Name: نموذج الفأر من انسداد الشريان الدماغي الأوسط (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-13T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: تعلم نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط في الفئران باستخدام الخيط الواحد داخل التجويف. يوضح هذا البروتوكول خطوات الجراحة وتقييم حجم النخر باستخدام صبغة TTC لدراسة السكتة الدماغية الإقفارية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح NS057195 ، UCSF راكوشبالوتاي الجائزة ، وجامعة كينت ستيت بدء صندوق لWH تشو.

<html> 1. أسلوب MCAO وتمت الموافقة على هذا البروتوكول من قبل رعاية الحيوان المؤسسية واللجان استخدم في سان فرانسيسكو وجامعة كينت الدولة ، وتلتزم المعاهد الوطنية للصحة المبادئ التوجيهية لاستخدام حيوانات التجارب. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع خياطة حيدة 5-0 (جهاز هارفارد ، Holliston ، MA) في 20 قطاعات ملم. جولة غيض من كل قطعة بتسخينه بالقرب من cauterizer (برينتري العلمية ، وشركة ، برينتري ، MA). قياس قطرها من طرف باستخدام ميكرومتر (صورة التطبيقية ، وشركة روتشستر ، نيويورك). نستخدم خياطة مع قطر الحافة النهائية لل0،21-0،22 مم للماوس مع وزن الجسم من 25-30 غرام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم جميع الأدوات الجراحية بواسطة التعقيم (الحد الأدنى 121 درجة مئوية ، 15 PSI ، لمدة 15 دقيقة). تعقيم طاولة الجراحة والمعدات المرتبطة باستخدام الايثانول 70 ٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير an 8-12 أسبوع من العمر الماوس (25-30 ز) مع 5 ٪ isoflurane (Aerrane ، باكستر ، ديرفيلد ، IL) في 30 ٪ O 2 / 70 ٪ N 2 O باستخدام نظام V - 10 التخدير (VetEquip ، المؤتمر الوطني العراقي . ، بليزانتون ، كاليفورنيا). بعد التخدير ، وخفض مستوى isoflurane والحفاظ عليه عند 1.5 ٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في موقف ضعيف على وسادة التدفئة. ادخال مسبار المستقيم ، ورصد والمحافظة على درجة حرارة الجسم بين 36،5-37،5 درجة مئوية باستخدام نظام TR - 200 درجة حرارة homeothermic (العلوم أدوات الجميلة ، وشركة فوستر سيتي ، كاليفورنيا). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حلق الفراء على منطقة الرقبة بطني مع كليبرز الكهربائية (برينتري العلمية) لفضح الجلد. تطهير الموقع الجراحية باستخدام ثلاثة طلبات من الايثانول 70 ٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت المجهر ستيريو تشريح (نيكون ، اليابان) ، وجعل خط الوسط 1 سم شق طويل على الرقبة. استخدام الكامشات (برينتري العلمية) لفضح الجراحي الميداني والتعرف على حق الشريان السباتي المشترك (CCA) ، الشريان السباتي الخارجي (ECA) ، والشريان السباتي الداخلي (ICA). تشريح بعناية الشرايين خالية من الأعصاب المحيطة واللفافة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح اللجنة الاقتصادية لأفريقيا بشكل أقصى زيادة تخثر واللجنة الاقتصادية لأفريقيا في الغدة الدرقية والشريان متفوقة (STA) فرع باستخدام مخثار القطبين (هوارد الصك ، وشركة توسكالوسا ، AL). اللجنة الاقتصادية لأفريقيا وخفض STA في الجزء متخثر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط خيوط الحرير two فضفاضة حول الجذع 8-0 اللجنة الاقتصادية لأفريقيا. تطبيق المشبك