Name: الكهربية من عقرب الوتد Sensilla (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: اكتشف طريقة تسجيل كهربائي فريدة لدراسة الفيزيولوجيا الكيميائية الحسية في العقارب. تتيح هذه التقنية عزل التحفيز الكيميائي لكل مستقبل حسي على حدة باستخدام زيت معدني.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نشكر صندوق الحياة ، جامعة أوكلاهوما الجامعية برنامج الفرص البحثية ، وقسم علم الحيوان للحصول على تمويل هذا العمل. كما نشكر الدكتور Hoefnagels مارييل للمساعدة التحرير.

1. قبل التسجيل ، وإعداد الحيوانات الحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة العقرب جرة من وطنه ووضعه في وعاء زجاجي قبل المبرد ؛ المقبل ، ضع الجرة التي تحتوي على عقرب في بيئة تجميد (-5 درجات مئوية) لمدة لا تقل عن دقيقتين. هذه المرة قد تختلف حسب العمر والحجم والنوع ، وما إلى ذلك من العقارب محددة قيد الدراسة. لكن عموما ، فإن المرحلة البيئة تجميد كاملة مرة واحدة في الحيوان هو بلا حراك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد دقيقتين ، إزالة العقرب يجمد من البرودة إناء زجاجي ، ووضعه الجانب البطني حتى على شريحة المجهر. تأمين الواخزة والذيل ، والساقين ، وpedipalps مع الطين moldable (التي تعتمد على النفط ، فان أكين Plastalina). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل المنصة التي وضع في pectines العقرب. ضبط طول منصة العرض وفقا لحجم ممشط. عادة ، يتم إنشاء منصات للخروج من الزجاج تغطي المجهر وحوالي 10 (L) X 18 (W) ملم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تلتزم الوجهين شريط لاصق على منصة ممشط ، وقص الشريط (إذا لزم الأمر) لتناسب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لجعل غرفة pectinal ، وضعت ثلاثة من الجوانب الأربعة للمنصة إلى ما قبل ذاب الشمع (شمع النحل نستخدم رقاقات 100 ٪) على عمق مليمتر 3-4. نحن إذابة الشمع عن طريق وضع رقائق داخل طبق بتري الزجاج ، وتقع على طبق ساخن. مرة واحدة يتم تبريد الشمع على حواف من الغرفة pectinal إلى درجة حرارة الغرفة ، وهذا ينبغي إنشاء جدران من الشمع حوالي 1 مم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على الحيوانات ، وتحديد موقع نقطة الإدراج pectinal ، ووضع على حافة الامم المتحدة مشمع من منصة (الشريط الجانب متابعة) الخلفي فقط لذلك. بعد ذلك ، وتثبيت منصة (بحيث لن تتحرك في وقت لاحق) عن طريق الضغط بلطف حقها والحواف المحيطية اليسار ضد الطين المستخدمة لكبح جماح أرجل الحيوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غرامة استخدام الملقط ذات الرؤوس بعناية وضع ممشط أو pectines داخل الغرفة. على وجه التحديد ، وذلك باستخدام ملقط ، عقد ممشط على طول العمود الفقري pectinal ، وتقديم بلطف ممشط من تحت زجاج الغطاء وخفضه على الأرض منصة لاصقة. تأسيس السندات ممشط إلى الشريط بعناية من خلال تطبيق الضغط على العمود الفقري pectinal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الآن تطبيق ذاب الشمع (نستخدم ملعقة معدنية ساخنة قبل) إلى حافة الامم المتحدة مشمع من المنصة. الغاية هي ذات شقين ، لتأمين ممشط وأرفق كاملا لمستقبل الغرفة المعدنية مقدمة النفط. توخي الحذر عند تطبيق الشمع على ممشط الحيوان ، كما أنه من الممكن أن تلحق الضرر ممشط بالشمع أن حار جدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بناء غرفة ممشط كاملة. المقبل ، وإقامة اتصال مع قطب غير مبال الدملمف الحيوان عن طريق إدخال سلك الفضة بين شرائح الذيل