الفسيولوجية والمورفولوجية وتوصيف الكيميائية العصبية من الخلايا العصبية عن طريق التضمين الحركة

يوصف تقنية لقياس استجابة فسيولوجية الجسم الحي من الخلايا العصبية في الثدييات أثناء التنقل والربط بين علم وظائف الأعضاء من الخلايا العصبية مع مورفولوجيا الخلايا العصبية ، والنمط الظاهري الكيميائية العصبية الدارات الدقيقة متشابك.

الهدف العام من هذا الإجراء هو تسجيل الاستجابة الفسيولوجية للخلايا العصبية المفردة أثناء الحركة وزيادة توصيف التشكل والكيمياء العصبية لهذه الخلايا العصبية. يتم تحقيق ذلك عن طريق التخدير الأول وإعداد جراحيا. الخطوة التالية هي تسجيل الاستجابة الفيزيولوجية الكهربية للخلايا العصبية المفردة أثناء الحركة.

بعد تنقيط ومعالجة الدماغ ، فإن الخطوة الأخيرة هي تصور وتحليل الاستجابة الفسيولوجية ومورفولوجيا الخلايا العصبية. في النهاية ، تتحد تقنيات التسجيل العصبي داخل الخلايا والكيمياء المناعية والتحليل لإظهار التعديلات في إمكانات الغشاء للخلايا العصبية المفردة أثناء الحركة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل زراعة الخلايا ، هي الحفاظ على الوصلات العصبية والمدخلات المشبكية ، ولا يتم أتمتة الخلايا العصبية أو وضعها في وسائط اصطناعية في اليوم السابق ، قامت التجربة بحقن متتبع عصبي ، مثل فجل الحصان ، والبيروكسيداز في المناطق المستهدفة الطرفية للرجوع إلى الخلايا العصبية الحركية للتراجع.

في اليوم التالي ، قم بتخدير الفئران ووضعها على وسادة تدفئة ، وحلق الجلد ، وتغطية الجمجمة الخلفية بمقصات باستخدام تقنية المعقمة. قم بعمل شق على طول الفخذ الداخلي ، وأدخل قنية في الوريد الفخذي لمزيد من التخدير. أدخل قنية أخرى في الشريان الفخذي لمراقبة ضغط الدم.

أخيرا ، أدخل قنية في القصبة الهوائية. بعد ذلك ، ضع الجرذ في إطار تجسيم. قم بإجراء حج القحف لفضح المخيخ مع الحرص على تجنب الجيوب الأنفية الوريدية الكبيرة الموجودة مباشرة تحت التقاطع بين العظام الجدارية وبين العظام الجدارية.

بعد ذلك ، قم بتغطية سطح الدماغ بالزيت المعدني الدافئ. الآن قم بلصق الفك السفلي بقضيب مقترن بهزاز كهرومغناطيسي. يتم التحكم في حركة الفك السفلي عن طريق إشارات الأوامر إلى الهزاز من مولد الإشارة.

بعد ذلك ، ضع قطبا كهربائيا مؤرضا تحت الجلد المجاور لبضع القحف. للتحضير للأقطاب الكهربائية داخل الخلايا ، تملأ الأقطاب الكهربائية الدقيقة باختبار محلول صبغة IDE أو قضيب رباعي إيثيل دومين. مقاومة القطب الكهربائي هذه هي 60 إلى 80 ميجا أوم للمحاور ذات القطر الكبير و 80 إلى 150 ميجا أوم للمحاور الصغيرة الواردة والخلايا العصبية الداخلية.

بعد ذلك ، ضع القطب الصغير في مرحلة رأس المقياس الكهربائي باستخدام تلسكوب صغير مثبت في موضعه خلف رأس. تصور القطب الصغير من خلال الرافعة المغلقة 20 × في التلسكوب. تبلغ المنطقة المستهدفة حوالي 0.5 ملم من الحدود السفلية للقولون السفلي.

الآن قم بعمل فتحة صغيرة في الأم للسماح بتحديد موقع دقيق لسطح الدماغ. الإفراط في تعويض ردود فعل السعة بحيث عندما يلامس القطب الكهربي الدماغ، يتم إنتاج إشارة تغذية راجعة. تقدم القطب الكهربائي حتى يدخل الدماغ.