الأوعية الدموية (أدوات العلوم الجميلة) في التشعب من التقييم القطري المشترك في اللجنة الاقتصادية لأفريقيا والتحالف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير في نهاية الجذع اللجنة الاقتصادية لأفريقيا مع مقص الربيع Vannas على غرار (أدوات العلوم الجميلة). وسجل قياس طول الخيط حيدة 5-0 مدورة على الحافة. تضاف الى خياطة الفتحة وتقدم إلى المشبك. تشديد خيوط الحرير two حول تجويف ما يكفي لضمان الحفاظ على بعد التنقل من الدرز حيدة داخل المسكن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المشبك من التشعب. تقدم بلطف خياطة حيدة من التجويف للجنة الاقتصادية لأفريقيا في ICA لمسافة 9-10 ملم وراء انشعاب CCA لتسد أصل MCA. مدة الجراحة حوالي 30-45 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خياطة الفتحة على الرقبة ووضع الماوس في مربع 35 درجة مئوية التمريض للتعافي من التخدير ، وإعادته إلى القفص. يستغرق عادة 50-10 دقيقة للفئران للتعافي من التخدير. لأداء MCAO عابرة ، يمكن للباحث إعادة تخدير الماوس وسحب الخيط مرة أخرى إلى اللجنة الاقتصادية لأفريقيا جدعة بعد فترة من الزمن ، عادة ما بين 0،5-2 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أربع وعشرين ساعة بعد تحريض MCAO ، تخدير الفأر مع 5 ٪ isoflurane والموت ببطء من قبل خلع عنق الرحم. قطع رأس الفأر وجمع الدماغ. شريحة الدماغ coronally إلى شرائح 2 ملم الأربع مع مصفوفة الدماغ (برينتري العلمية) على الجليد. احتضان شرائح الدماغ في 2 ٪ 2،3،5 - triphenyltetrazolium كلوريد (TTC) (سيغما الدريخ) في برنامج تلفزيوني لمدة 20 دقيقة 1X في درجة حرارة الغرفة لتحديد حجم ومدى احتشاء. إصلاح شرائح المخ في 10 ٪ محايدة مخزنة حل الفورمالين (سيغما الدريخ) في 4 درجات مئوية حتى التصوير. ويمكن قياس مدى احتشاء كما هو موضح في البروتوكول إن الرب 955 ( <a href="https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=955">https://www.jove.com/index/Details.stp؟ID=955</a> ) 9. </li></ol> 2. ممثل النتائج وينظر للعوائق التي تولدها MCAO في المخطط والقشرة ظهراني. والمخطط هو أكثر حساسية لنقص تروية من القشرة الدماغية. وثلاثين دقيقة من إنتاج MCAO احتشاء فقط في المخطط ، بينما أكثر من ساعة واحدة من MCAO سيضر كل من المخطط والقشرة. بعد 24 ساعة MCAO دائمة ، فإن النسبة المئوية الإجمالية احتشاء ~ 40 ± 5 ٪ من الكرة الأرضية ومعدل وفيات بعد الجراحة ~ 10 ٪. استثنينا الفئران من إجراء المزيد من الدراسات إذا يحدث النزيف أثناء الجراحة ، ووقت تشغيل يتجاوز 90 دقيقة ، والفئران فشل في التعافي من التخدير في غضون 15 دقيقة ، أو وجدت نزيف في الدماغ أو شرائح في القاعدة من دائرة ويليس خلال الفحص بعد الوفاة . 61/2761fig1.jpg &quot;بديل =&quot; الشكل 1 &quot;/&gt; صور الممثل الشكل 1. شرائح الدماغ TTC الملطخة (المستوى الإكليلي 1-4) بعد 24 ساعة من MCAO دائمة. في المعيشة ينخفض ​​إنزيمي الأنسجة TTC بواسطة dehydrogenases لtriphenylformazan - 1،3،5 (TPF) ، وهو أحمر اللون ، بينما في المناطق نخرية يبقى الأبيض بسبب عدم وجود مثل هذا النشاط الأنزيمي. ولذلك ، يمكن تحديد المنطقة التي من احتشاء لونه أبيض بسبب عدم وجود لتحويل TTC ​​TPF. ملاحظة : TTC الحرارة والضوء إلى حد ما غير مستقر حتى المقاطع ملطخة حماية من الحرارة والضوء قدر الإمكان.