اثنين. </li></ol> 2. خارج الخلية تسجيل متزامن وتحفيز الكيميائية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نحن نستعد للحيوان لمدة 24 ساعة قبل إجراء خارج الخلية ، معلومات سرية التسجيلات ، التي ، من بين أسباب أخرى (أي تعديل الحيوان الى موقف ثابت) ، ويسمح الوقت لجعل العرف ماصات المنشط للمعين (التي تعتمد على sensillum) قطرها معلومات سرية. نستخدم مجتذب micropipette لتحقيق مثل هذه المواصفات. من الناحية المثالية ، فإن قطر هي ماصات ≈ 2 ميكرومتر أكبر من القطر sensillar المسام. علينا أن نعدل وفقا لمواصفات micropipette دينا لكل حيوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 ساعة قبل التسجيل ، ونضيف 5 ميكرولتر من الزيوت المعدنية للغرفة pectinal ، غمر تحت ممشط النفط. ثم ، فإننا موقف الحيوان تحت المجهر رفيع المستوى ، الذي عمل فترة طويلة بعد وأهداف برنامج التحصين الموسع الإضاءة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحفيز كيميائيا ربط sensilla ، نقدم tastants مائي (أي حمض الليمون والملح) من خلال وسيلة النفط. أولا ، علينا استخدام حشو micropipette لحقن المنشطات في ماصة المنشطات. ملاحظة : جميع الحلول يجب أن يحتوي على منبه المنحل بالكهرباء للتصرف الكهربائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل ، بعد تحديد المواقع ماصة منبه على micromanipulator (تلاعب في تسجيل) ، وإدراج القطب تسجيل في نهاية المطاف ، كليلة المفتوحة للماصة المنشطات. فمن المهم لضمان الاتصال بين القطب والمعادن كهربائيا حل المنشطات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة ترتكز على إعداد كهربائيا (عبر القطب غير مبال) ، وانخفاض ببساطة من خلال ماصة للنفط والمتوسطة في الصعود إلى sensillar المسام. يمكن لمدة التحفيز الكيميائي في sensillum pectinal تختلف من قدر ثلاثين دقيقة إلى أقل من ثانية واحدة. عموما ، يمكننا عينة أوتاد متعددة (&gt; 30) في ماصة. في حال أن يصبح ماصة منبه انسداد بالحطام دقيقة ، وتبادل ببساطة انسداد ماصة للماصة ، جديدة غير مستعملة. </li></ol> 3. إعداد الحيوان لأيام متعددة من التجريب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان هذا الحيوان هو لاستخدامها على مدى فترة زمنية ممتدة ، ونحن نوصي إعادة استخدام الغرفة pectinal والاستعاضة عن قطرة من الزيت المعدني لكل جلسة تسجيل. بعد جلسة يوم معين لتسجيل اكتمال إزالة الحيوان من تسجيل انشاء وتنفيذ يغسل الزيوت المعدنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Specifically ، إضافة آخر قطرة (5 ميكرولتر) من الزيت المعدني إلى الغرفة ، وإزالة كافة النفط. هذا يساعد على التقليل من وجود منبه المتبقية ، والتي ربما تكون قد تسربت من خلال ماصة تسجيل الدورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل انعقاد الدورة المقبلة ، إضافة قطرة واحدة من النفط كما هو موضح سابقا. </li></ol> 4. ممثل النتائج : اعتمادا على المعدات المستخدمة تسجيل (مثل مكبر للصوت خاص ، رقمنة الأجهزة ، الخ) ، ونتيجة لذلك الممثل هو تسجيل خارج الخلية مع S : N نسبة لا تقل عن 3:1. البناء الناجح لغرفة المعدنية النفط ضروري لتحفيز الكيميائية لعزل sensilla الفردية ، حيث أنه يوفر وسيلة لإيصال tastants الكيميائية القطبية (المياه القائمة) 8. إذا كان هناك قليل من الزيت للغاية أو لا شيء على الإطلاق ، فإن الحل من انتشار المنشطات sensillum المسجلة sensilla المجاورة لها ، التي من المرجح أن تتسبب في حدوث فترات طويلة ، وغير المنضبط للنوبة التحفيز الكيميائي 8.

