مختبر تقنيات العقيم: التحويلات الحجم مع الماصات المصلية وMicropipettors

يقدم هذا العرض التوضيحي تقنيات المختبر المعقمة في نقل الأحجام باستخدام الماصات المصلية والماصات الدقيقة على طاولة المختبر. يجب العمل ضمن المجال المعقم الذي يتم إنشاؤه بواسطة لهب موقد بنزن. اختر أداة نقل الحجم المناسبة للتطبيق.

بعد ذلك، استخدمها بشكل صحيح دون المساس بتعقيمها، مع الحفاظ على تعقيم كواشف ومواد المزارع الخلوية، وسحب السوائل بدقة وبشكل متكامل. تُعد هذه الإجراءات ضرورية لتقليل مصادر التلوث وتوفير الدقة في التجارب الأساسية. في البداية، يكون من الصعب ضبط الأدوات وقراءتها بدقة، بالإضافة إلى تنسيق الحركات مع الأدوات ومواد المختبر دون المساس بتعقيم السوائل التي يتم نقلها.

تعد ممارسة التقنية المعقمة في المختبر أمراً أساسياً لنجاح التجارب عند التعامل مع عينات حية، لذا استثمر الوقت في تعلم هذه الإجراءات حتى تصبح طبيعة ثانية لديك. عند العمل على طاولة المختبر، سيقوم الدكتور Chris Reddy، منسق المختبر لدي، بشرح البروتوكولات. اغسل يديك دائماً جيداً بالصابون المطهر والماء الدافئ قبل البدء في أي إجراءات مختبرية. أولاً، بلل اليدين بالماء الدافئ الجاري.

بعد ذلك، ضع الصابون ووزعه جيداً وبقوة. افرك اليدين مع توليد احتكاك على جميع الأسطح، بما في ذلك الإبهامين، وظهور الأصابع، وظهور اليدين، وتحت الأظافر. ثم اشطف اليدين جيداً لإزالة بقايا الصابون وجففهما باستخدام مناشف ورقية يتم صرفها من حامل المناشف.

أخيراً، استخدم منشفة ورقية نظيفة، وأغلق الصنبور، وقم بإخلاء منطقة العمل على منضدة المختبر. بعد ذلك، أخرج منديل تعقيم مبللاً مسبقاً من العلبة وامسح المنطقة بأكملها. اترك المادة المطهرة تتبخر باستخدام ضوء مشعل.

موقد بنزن. اضبط اللهب ليكون المخروط الأزرق في المنتصف. رتب جميع المستلزمات المطلوبة للإجراء بالقرب من المنطقة المعقمة من طاولة المختبر.

كذلك، تأكد من وضع ملصقات تعريفية صحيحة على جميع المواد. تتوفر خيارات متعددة من الماصات المصلية، سواء كانت بلاستيكية أو زجاجية، تستخدم لمرة واحدة أو قابلة لإعادة الاستخدام، وبسدادات أو بدون سدادات. يتم معايرة الأحجام المختلفة باستخدام سدادات تعمل كحاجز لمنع التعبئة المفرطة للماصة.

لاحظ أن الماصات المصلية يتم معايرتها بطريقتين أيضاً؛ فماصات TD التي تحمل حلقات مزدوجة في الأعلى معايرة بحيث لا يتم تفريغ حجم الطرف. وهذا غير موضح هنا، ولكن ماصات TC يجب نفخها لإخراج السائل لأنها معايرة لتفريغ الحجم كاملاً. باستخدام تقنية تعقيم، وبواسطة ماصة مصلية بلاستيكية معقمة ومغلفة بشكل فردي، ابدأ من الطرف المسدود وابدأ في نزع الورق بعناية.

لا تقم بإزالة الغلاف الورقي بالكامل، بل قم بحماية طرف مقبض الماصة فقط (الجزء العلوي من الماصة فوق علامات التدرج)، ثم قم بتثبيت أداة مساعدة للماصة، مثل مضخة بصلية أو مسدس شفط، في الطرف العلوي للماصة السيرولوجية. أمسك أداة مساعدة الماصة بيد واحدة، وبيدك الأخرى قم بإزالة الغلاف الورقي عن الماصة البلاستيكية.