<ol><li>Howard, G., Howard, V. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHoward%2C+G+%22Distribution+of+stroke%3A+hetrogeneity+of+stroke+by+age%2C+and+sex%22">Distribution of stroke: hetrogeneity of stroke by age, and sex</a>. , Elsevier Inc. New York. 3-12 (2004).</li>
<li>Thom, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2006+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2006 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 113, e85-e151 (2006).</li>
<li>Mohr, J. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMohr%2C+JP+%22Middle+cerebral+artery+disease%22">Middle cerebral artery disease</a>. , Elsevier Inc. New York. 123-166 (2004).</li>
<li>Longa, E. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li>
<li>Chou, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+protein+kinase+Cdelta+as+a+mediator+of+stroke-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Neutrophil protein kinase Cdelta as a mediator of stroke-reperfusion injury.</a> J. Clin. Invest. 114, 49-56 (2004).</li>
<li>Hudgins, W. R., Garcia, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+electrocautery%2C+atmospheric+exposure%2C+and+surgical+retraction+on+the+permeability+of+the+blood-brain-barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The effect of electrocautery, atmospheric exposure, and surgical retraction on the permeability of the blood-brain-barrier.</a> Stroke. 1, 375-380 (1970).</li>
<li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+stroke%3A+size%2C+mechanism%2C+and+purpose%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2, 396-409 (2005).</li>
<li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+ischemic+stroke%3A+overview+of+major+experimental+rodent+models%2C+pathophysiology%2C+and+therapy+of+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Biochem.+Behav%22%5BJournal%5D)">Acute ischemic stroke: overview of major experimental rodent models, pathophysiology, and therapy of focal cerebral ischemia.</a> Pharmacol. Biochem. Behav. 87, 179-197 (2007).</li>
<li>Taniguchi, H., Andreasson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hypoxic-ischemic+encephalopathy+model+of+perinatal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The hypoxic-ischemic encephalopathy model of perinatal ischemia.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
</ol>

ليس لدينا أية مصالح متضاربة المحتملة في الكشف عنها.

ويشيع استخدام MCAO في الفئران لنقص تروية الدماغ نموذج التنسيق بين البشر. أصبح استخدام الفئران لدراسات السكتة الدماغية أكثر تواترا بسبب توافر سلالات معدلة وراثيا وخروج المغلوب. هناك بعض التفاصيل الهامة أن نلاحظ في البروتوكول : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فمن الضروري للحفاظ على درجة حرارة الجسم الماوس أثناء الجراحة وقبل أن يتعافى تماما من التخدير. درجة حرارة الجسم له تأثيرات على مدى احتشاء ؛ انخفاض درجة حرارة الجسم وارتفاع الحرارة يزيد من حجم احتشاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حين فضح وعزل التقييم القطري المشترك واللجنة الاقتصادية لأفريقيا ، وتجنب إلحاق أضرار العصب المبهم في مكان قريب والقصبة الهوائية ، التي يمكن أن تزيد من حجم واستمرارية انخفاض احتشاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أبدا إدراج خياطة حيدة أكثر من 10 ملم تمرير التشعب. ويمكن للخياطة إدراج بعيدا خرم الشريان الدماغي الأمامي ويؤدي إلى نزف في الدماغ. يمكن رأى المقاومة عندما متقدمة حول خياطة 90-10 ملم وراء النقطة التشعب. إذا حدث هذا ، يجب على الباحث وقف التقدم في خياطة الجروح وتأكيد المسافة. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>مادة كيميائية</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td>95045-588</td><td></td></tr><tr><td>نظام التخدير V-10</td><td>معدة</td><td>VetEquip</td><td>901807</td><td></td></tr><tr><td>وحدة التحكم في درجة الحرارة TR-200</td><td>معدة</td><td>Fine Science Tools</td><td>21060</td><td></td></tr><tr><td>ماكينة حلاقة كهربائية</td><td>معدة</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>CLP-9931</td><td></td></tr><tr><td>مجهر تشريحي</td><td>معدة</td><td>Nikon Instruments</td><td>SMZ745T</td><td></td></tr><tr><td>نظام مباعدة</td><td>معدة</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>ACD-014</td><td></td></tr><tr><td>مخثر ثنائي القطب</td><td>معدة</td><td>Howard Instrument</td><td>64000</td><td></td></tr><tr><td>خيط جراحي حريري</td><td>مادة</td><td>Harvard Apparatus</td><td>510479</td><td></td></tr><tr><td>خيط جراحي أحادي الشعيرة</td><td>مادة</td><td>Harvard Apparatus</td><td>723351</td><td></td></tr><tr><td>مشبك وعائي</td><td>معدة</td><td>Fine Science Tools</td><td>00396-01</td><td></td></tr><tr><td>مقص فاناس</td><td>معدة</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>قاعدة تثبيت الدماغ</td><td>معدة</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>BS-2000C</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride</td><td>مادة كيميائية</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>فورمالين منظم متعادل 10%</td><td>مادة كيميائية</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT5011</td><td></td></tr></tbody></table>