<ol><li>Hodgson, E. S., Lettvin, J. Y., Roeder, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+a+Primary+Chemoreceptor+unit%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Physiology of a Primary Chemoreceptor unit.</a> Science. 12, 417-418 (1955).</li>
<li>Newland, P. L. Taste processing in the insect nervous system. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNewland%2C+PL+%22Methods+in+Insect+Sensory+Neuroscience%22">Methods in Insect Sensory Neuroscience</a>. Christensen, T. A. , CRC Press. Boca Raton. 289-318 (2005).</li>
<li>Foelix, R. F., Müller-Vorholt, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fine+structure+of+scorpion+sensory+organs+II.+Pecten+sensilla%5BTitle%5D)+AND+%22Bull.+Br.+Arachnol.+Soc%22%5BJournal%5D)">The fine structure of scorpion sensory organs II. Pecten sensilla.</a> Bull. Br. Arachnol. Soc. 6, 68-74 (1983).</li>
<li>Carthy, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fine+structure+and+function+of+the+sensory+pegs+on+the+scorpion+pecten%5BTitle%5D)+AND+%22Experientia%22%5BJournal%5D)">Fine structure and function of the sensory pegs on the scorpion pecten.</a> Experientia. 22, 89-91 (1966).</li>
<li>Gaffin, D. D., Brownell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+properties+of+chemosensory+peg+sensilla+on+the+pectines+of+scorpions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Response properties of chemosensory peg sensilla on the pectines of scorpions.</a> J. Comp. Physiol. A. 181, 291-300 (1997).</li>
<li>Wolf, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pectine+organs+of+the+scorpion%2C+Vaejovis+spinigerus%3A+Structure+and+%28glomerular%29+central+projections%5BTitle%5D)+AND+%22Arthropod+Struct.+Dev%22%5BJournal%5D)">The pectine organs of the scorpion, Vaejovis spinigerus: Structure and (glomerular) central projections.</a> Arthropod Struct. Dev. 37, 67-80 (2008).</li>
<li>Gaffin, D. D., Brownell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+evidence+of+synaptic+interactions+within+chemosensory+sensilla+of+scorpion+pectines%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological evidence of synaptic interactions within chemosensory sensilla of scorpion pectines.</a> J. Comp. Physiol. A. 181, 301-307 (1997).</li>
<li>Knowlton, E. D., Gaffin, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+to+examining+scorpion+peg+sensilla%3A+the+mineral+oil+flood+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Arachnol%22%5BJournal%5D)">A new approach to examining scorpion peg sensilla: the mineral oil flood technique.</a> J. Arachnol. 37, 379-382 (2009).</li>
<li>Knowlton, E. D., Gaffin, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+tip-recording+method+to+test+scorpion+pecten+chemoresponses+to+water-soluble+stimulants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A new tip-recording method to test scorpion pecten chemoresponses to water-soluble stimulants.</a> J. Neurosci Methods. , Forthcoming Forthcoming.</li>
<li>Haupt, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antennal+sucrose+perception+in+the+honey+bee+%28Apis+mellifera+L.%29%3A+behaviour+and+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Antennal sucrose perception in the honey bee (Apis mellifera L.): behaviour and electrophysiology.</a> J. Comp. Physiol. A. 190, 735-745 (2004).</li>
<li>Bland, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensilla+on+the+antennae%2C+mouthparts%2C+and+body+of+the+larva+of+the+alfalfa+weevil%2C+hypera+postica+%28gyllenhal%29+%28Coleoptera+%3A+Curculionidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Insect+Morphol.+Embryol%22%5BJournal%5D)">Sensilla on the antennae, mouthparts, and body of the larva of the alfalfa weevil, hypera postica (gyllenhal) (Coleoptera : Curculionidae).</a> Int. J. Insect Morphol. Embryol. 12, 261-272 (1983).</li>
<li>Cate, H. S., Derby, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hooded+Sensilla+Homologues%3A+Structural+Variations+of+a+Widely+Distributed+Bimodal+Chemomechanosensillum%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Hooded Sensilla Homologues: Structural Variations of a Widely Distributed Bimodal Chemomechanosensillum.</a> J. Comp. Neurol. 444, 345-357 (2002).</li>
</ol>

وقد نشرنا سابقا في اثنين من هذه الأساليب والمجلات ، ونولتون Gaffin (2009) ونولتون وGaffin (في الصحافة).

