسرى. فقط لأستخدم يدي اليمنى. أجل، بيدي اليسرى سأستخدم اليمنى فقط.