نموذج الفأر من انسداد الشريان الدماغي الأوسط

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

السكتة الدماغية هي الأكثر شيوعا مرض عصبي قاتل في الولايات المتحدة (1). الغالبية من السكتات الدماغية (88 ٪) نتيجة انسداد الأوعية الدموية في الدماغ (السكتة الدماغية) 2. منذ السكتات الدماغية أكثر (~ 80 ٪) تحدث في أراضي الشريان الدماغي الأوسط (MCA) 3 ، وركزت العديد من النماذج الحيوانية السكتة الدماغية التي تم وضعها على هذا الشريان. نموذج حيدة داخل اللمعة من انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAO) ينطوي على ادراج خيوط جراحية في الشريان السباتي الخارجي والترابط إلى الأمام في الشريان السباتي الداخلي (ICA) حتى غيض occludes أصل MCA ، مما أدى إلى وقف تدفق الدم واحتشاء الدماغ لاحقة في 4 أراضي MCA. ويمكن استخدام هذه التقنية لنموذج إطباق دائمة أو عابرة 5. إذا تمت إزالة خياطة بعد فترة معينة (30 دقيقة ، ح 1 ، ح ​​أو 2) ، ويتحقق ضخه (MCAO عابرة) ، وإذا ترك خيوط في مكانه (24 ساعة) الإجراء هو مناسبة كنموذج للMCAO دائمة . هذه التقنية لا تتطلب قطع القحف ، وهو إجراء جراحة الأعصاب لإزالة جزء من الجمجمة ، والتي قد تؤثر على الضغط داخل الجمجمة ، ودرجة الحرارة 6. أصبح الأسلوب الأكثر استخداما لتقليد دائم ونقص تروية دماغية عابر التنسيق في الجرذان والفئران 7،8. لتقييم مدى احتشاء دماغي ، ونحن وصمة عار شرائح الدماغ مع 2،3،5 - triphenyltetrazolium كلوريد (TTC) لتحديد نقص تروية أنسجة المخ 9. في هذا الفيديو ، ونحن لشرح طريقة MCAO وتحديد حجم احتشاء بواسطة تلطيخ TTC.

علينا أن نظهر في شريط الفيديو وسيلة لإنتاج وسط انسداد الشريان الدماغي في فئران بالغة باستخدام حيدة داخل اللمعة. علينا أن نبين كيفية تقييم مدى احتشاء الدماغ بواسطة 2،3،5 - triphenyltetrazolium تلطيخ (TTC) كلوريد.

تعد السكتة الدماغية المرض العصبي المميت الأكثر شيوعاً في الولايات المتحدة 1. وتنتج غالبية السكتات الدماغية (88%) عن انسداد الأوعية الدموية في...