الخطوة التالية هي تنشيط الإزاحة المتكررة للفك السفلي. ثم باستخدام محرك متدرج ، قم بدفع القطب الكهربائي إلى الدماغ. عندما يشار إلى انحراق الخلايا العصبية من خلال انخفاض مفاجئ في إمكانات التيار المستمر والنشاط المشبكي المستمر ، توقف عن تقدم القطب.

عندما يعتبر الاختراق مستقرا ، ابدأ حركات المنحدر والتثبيت والفك الجيبي. سجل الاستجابة العصبية وتوصيف الخلايا العصبية بناء على استجابتها. بعد ذلك ، لرسم خريطة للمجال الاستقبالي للخلايا العصبية ، استخدم مسبارا غير حاد لاستكشاف الجلد حول الرأس والتجويف داخل الفم.

استكشف استجابة الخلايا العصبية للمنبهات الأخرى مثل تقلص العضلات أو المحفزات الضارة. عند اكتمال التسجيلات ، قم بحقن واحد إلى أربعة نانو أمبير ، تيار مستمر لحقن إجمالي من 15 إلى 70 نانو أمبير دقيقة. مراقبة تغلغل القطب الكهربائي وإيقاف الحقن الحالي.

إذا أصبحت إمكانات الغشاء أكثر إيجابية من 30 مللي فولت تحت الصفر ، فإن الخطوة التالية هي تقسيم أنسجة المخ. بعد القتل الرحيم للحيوان ونقفه ، قم بإزالة الدماغ. ثم قم بقص أقسام من 50 إلى 100 ميكرون إما في المستوى الأمامي أو السهمي أو الأفقي.

لتصور العلاقة بين الخلايا العصبية الحسية المسماة ومجموعة متنوعة من الخلايا العصبية الحركية ، قم بمعالجة الأنسجة ل H-R-P-D-A-B أو Texas red ، اعتمادا على الأنسجة ، يمكن إجراء تحليلات إضافية باستخدام مجهر فلوري أو متحد البؤر أو باستخدام برنامج تحديد الموقع الكمي. حسب الرغبة ، يمكن إجراء المعالجة الكيميائية المناعية ل synaptophysin لتحديد موقع نقاط الاشتباك العصبي بدقة داخل الخلايا العصبية المصنفة. يوضح هذا الشكل خلية عصبية في جذع الدماغ تم حقنها ب IDE بعد التوصيف الفيزيولوجي الكهربي.

بناء على الاستجابة العصبية أثناء الحركة ، يمكن تحديد هذه الخلايا العصبية على أنها خلية عصبية ثانوية واردة للمغزل العضلي. يشير المخطط البني إلى موقع النواة الحركية ثلاثية التوائم. يوضح هذا الشكل الاستجابة الفسيولوجية للخلايا العصبية الحسية أثناء إزاحة الفك.

يتم تمثيل استجابة الخلايا العصبية على أنها تردد إطلاق فوري. لاحظ أن الاستجابة تحاكي عن كثب إزاحة الفك السفلي مما يشير إلى أن هذه الخلايا العصبية المعينة توفر ردود فعل حسية تتعلق بوضع الفك السفلي. يوضح هذا الشكل خلية عصبية حسية استجابت أثناء فحص العضلات.

تم تلطيخ الخلايا العصبية ب IDE بعد المعالجة الكيميائية المناعية. تظهر الهراوات المشبكية التي تظهر على شكل انتفاخات حمراء موضعية مع المشبك الأصفر. الأخضر هو وصمة عار صاروخ فلورسنت.

هذا الشكل عبارة عن رسوم متحركة لمحور عصبي من خلية عصبية واردة أولية للمغزل العضلي. تم استخدام أقسام بصرية متعددة من الخلايا العصبية المسماة لإنشاء الرسوم المتحركة. باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل الفحص المجهري الكهربائي ، والفحص المجهري متحد البؤر ، ووضع العلامات العصبية الأمامية أو الرجعية للإجابة على أسئلة إضافية حول الخصائص الهيكلية الفائقة للاتصال العصبي للناقلات العصبية مع bns المشبكي والاتصال العصبي.