بالنسبة للماصات المصلية الزجاجية المخزنة في عبوات معدنية، قم بفك الجزء العلوي من العبوة وإزالة الغطاء، ثم قم بتعقيم النهايات المفتوحة لكل من الغطاء والعبوة باستخدام اللهب. بعد ذلك، ضع الغطاء على جانبه فوق طاولة المختبر المعقمة. أمسك العبوة بشكل أفقي وقم بهزها بحيث تظهر رؤوس واحدة أو اثنتين من الماصات.

اجعلها تبرز بنحو بوصة واحدة. ضع العبوة على جانبها وأخرج ماصة واحدة دون لمس الماصات الأخرى. حافظ على طرف الماصة السفلي بعيداً عن ملامسة اليدين والأسطح غير المعقمة.

باشر بتثبيت مساعد الماصة. بعد ذلك، مرر الثلث السفلي من الماصة الزجاجية عبر المخروط الأزرق في لهب موقد بنزن لمدة تتراوح من ثانية واحدة إلى ثلاث ثوانٍ. الآن، قم بإزالة غطاء الزجاجة التي تحتوي على الوسط الزرعي المعقم.

ثبّت الزجاجة بين الإصبع البنصر وراحة يد إحدى اليدين، بينما تتحكم في مساعد الماصة باستخدام إبهام وسبابة ووسطى اليد نفسها؛ وباليد الأخرى، أمسك الزجاجة بزاوية 45 درجة ومرر حافة الزجاجة عبر لهب موقد بنزن. ضع طرف الماصة المعقم في الوسط الغذائي، ثم اسحب السائل باستخدام مساعد الماصة مع التحكم في التدفق وفقاً لعلامات التدرج.

راقب الحجم المسحوب في الماصة لقراءة الحجم بدقة. أمسك الماصة بشكل عمودي وانظر إلى سطح السائل المقعر مباشرة بمستوى العين. ومرة أخرى، مرر حافة الزجاجة عبر لهب موقد بنزن.

ثم قم بتغطيته. ضع زجاجة الوسط جانباً. بعد ذلك، أحضر أنبوباً معقماً وبطريقة معقمة.

قم بإزالة الغطاء كما تم وصفه سابقاً. أنشئ مجالاً معقماً عن طريق تعقيم حافة الأنبوب باللهب. قم بتوزيع الوسط من الماصة إلى الأنبوب مع التحكم في تدفق العينة بحيث لا تتناثر.

قم بتعقيم الحافة باللهب. مرة أخرى، استبدل الغطاء وضع الأنبوب جانباً. الآن، قم بإزالة مساعد الماصة، وتخلص من الماصات البلاستيكية في حاوية مخصصة للأدوات الحادة، واغمر الماصات الزجاجية في محلول مبيض بتركيز 10%.

تتيح الماصة الدقيقة قياساً وتوزيعاً دقيقاً للأحجام الضئيلة باستخدام أدوات بأحجام مختلفة لنطاقات حجمية محددة. أنابيب ورؤوس بلاستيكية معقمة مسبقاً. استخدم أيضاً مناديل مطهرة مبللة مسبقاً لمسح الماصات الدقيقة. ملاحظة.

تظهر أداة Volter ثلاثة أرقام يتم تفسيرها وفقاً لنوع الماصة الدقيقة (micro pipetter)، حيث تعكس أصغر تدريجة مدى الدقة. على سبيل المثال، تُستخدم الماصة P 20 للأحجام التي تتراوح بين 2.0 و 20.0 µL. ويشير الرقم العلوي المكتوب باللون الأسود إلى عشرات الـ µL.

يشير الرقم الأسود الثاني إلى الحجم بالميكرولتر. ويمثل الرقم الأحمر أجزاء من عشرة من الميكرولتر، لذا فإن كل علامة تدرج تعادل زيادة قدرها 0.02 µL. أولاً، أدر مقبض الضبط لتعيين حجم الموزع كما هو موضح في مقياس الحجم الرقمي.

عند تقليل إعداد الحجم في الماصة الدقيقة، أدر العجلة الموجودة تحت الإبهام ببطء للأسفل حتى الوصول إلى علامة التدرج. وعند زيادة إعداد الحجم، أدر العجلة للأعلى لتجاوز علامة التدرج المطلوبة بمقدار ثلث دورة، ثم أدر العجلة ببطء للأسفل للوصول إلى الحجم المستهدف.