مرحباً، اسمي تيرينس جام. واسمي هاي جو. سنوضح لكم اليوم كيفية تنفيذ نموذج فأر لإغلاق الشريان الدماغي الأوسط.لنبدأ الآن. تبدأ هذه التجربة بتحضير خيط الجراحة. ابدأ بقص خيط الجراحة إلى قطع بطول 20 millimeter.قم بتدوير الطرف عن طريق تقريب الخيط الجراحي نحو جهاز الكي. بعد ذلك، قم بقياس طرف الخيط الجراحي. الآن أصبحنا مستعدين لبدء الجراحة مع وضع القناع على ظهرها.قم بإجراء شق جراحي على طول الخط الناصف. استخدم الملقط للكشف عن الـ ECA. يوجد العديد من الفروع على طول الشريان السباتي الخارجي ECA.أحد هذه الفروع هو الشريان الدرقي العلوي (STA). يجب تخثير الشريان الدرقي العلوي باستخدام ملقط ثنائي القطب. بعد ذلك، يجب قطع الشريان الدرقي العلوي للسماح بعزل الشريان السباتي الخارجي (ECA) بشكل أفضل.بعد ذلك، يتم تخثير الشريان السباتي الخارجي (ECA) وبحجم بعيد قدر الإمكان عن الشريان السباتي المشترك (CCA). في هذه المرحلة، قد ترغب في عزل الـ ECA لتسهيل الوصول إليه. ثم قم بربط غرزتين بشكل فضفاض حول الـ ECA على بُعد بضعة مليمترات من بعضهما البعض.ضع الملقط عند تفرع الشريان السباتي المشترك (CCA) إلى الشريان السباتي الخارجي (ECA) والشريان السباتي الداخلي (ICA). ثم ابدأ بربط طرف جذع الشريان السباتي الخارجي (ECA). بعد ذلك، أعد وضع الشريان السباتي الخارجي (ECA) ليكون محاذياً للشريان السباتي الداخلي (ICA).يسمح ذلك للخيط الجراحي بالدخول بشكل مستمر من الشريان السباتي الخارجي (ECA) إلى الشريان السباتي الداخلي (ICA). قم بقياس الطول الإجمالي للخيط قبل الإدخال. أدخل الخيط الجراحي في الفتحة التي تم إنشاؤها عن طريق ربط جذع الشريان السباتي الخارجي (ECA).عند مرور الخيط الجراحي بالعقدة القاصية، قم بتثبيت العقدة عن طريق شدّها. بعد ذلك، قم بإزالة الملقط وأدخل الخيط الجراحي بشكل أكبر في الشريان السباتي الخارجي (ECA). وعندما يمر الخيط الجراحي بالعقدة الدانية، قم بتثبيت العقدة عن طريق شدّها.بعد إحكام ربط العقدتين، أدخل الخيط الجراحي بعناية على طول الشريان حتى يتم تمرير 9 إلى 10 مليمترات من الخيط. نقطة التفرع، ويمكن القيام بذلك عن طريق طرح طول الخيط وصولاً إلى نقطة التفرع من الطول الإجمالي للخيط. عندما يصل الخيط إلى منشأ الـ MCA.يتم سد الشريان الدماغي الأوسط (MCA). وبعد مرور 24 ساعة، يتم التضحية بالكتل وعزل الدماغ. ولإجراء صبغ TTC، يوضع الدماغ المعزول في قالب ويتم تقطيعه باستخدام شفرة حلاقة.ثم يتم وضع الدماغ في 2%TTC لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. وأخيراً، يتم تثبيت الدماغ طوال الليل في محلول فورمالين منظم متعادل.تعد عملية تحضير الغرز عملية دقيقة. إليكم بعض النصائح المفيدة. ضع الغرزة وجهاز الكي بهذا الشكل.