بروتوكول أعلاه توضح كيفية إعداد والمراعي الصحراوية العقرب (Paruroctonus utahensis) لدراسة الكهربية. على وجه التحديد ، وتبين لنا كيفية بناء غرفة للرقابة خارج الخلية تسجيلات غيض من الخلايا العصبية حسي كيميائي تحت pectinal النفط. لأن النفط والماء لا يختلطان ، فمن الممكن لعزل التحفيز الكيميائي (مع المياه القائمة على المنشطات) لsensilla واحد. وينبغي التشديد على أنه P. utahensis ، هو حيوان صغير نسبيا (≈ 2،5-5 سم) وتطبيق هذا البروتوكول على الحيوانات الكبيرة الحجم قد يتطلب تعديلات كثيرة ، مثل حجم منصة الحيوان ، الغرفة ، وكمية من النفط التطبيقية. نوصي إجراء دراسات تجريبية لاختبار الحد الأدنى من النفط اللازم لأسلوب التسليم المراقب المنشطات الكيميائية المستندة إلى الماء. وعلاوة على ذلك ، وجدنا أي تأثير النفط على النشاط الأساسي العصبية داخل sensilla pectinal 8. وينبغي تأكيد هذا نموذج لأنظمة أخرى كذلك ، وذلك قبل تقييم chemoresponsiveness. ويمكن استخدام هذا الأسلوب بالاقتران مع أسلوب آخر لاختبار آثار التفاعل بين chemoresponse sensilla في الميدان الحسي. على سبيل المثال ، فمن الممكن لتسجيل معلومات سرية (في إطار النفط) من واحد ونحن sensillum قاعدة قياسية (عبر التنغستن القطب) من sensillum المجاورة 9. ويمكن استخدام مثل هذا التكوين تسجيل لتقييم ما إذا كانت أو لم تحفيز كيميائيا one sensillum يؤثر على النشاط العصبي للقاعدة sensillum المسجلة. حتى الآن لم تختبر واحدة هذا لالعقرب pectinal sensilla ، ويبقى السؤال مفتوحا لأنظمة حسي كيميائي الأخرى كذلك. لتلخيص ، ونحن نفكر في طريقة لتسجيل معلومات سرية تحت السلف النفط في نطاق التحقيقات الكهربية العصبية الى أساس من الذوق المفصلية. في هذا المخطوط ، ونحن نقدم لإعداد بروتوكول الحيوانات لهذا الأسلوب ، ونأمل أن توفر أساسا متينا لمزيد من الدراسة للنظم العصبي المحيطي الحسية.

<table><tbody><tr><td>علامة Lift-N-Press</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>16082</td><td>لاصق مزدوج الجانب</td></tr><tr><td>MicroFil</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>MF34G</td><td>مالئ الماصات الدقيقة</td></tr><tr><td>شعيرات زجاجية قياسية</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>1B100F-6</td><td>ماصات زجاجية</td></tr><tr><td>حامل الماصات الدقيقة Micr&amp;#8211;lectrode</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>MEH3SBW10</td><td></td></tr></tbody></table>