استخدم الرؤوس البلاستيكية disposable المعقمة في جميع الأوقات. ثبّت الرأس بإحكام على طرف أنبوب الماصة الدقيقة (micro pipetter). اضغط لأسفل وأدر قليلاً لضمان إحكام الإغلاق ومنع تسرب الهواء.

أمسك الماصة الدقيقة (micro pipetter) في وضع عمودي. لاحظ أن الماصة الدقيقة لها ثلاثة مواضع: وضع الراحة، والتوقف الأول، والتوقف الثاني.

اضغط على الزر الدافع للمكبس من وضع السكون حتى التوقف الأول لإزاحة كمية من الهواء تعادل حجم الضبط. الآن، اغمر الطرف في السائل مع الاستمرار في الضغط على الزر الدافع حتى التوقف الأول. حرر الزر الدافع ببطء لسحب السائل إلى داخل الطرف.

عندما يصل زر الضغط إلى وضع السكون، اترك وقتاً كافياً لسحب السائل إلى رأس الماصة. ثم قم بإزالة الرأس من السائل. تحقق بصرياً من كمية السائل المسحوب في الرأس، مع التأكد من عدم وجود فقاعات هوائية.

ضع الطرف بزاوية تتراوح من 10 إلى 45 درجة مقابل جدار الأنبوب الذي يستقبل السائل. الآن، اضغط ببطء على زر الدفع في المكبس حتى التوقف الأول، ليتم تفريغ السائل.

بعد لحظة، اضغط على زر الدفع حتى التوقف الثاني لطرد أي سائل متبقٍ في الطرف. بعد ذلك، قم بإخراج الطرف من السائل ثم حرر المكبس ليعود إلى وضع الراحة. وأخيرًا، تخلص من الأطراف في حاوية نفايات الأدوات الحادة المخصصة عن طريق الضغط على زر الطرد في الماصة الدقيقة.

أولاً، قم بإطفاء موقد بنزن. بعد ترتيب جميع المستلزمات والكواشف، امسح الأسطح الخارجية لأواني المختبر بمسحة مطهرة قبل نقلها إلى موقع التخزين الخاص بها. ثم ضع الأدوات الزجاجية الملوثة ومواد النفايات الخطرة في حاويات التخلص المناسبة.

يتم مسح منطقة العمل بأكملها مرة أخرى، مع ترك المطهر يتبخر. وأخيرًا، تُغسل اليدان جيدًا بصابون مطهر وماء دافئ. فبدون اتباع تقنية تعقيم مناسبة، يمكن أن تتعرض المزارع للتلوث مما يؤدي إلى تأخير التجارب.

يُعد النقل العقيم للسوائل باستخدام الماصات السيرولوجية أمراً أساسياً في تكثير المزارع البكتيرية النقية، مثل تحضير الـ e coli بحجم 25 milliliter هذا. بالإضافة إلى ذلك، تسهل الماصات السيرولوجية النقل العقيم للسوائل إلى أنابيب اختبار معقمة. يوضح هذا المثال الفرق بين مزرعة نقية ومزرعة ملوثة من الـ e coli من خلال النقل المباشر للوسط الغذائي إلى الأنابيب.

تتطلب بعض الحالات دقة في تحديد الأحجام. ومن الواضح أن هناك نقلاً غير دقيق للوسط في هذه الحالة. يوضح هذا المثال نقلاً غير صحيح لحجم المحلول المنظم.

بدلاً من صرف 12.5 µL، قام الطالب بصرف 125 µL. وعلى الرغم من ضبط الأرقام بشكل متطابق على المقياس، إلا أنه تم اختيار الماصة الدقيقة غير المناسبة للمهمة. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن تكون لديك معرفة عملية بكيفية تطبيق التقنية التعقيمية على الإجراءات المختبرية الروتينية، مثل نقل المحاليل والمزارع باستخدام الماصات المصلية والماصات الدقيقة دون المساس بعقمها.

الهدف هو أن تصبح الإجراءات الاحترازية، مثل تعقيم الزجاج ورؤوس الماصات وأنابيب المزارع والدوارق عن طريق اللهب، وكذلك العمل ضمن حدود المجال المعقم على طاولة المختبر، ممارسة معتادة في كل تجربة. ومن الضروري أيضاً قياس وتوزيع أحجام دقيقة ومحددة عند إجراء التجارب. إن تعلم كيفية استخدام أدوات نقل الأحجام هذه بشكل صحيح من شأنه أن يحسن موثوقية النتائج التجريبية.