بعد ذلك، ومع الحفاظ على جهاز الكي ثابتاً، قم بتقريب الخيط الجراحي ببطء. ثم قم بقياس الخيط الجراحي للتأكد من أنه بالحجم المناسب. يبلغ حجم الخيط الجراحي المستخدم في هذه التجربة حوالي 0.21 إلى 0.22 Millimeters.لبدء الجراحة، ضع القناع على ظهر الحيوان وقم بتخديره باستخدام 30% oxygen و 70% nitrogen. اصنع شقاً جراحياً على طول الخط الناصف، ثم استخدم المباعدات لفتح الوصول إلى المنطقة. يجب أن يبدو الأمر على النحو التالي.افصل النسيج باستخدام الملقط بعناية. ثم قم بكشف وعزل الشريان السباتي الخارجي (ECA) باستخدام الملقط؛ وفي أثناء عملية عزل الـ ECA، يجب تخثير وقطع الشريان الدرقي العلوي (STA). يتيح ذلك عزل قطعة أطول من الـ ECA.بعد ذلك، يجب تخثير الشريان السباتي الخارجي (ECA) باستخدام ملقط ثنائي القطب. وبعد التخثير، يجب قطع الشريان السباتي الخارجي (ECA). بعد ذلك، قم بعزل الشريان السباتي الخارجي (ECA) واربط غرزتين بشكل فضفاض حول الشريان السباتي الخارجي (ECA) بفاصل بضعة مليمترات بينهما. يجب أن تبدو النتيجة مشابهة لهذا الشكل.الآن، قم بوضع المشبك عند تفرع الشريان السباتي المشترك (CCA) إلى الشريان السباتي الداخلي (ICA) والشريان السباتي الخارجي (ECA). تأكد من أن المشبك يسد تدفق الدم إلى الشريان السباتي الخارجي (ECA) تمامًا. بعد ذلك، قم بوضع مشبك على طرف جذع الشريان السباتي الخارجي (ECA).قم بقياس الخيط الجراحي قبل الإدخال بعد إجراء فتحة في الشريان السباتي الخارجي (ECA). أدخل الخيط والفتحة بما يتجاوز العقدة القاصية. بعد مرور الخيط عبر العقدة القاصية، قم بشد العقدة.بعد ذلك، قم بإزالة الملقط. وبعد التحقق من أن العقدة القاصية محكمة، أدخل خيط الجراحة لمسافة أبعد على طول الشريان السباتي الخارجي (ECA) متجاوزاً العقدة الدانية. ثم قم بشد العقدة الدانية.الآن، قم بإدخال الخيط الجراحي بعناية على طول الشريان السباتي الخارجي (ECA) وصولاً إلى الشريان السباتي الداخلي (ICA). استمر في إدخال الخيط الجراحي على طول الشريان السباتي الداخلي (ICA) حتى يتجاوز الخيط نقطة التشعب بمسافة تتراوح من 9 إلى 10 ملم. يمكن القيام بذلك عن طريق طرح طول الخيط الجراحي حتى نقطة التشعب من إجمالي طول الخيط.بعد ذلك، قم بقص الخيط الجراحي بحيث لا يتسبب في إصابة الأنسجة المحيطة. ثم قم بخياطة الشق الجراحي واترك Mouse للتعافي. ابدأ التحضير لصباغة TTC بعد 24 ساعة من الجراحة.ابدأ بقتل الفأر عن طريق خلع الفقرات العنقية. ثم اعزل الدماغ من الجمجمة وضعه في قالب. بعد ذلك، قم بتقطيعه باستخدام شفرة حلاقة، ثم صبغ الدماغ في 2%TTC لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.ثم يتم التثبيت طوال الليل وفي محلول منظم متعادل بتركيز 10% من أجل صبغ الميلين. هذا كل شيء. شكراً للمشاهدة وبالتوفيق في تجاربكم.