الكهربية من عقرب الوتد sensilla

Electrophysiology of Scorpion Peg Sensilla

وصفنا لتعديل القائمة 1،2 تقنية معلومات سرية عن التحقيق في تسجيل electrophysiologically قصيرة ، مثل الربط بين 3،4 sensilla الحسية. على السطح البطني منتصف كل العقارب هما الزوائد دعا pectines التي تحتوي على حقول كثيفة من mechano وحسي كيميائي ربط sensilla 5،6. طريقة واحدة لتقييم هذه chemoresponsiveness sensilla يستخدم التنغستن القطب الكهربائي خارج الخلية لتسجيل النشاط العصبي داخل sensillum كما هو إدخال الرائحة المتطايرة إلى الحقل 5،7 الحسية. القيود المفروضة على هذه الطريقة بطيئة وتشمل جمع البيانات وغير المنضبط لإدخال منبه ، والعزل من وربط الحقل. للتغلب على هذه القيود ، قمنا بتطوير جديد لتسجيل غيض أسلوب يستخدم اقطبي الزيوت المعدنية وسيلة يمكن من خلالها توصيل المياه المستندة إلى tastants sensilla ربط 8،9 فرد. لقد طبقنا بنجاح هذا الأسلوب في الحصول على chemoresponses sensillar لحامض الستريك ، والإيثانول ، والملح. نحن هنا وصف بروتوكول التجريبية لهذه الدراسة 9. نعتقد أن هذا الأسلوب الجديد قد يكون مفيدا لدراسة خصائص استجابة النظم الأخرى حسي كيميائي المفصلية ، بما فيها تلك الحشرات 10 و 11 و 12 القشريات.

توضح هذه المقالة أسلوب التحفيز الكهربية لعزل المادة الكيميائية إلى خارج الخلية عبر sensilla الفردية ، وتسجيلات اخبارية تحت الزيوت المعدنية.

الكهربية من عقرب الوتد Sensilla

نصف تعديلاً لتقنية تسجيل باستخدام المسبار (tip-recording) الحالية1,2، وذلك لاستقصاء الحواسيات الحسية القصيرة الشبيهة بالأوتاد3,4 من الناحية الفيزيولوجية الكهربائية. على...

