February 17th, 2011
هذه الرسالة يقدم بيانات عن دقة واستنساخ من معمل للأشعة فوق البنفسجية VIS BioSpec النانو لdsDNA الكميات والبروتين. حتى مع كميات صغيرة جدا (من 1 إلى 2 لتر) ، واستنساخ ممتازة ، في حين أن وظيفة المسح الآلي يحسن الإنتاجية والحد الأدنى من النتائج في المرحل عن نتائج أكثر دقة.
الهدف العام من هذا الإجراء هو تحديد تركيزات الأحماض النووية والبروتينات بدقة وتكرار باستخدام مقياس الطيف الضوئي الصغير الحجم. يتم تحقيق ذلك عن طريق تحديد طول المسار المناسب للعينة المراد قياسها أولا. الخطوة الثانية من الإجراء هي قياس فراغ.
بعد ذلك ، يتم قياس عينة الحمض النووي أو البروتين. الخطوة الأخيرة من الإجراء هي حفظ البيانات بتنسيق PDF أو CSV. في النهاية ، نتائج قابلة للتكرار للغاية للحمض النووي والبروتين.
يمكن الحصول على الكمية بسرعة ودقة بهذه الطريقة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها سريعة ودقيقة وقابلة للتكرار. لبدء إجراء تحديد كمية الحمض النووي ، قم بتشغيل مقياس الطيف الضوئي النانوي بمواصفات BIOS.
افتح برنامج BIOS nano المواصفات من سطح مكتب الكمبيوتر. انقر فوق علامة التبويب الحمض النووي البسيط D-S-D-N-A. سيقوم البرنامج بإنشاء اتصال مع الأداة وتشغيل تسلسل التهيئة.
هذا يتحقق من أن الأداة تعمل وفقا للمواصفات. بعد ذلك ، حدد طول المسار. على شريط تمرير طول المسار.
تتوفر ثلاثة خيارات لعينات حجم الميكرولتر. يمكن استخدام 0.2 ملم أو 0.7 ملم. وبالنسبة للعينات المخففة ، هناك خيار لاستخدام طول مسار خمسة ملليمترات.
في هذا العرض التوضيحي ، يتم اختيار 0.7 ملم لقياس عينة ميكرولتر. تستند جميع العمليات الحسابية إلى طول المسار المحدد. بعد ذلك في البرنامج ، انقر فوق علامة تبويب الإعداد وحدد إعداد المسح التلقائي.
حدد واحدة لمسح واحد. قبل قياس العينة، أو في كل مرة يتم فيها تحديد طول مسار جديد، يلزم إجراء قياس فارغ بالنسبة لماصة بطول مسار 0.7 ملليمتر، قم بوضع ميكرولترين من الماء أو المخزن المؤقت على قاعدة التمثال. انقر فوق فارغ للقياس الفارغ.
ستتحرك النافذة العلوية للتلامس مع قطرة العينة ويمكن ملاحظة ومضات الزينون. عند اكتمال القياس ، ستمسح الماسحة العينة تلقائيا. الآن يمكن قياس العينة.
من المهم استخدام محلول عينة متجانس كوجود جسيمات غير مذابة. سينتج عن عينة من الجسيمات بيانات غير قابلة للتكرار. لتجنب إدخال فقاعات الهواء، قم بشفط ميكرولترين من العينة بعناية ثم قم بإخراج العينة بشكل موحد من طرف الماصة على قاعدة التمثال.
اضغط على زر البدء على الأداة. كما كان من قبل ، ستتحرك النافذة العلوية للاتصال بقطرة العينة ويمكن ملاحظة ومضات الزينون لتحديد قابلية التكرار ، وتكرار القياس لنفس العينة ثلاث مرات ، يتم حفظ جميع البيانات المسجلة تلقائيا كملف BUD. للحفظ كملف PDF أو CCSV، انقر فوق حفظ P-D-F-C-S-V.