mouse-model-of-middle-cerebral-artery-occlusion

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

الخيطية انسداد الشريان الدماغي الأوسط هو نموذج مشترك لدراسة السكتة الدماغية لدى الفئران.

السكتة الدماغية النمذجة في الفئران -- الشرق انسداد الشريان الدماغي مع نموذج الشعيرة

وسط انسداد الشريان الدماغي داخل اللمعة (MCAO) النموذج هو النموذج الأكثر شيوعا المستخدمة بين النماذج التجريبية السكتة الدماغية. هنا سوف نظهر نموذج كامل بالتفصيل مع دليل flowmetry دوبلر ليزر ، والنتائج ممثلها.

الشريان الدماغي الأوسط انسداد داخل اللمعة (MCAO) النموذجي للاصابة بالسكتة الدماغية مع توجيه الليزر دوبلر Flowmetry في الفئران

ويرد هنا في داخل اللمعة الأوسط نموذج انسداد الدماغي في الفئران. يتم تقييم مدى احتشاء دماغي من قبل على درجة عصبية والكريزيل تلطيخ البنفسجي، وهو بديل لتلطيخ TTC، وتقدم ميزة كبيرة لاختبار بالتوازي علامات الاهتمام عديدة.

نموذج الفأر من MCAO داخل اللمعة: الدماغي التقييم عائق من قبل تلوين البنفسج الكريزيل

وتستخدم على نطاق واسع نماذج مختلفة من الفئران وسط انسداد الشريان الدماغي (MCAO) في أبحاث الدماغ التجريبية. هنا، علينا أن نظهر نموذج عبر الجمجمة دائمة القاصي MCAO التي تنتج احتشاء القشرية ثابت من حجم الموافق الضرر الذي تفرضه غالبية السكتات الدماغية الإقفارية الإنسان.

السكتة الدماغية النمذجة في الفئران: التخثر الدائم من الشريان الدماغي الأوسط القاصي

نموذج الفأر من ضخه الاسكيمية الدماغي أنشئت للتحقيق في الفسيولوجيا المرضية للسكتة الدماغية. ونحن ديستالي سد الشريان الدماغي الأوسط الحق والشريان السباتي المشترك الحق واستعادة تدفق الدم بعد 10 أو 40 دقيقة من الاسكيمية.

انسداد السفينتين الماوس النموذجي لضخه الاسكيمية الدماغي

تستخدم نماذج مختلفة من انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAo) في أبحاث السكتة الدماغية التجريبية. هنا ، يتم وصف نموذج السكتة الدماغية التجريبية من MCAo عابرة عبر الشريان السباتي الخارجي (ECA) ، والذي يهدف إلى تقليد السكتة الدماغية البشرية ، والتي تتم إزالة خثرة الأوعية الدماغية بسبب تحلل الجلطة العفوية أو العلاج.

النمذجة السكتة الدماغية في الفئران: انسداد الشريان الدماغي الأوسط عابرة عن طريق الشريان السباتي الخارجي

يوضح هذا البروتوكول نموذجا فريدا لضربة الماوس مع احتشاء متوسط الحجم ومعدل بقاء ممتاز. يسمح هذا النموذج لباحثي السكتة الدماغية قبل السريرية بتمديد مدة نقص التروية ، واستخدام الفئران المسنة ، وتقييم النتائج الوظيفية طويلة الأجل.

نموذج معدل لانسداد الشريان الدماغي الأوسط عبر الجمجمة لدراسة نتائج السكتة الدماغية في الفئران المسنة

يصف هذا البروتوكول نموذج نقص التروية الدماغية البؤري العابر في الفئران من خلال انسداد الشريان الدماغي الأوسط داخل اللمعة. بالإضافة إلى ذلك ، يتم عرض أمثلة لتقييم النتائج باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي والاختبارات السلوكية.

نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط العابر للسكتة الدماغية

هنا ، نقدم بروتوكولا لإنشاء نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط البعيد (dMCAO) من خلال التخثير الكهربائي عبر الجمجمة في الفئران C57BL / 6J وتقييم السلوك العصبي اللاحق والسمات النسيجية.

تحريض السكتة الدماغية الحادة في الفئران باستخدام تقنية انسداد الشريان الأوسط البعيد

يصف البروتوكول الحالي نموذج الفئران لانسداد / إعادة تروية الشريان الدماغي الأوسط الذي يحافظ على البنية التشريحية للأوعية الدماغية دون التسبب في ضرر.

نموذج فئران لانسداد / إعادة تروية الشريان الدماغي الأوسط دون الإضرار بالتركيب التشريحي للأوعية الدماغية

كان هدف هذه الدراسة هو إيجاد طريقة قابلة للتكرار لإجراء استئصال الجمجمة تليها انسداد دائم وانتقائي للشريان الدماغي الأوسط في الفئران لتطبيقها في الدراسات التجريبية لاضطرابات الذاكرة الحركية والمكانية.

الإغلاق الانتقائي والدائم للشريان الدماغي الأوسط عند الفئران: نهج تجريبي لدراسة عجز الذاكرة الحركية والمكانية

تعلم نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط في الفئران باستخدام الخيط الواحد داخل التجويف. يوضح هذا البروتوكول خطوات الجراحة وتقييم حجم النخر باستخدام صبغة TTC لدراسة السكتة الدماغية الإقفارية.

نموذج الفأر من انسداد الشريان الدماغي الأوسط

استكشف المزيد من الفيديوهات