الهدف العام من هذا الإجراء هو دراسة الفسيولوجيا الحسية الكيميائية لـ peg illa الفردية الموجودة على مشط العقرب. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق تثبيت عقرب مخدّر على شريحة زجاجية بحيث يكون الجانب البطني للأعلى. ويتطلب الإعداد باستخدام صلصال النمذجة غمر الأمشاط في غرفة مخصصة مملوءة بالزيت وتجهيز أقطاب كهربائية مملوءة بمحفز كيميائي.يتم تسجيل الاستجابات الحسية الكيميائية في كل شعيرة حسية (illa) على حدة في العضو الحسي (pectin)، والتي تعطي في النهاية ملفات استجابة مماثلة للمنبهات الكيميائية المائية. وقد استخدمنا التسجيل من قاعدة الشعيرة الحسية أثناء نفخ المنبهات المتطايرة عبر الثغور. وتكمن الميزة الرئيسية لتقنية التسجيل من الطرف في أنها تسمح بعزل التحفيز في عضو حسي واحد دون التأثير على نشاط الأعضاء المجاورة.يمكن لهذه الطريقة أن تساعدنا في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال بيولوجيا الاستشعار الكيميائي، على سبيل المثال، لماذا تستخدم الحيوانات العديد من الشعيرات (silla) المتكررة في الكشف والإدراك الكيميائي؟ قد لا تبدو العقارب من أكثر الحيوانات أماناً للدراسة، ومع ذلك، ليست كل الأنواع خطيرة أو يصعب التعامل معها. فعلى سبيل المثال، يبلغ طول عقارب المراعي الصحراوية من أربعة إلى خمسة سنتيمترات فقط، ويسهل تربيتها في المختبر ونادراً ما تلدغ إذا تم التعامل معها بشكل صحيح.في حال التعرض للدغة، يحفز السم الخلايا العصبية الحسية اصطناعياً، والتي ينقل بعضها معلومات الألم. وعادة ما يتلاشى هذا الشعور في غضون 15 دقيقة تقريباً. وتُعد العقارب كائنات صلبة يمكنها تحمل عدة أيام من التجارب، وغالباً ما يتم إعادتها إلى مواطنها.عندما تنتهي التجربة لتثبيت العقرب، ضعه في وعاء زجاجي مبرد مسبقاً. ثم ضع الجرة التي تحتوي على العقرب في بيئة تجميد لمدة دقيقتين على الأقل، وأخرجه من المجمد عندما يصبح الحيوان ساكناً. الآن، ضع العقرب المثبت على شريحة مجهرية بحيث يكون الجانب البطني للأعلى.قم بتثبيت أرجل الذيل اللادغ والزوائد القدمية باستخدام الصلصال القابل للتشكيل. وتعتبر أمشاط العقرب تراكيب مزدوجة تشبه المشط تقع بالقرب من الأعضاء التناسلية وهي فريدة من نوعها في هذه الحيوانات. يجب إنشاء حجرة لاحتواء مشط واحد دون إزالته من الحيوان.أولاً، قم بإعداد منصة لتركيب البكتين باستخدام غطاء شريحة زجاجي مقصوص بأبعاد 5 ملم في 18 ملم تقريباً، وعادةً ما يكون هذا المقاس مناسباً. ثانياً، قم بلصق شريط لاصق مزدوج الوجه على المنصة، وقم بتقليم الشريط ليتناسب مع الحجم إذا لزم الأمر.ثالثاً، قم بصهر بعض رقائق شمع النحل بنسبة 100% في طبق زجاجي باستخدام لوح تسخين. الآن، اغمس ثلاثة من حواف المنصة الأربعة في شمع النحل المذاب بعمق يتراوح من 3 إلى 4 mm. يعمل الشمع بعد أن يبرد كجدار لتكوين حجرة.الآن، ضع الحافة غير المثبتة للمنصة خلف نقطة الإدخال الصدرية (pectal insertion) مباشرةً في الحيوان. قم بتثبيت المنصة عن طريق الضغط برفق على حوافها الطرفية اليمنى واليسرى مقابل الصلصال المستخدم لتقييد أرجل الحيوان باستخدام ملقط دقيق الطرف. أمسك أحد الأمشاط (pectins) بعناية على طول الشوكة الصدرية (pectal spine)، ثم أخرجه برفق من تحت غطاء الزجاج وأنزله على أرضية المنصة اللاصقة.ثبّت البكتين عن طريق الضغط بعناية على الشوكة البكتينية. أكمل إغلاق الحجرة باستخدام ملعقة معدنية مسخنة مسبقاً لوضع الشمع المصهور على الحافة غير الملحومة للمنصة. وبذلك يصبح الحيوان الآن جاهزاً تقريباً لإجراء تسجيلات الفيزيولوجيا الكهربائية.