يمكن أيضا حفظ النتائج كملف CSV باستخدام التحديد المناسب في علامة تبويب الحفظ. يمكن إجراء كمية البروتين باستخدام طريقة الامتصاص 2 80. لتقدير كمية البروتين ، حدد علامة التبويب كمية البروتين.
أدخل معامل الانقراض إبسيلون اثنين 80 إذا كان معروفا ، إذا كان Epsilon two 80 غير معروف ، فقم بحسابه باستخدام Epsilon اثنين 80 calc حدد 0.2 ملم على شريط تمرير طول المسار لقياس عينة ثلاثة ميكرولتر. بعد ذلك في البرنامج ، انقر فوق علامة تبويب الإعداد وحدد إعداد المسح التلقائي. اختر اثنين لاثنين من المناديل لمنع ترحيل أي عينة ولضمان قراءة دقيقة.
لقياس ماصة فارغة بمقدار ثلاثة ميكرولترات من الماء أو مخزن مؤقت على قاعدة التمثال، انقر فوق فارغ للقياس الفارغ. بعد ذلك ، قم بتقطيع ثلاثة ميكرولترات من عينة البروتين بعناية على قاعدة التمثال. دون إدخال أي فقاعات هواء لبدء قياس العينة ، انقر فوق ابدأ في البرنامج أو اضغط على زر البدء على الجهاز.
كرر قياس نفس العينة ثلاث مرات لتحديد قابلية التكرار المعروضة. فيما يلي بيانات من القياسات على عينة DNA نموذجية مزدوجة الشريطة. الصيغة المستخدمة لحساب تركيز الحمض النووي هي تركيز العينة يساوي DF مضروبا في كمية OD اثنين 60 ناقص OD ثلاثة 20 مرة NACF ، حيث DF يساوي عامل تخفيف العينة و NACF يساوي عامل تركيز الحمض النووي.
يتم تعيين عامل تركيز الحمض النووي وفقا للمادة التحليلية المختارة. يشار إلى تركيز الحمض النووي المحسوب ونسبة OD 2 62 80. يحتوي هذا الجدول على نتائج اختبار القابلية للتكرار لتقدير كمية الحمض النووي.
تظهرالبيانات معا نتائج قابلة للتكرار بدرجة كبيرة كما يتضح من الانحراف المعياري النسبي المنخفض البالغ 0.26٪ النتائج التمثيلية من تحليل تركيز البروتين ل BSA موضحة هنا. يعتمد تركيز البروتين ميكروغرام لكل مليلتر على قيمة إبسيلون اثنين 80. أخيرا ، يوضح هذا الجدول تحليل قابلية التكاثر لكمية البروتين.
يشير الانحراف المعياري النسبي البالغ 0.51٪ إلى أن مواصفات BIOS nano يقيس بدقة ليس فقط للحمض النووي ، ولكن أيضا للبروتينات. بمجرد إتقانها ، يمكن تحليل عينات متعددة في دقيقة واحدة.
تقيّم هذه الدراسة دقة وقابلية تكرار مقياس الطيف الضوئي BioSpec-nano UV-VIS لتحديد كمية الحمض النووي المزدوج الشريطة والبروتينات. تبيّن الطريقة قابلية تكرار ممتازة حتى مع أحجام العينات الصغيرة جدًا، مما يعزز الإنتاجية بأدنى حد من الانتقال.
Accurate and reproducible quantification of nucleic acids and proteins is essential for target validation and assay development in early drug discovery. The BioSpec-nano micro-volume spectrophotometer enables high-throughput, low-sample-consumption measurements with automated sample handling, reducing variability and improving data reliability for lead identification workflows. Its rapid measurement cycle and low relative standard deviation support predictive confidence in downstream screening and translational applications.
The BioSpec-nano fits within the discovery continuum from initial target validation through assay development and into preclinical sample analysis, particularly where sample conservation and measurement reproducibility are critical.