حان الآن الوقت المناسب لعمل توصيل للقطب غير الفعال. أدخل سلكاً فضياً بين قطاعين من الذيل في اللمف الدموي للعقرب. اضغط جزءاً من السلك الخارج من الحيوان داخل الصلصال لتثبيته، مع ترك طول كافٍ للوصول إلى المضخم.الآن، اترك التحضير جانباً لمدة ساعة واحدة على الأقل قبل البدء في التسجيلات لكي يستقر التحضير من أجل التسجيل. استخدم جهاز سحب الماصات الدقيقة (micro pipette puller) لصنع ماصات يبلغ قطرها الداخلي حوالي ميكرونين أكبر من قطر ثقب المستشعر، والذي يختلف من حيوان لآخر. قبل ساعة واحدة من التسجيل، املأ غرفة البكتين بـ 5 µL من الزيت المعدني.ثم ضع الحيوان تحت مجهر عالي القوة مزود بعدسات ذات مسافة عمل طويلة وإضاءة علوية (epi illumination) لتحفيز الـ peg illa كيميائياً. املأ ماصة المحفز بمواد تذوق مائية ممزوجة في محلول إلكتروليتي. وباستخدام أداة ملء الماصات الدقيقة، قم بتثبيت ماصة المحفز المملوءة بجهاز تحريك دقيق (micro manipulator).الآن، أدخل قطب التسجيل في الطرف المفتوح من ماصة التحفيز. من المهم ضمان التلامس بين القطب المعدني ومحلول التحفيز الإلكتروليتي. قم بتوصيل أسلاك أقطاب التسجيل والأقطاب غير الفارقة بمضخم تفاضلي.يتم توصيل المضخم بجهاز رسم إشارات (oscilloscope) لتصور النشاط الكهربائي وبمكبر صوت للكشف المسموع عن التغير الكهربائي. أصبح الإعداد الآن جاهزاً لإجراء التسجيلات. وباستخدام المجهر الميكرومانيبيوليتور (micro manipulator)، قم بخفض الماصة بعناية فوق مسام المستشعر.سيُسمع تغير إلى ترددات أعلى عند حدوث تلامس كهربائي بين إلكتروليت الماصة والسائل الموجود داخل مستشعر الوتد. كما يمكن سماع الفرقعة المميزة لجهود الفعل العصبية في هذا الوقت أيضاً. ويمكن أن تتراوح مدة التحفيز الكيميائي لكل مستشعر دائم من 30 دقيقة كحد أقصى إلى ثانية واحدة كحد أدنى.بشكل عام، يمكن لماصة واحدة أخذ عينات من أكثر من 30 مسماراً. استبدل الماصات المسدودة بماصات نظيفة. من السهل تحضير الماصات، كما أن الانسداد ليس أمراً نادراً، لذا يجب دائماً الاحتفاظ بماصات إضافية جاهزة للاستخدام.من الممكن التسجيل من حيوان واحد لعدة ساعات في جلسة تسجيل واحدة قبل الحاجة إلى تغيير الزيت المعدني. ويمكن إبقاء حيوان واحد في مكانه في منصة التسجيل لعدة جلسات تسجيل على مدار عدة أيام متتالية. وفي الجلسات اللاحقة، يمكن إعادة استخدام غرفة الصدر، ولكن يجب استبدال الزيت المعدني.قم ببساطة بإزالة كل الزيت القديم باستخدام ماصة وأضف قطرة جديدة. يساعد هذا في تقليل وجود المحفز المتبقي، والذي قد يكون قد تسرب من ماصة المحفز خلال جلسة التسجيل. فيما يلي تسجيلات تمثيلية لرؤوس الماصة لمحفزات مختلفة.يظهر هذا المخطط استجابة متسقة نسبياً لـ 0.01 molar من كلوريد البوتاسيوم. وتبدأ هذه الدبوس في إرسال استجابة لـ 0.1 molar من حمض الستريك بشكل أكثر كثافة بكثير ثم تتضاءل هذه الكثافة خلال جزء من الثانية، يتبع ذلك انخفاض في التردد. وفي الاستجابة النموذجية لـ 30% ethanol، يظهر المخطط دفقات تحتوي على عدة نبضات تفصل بينها فترات قصيرة من عدم النشاط عند مقارنة تسجيلات الطرف لاستجابات مستشعرات مختلفة لنفس المادة المحفزة، مثل 0.1 molar من حمض الستريك.تعد الاستجابات متشابهة للغاية. وأثناء محاولة تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر ملء الماصة بمحفز مائي، وهو لا يمتزج مع الوسط الزيتي، مما يتيح لك تحفيز خلية واحدة كيميائياً في كل مرة. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحفيز الخلايا العصبية الحسية (CIN) الفردية بشكل يمكن التحكم فيه على مشط عقرب باستخدام الزيت المعدني كوسط.

electrophysiology-of-scorpion-peg-sensilla

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

ويمكن قياس ردود الكهربية للخلايا العصبية الحسية الشمية إلى odorants في الحشرات باستخدام التسجيلات sensillum واحد. في هذه المقالة سوف نقوم الفيديو لشرح كيفية تنفيذ تسجيلات sensillum واحدة في هوائيات على ذبابة الخل...

تسجيلات Sensillum واحدة في الحشرات ذبابة الفاكهة السوداء البطن و الأنوفيلة الغامبية</em

نظم الشمية الحشرات توفر فرصا فريدة لردود الرائحة الناجمة عن التسجيل في أشكال electroantennograms (EAG) وتسجيلات sensillum واحد (SSR) ، والتي تتلخص ردود من جميع الخلايا العصبية مستقبلات الرائحة (ORNs) الموجود على هوائي وعن تلك الموجودة في الفردي sensilla ، على التوالي.

القياسات الكهربية من نظام العثة الشم

نحن تصف تشريح الجهاز العصبي من الأرنب البحر...

عزل الخلايا العصبية الحسية من<em&gt; Aplysia californica</em&gt; للحصول على التسجيلات المشبك التصحيح من التيارات الجلوتاميرجي

توضح هذه المقالة صرصور بطني العصبية تشريح الحبل والتسجيلات خارج الخلية من العصب cercal وأدوات الوصل. يتم إنشاؤها الردود التي حركها التحفيز الكهربائي للعصب cercal أو التحفيز الميكانيكي المباشر لcerci.

العصبية الدائرة تسجيل من الصرصور الجهاز العصبي سليمة

توضح هذه المقالة ثلاث الاستعدادات الجهاز العصبي باستخدام العلق: تسجيل داخل الخلايا من الخلايا العصبية في العقد البطنية، زراعة الخلايا العصبية من العقد البطنية، وتسجيل من رقعة من الجلد معصب لتعيين حقول الحسية.

تسجيل داخل الخلايا، الحسي الميداني رسم الخرائط، والخلايا العصبية التي تم تحديدها في المستنزف، العلقة الطبية</i

يصف هذا البروتوكول تسجيل خارج الخلية من العمل الاستجابات المحتملة التي أطلقتها الخلايا العصبية الذوق labellar في ذبابة الفاكهة.

تسجيل الكهربية من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; Labellar طعم الشعيرات

يعتمد بق الفراش  على الخلايا العصبية المستقبلة الشمية الموجودة في حس حاسة الشم الهوائي للكشف عن المواد الكيميائية شبه الكيميائية في البيئة. باستخدام تسجيل حسي واحد ، نوضح طريقة لتقييم استجابة بق الفراش للمواد الكيميائية شبه الكيميائية واستكشاف عملية الترميز المعنية.

باستخدام Sensillum واحدة تسجيل لكشف الردود الشم العصبية من بق الفراش لSemiochemicals

وتصف هذه الورقة بروتوكول مفصل وفعالة للغاية لتسجيلات سينسيلوم واحد من باسيكونيكا سينسيلا على بالبس من الحشرات فمها.

تسجيلات سينسيلوم واحدة للجراد المالي سينسيلا باسيكونيكا

من أجل مراقبة البنية الفائقة للsensilla الحشرات ، تم عرض المسح الضوئي والمجهر الإلكتروني للإرسال (SEM و TEM ، على التوالي) بروتوكول إعداد العينة في الدراسة. تمت إضافة Tween 20 إلى المثبت لتجنب تشوه العينة في SEM. كان المجهر الفلوري مفيدًا لتحسين دقة التقطيع في TEM.

طريقة إعداد عينة من المسح الضوئي وانتقال المجهر الإلكتروني لزوائد خنفساء الخشب

تسمح طريقة نادرة الاستخدام للتسجيل الكهربي ، التسجيل الأساسي ، بتحليل ميزات ترميز الذوق التي لا يمكن فحصها بواسطة طرق التسجيل التقليدية. يسمح التسجيل الأساسي أيضا بتحليل استجابات الذوق للمنبهات الكارهة للماء التي لا يمكن دراستها باستخدام الطرق الكهربية التقليدية.

التسجيل الأساسي: تقنية لتحليل استجابات الخلايا العصبية الذوقية في ذبابة الفاكهة

تقدم هذه الدراسة تلاعبا جراحيا لفضح T-DRG في الفئران المخدرة لتصوير الكالسيوم في الجسم الحي ، جنبا إلى جنب مع تسجيلات تخطيط القلب المتزامنة. تمثل هذه الطريقة أداة متطورة لدراسة التحفيز الكهربائي للأعصاب المحيطية ومدخلات الأعضاء الحشوية الصدرية ، بالإضافة إلى تفاعلاتها على المستوى الحسي الأولي.

في الجسم الحي العقد الجذرية الظهرية الصدرية (DRG) تصوير الكالسيوم وتسجيل تخطيط القلب لدراسة تحفيز الأعصاب الطرفية

اكتشف طريقة تسجيل كهربائي فريدة لدراسة الفيزيولوجيا الكيميائية الحسية في العقارب. تتيح هذه التقنية عزل التحفيز الكيميائي لكل مستقبل حسي على حدة باستخدام زيت معدني.

الكهربية من عقرب الوتد Sensilla

استكشف المزيد من الفيديوهات