Name: نقل الجينات لقصور القلب الدماغية في نموذج ما قبل السريرية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 35 s
Description: اكتشف طريقة نقل الجينات لعلاج قصور القلب الدماغي باستخدام نموذج الخنزير. تُتيح هذه التقنية تقييم فعالية العلاج الجيني باستخدام المتجهات الفيروسية بشكل موثوق وقابل للتكرار.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ويؤيد هذا العمل من قبل المؤسسة من خلال شبكة Leducq Caerus (RJH) ، عن طريق R01 NIH HL093183 ، HL088434 ، HL071763 ، HL080498 ، HL083156 وP20HL100396 (RJH). وأيد DL من قبل مؤسسة الأبحاث الألمانية. نود أن نشكر لورين Leonardson لمساعدتها التقنية في هذا المشروع.

1. احتشاء عضلة القلب خلق <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إناث الخنازير يوركشاير (20kg) من صناعات التكنولوجيا الحيوية الحيوانية (Doylestown ، والسلطة الفلسطينية) هي مرحلة ما قبل العلاج باستخدام Telazol (تلييتامين / zolazepam) (8.0 ملغ / كلغ) والبوبرينورفين (0.6 ملغ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وintubated الحيوانات والتهوية ثم مع الأكسجين 100 ٪. يتم الاحتفاظ التخدير العام مع البروبوفول (5-8mg/kg/hr) في جميع أنحاء الداخلي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مستعدة للموقع الفخذ مع ايزوبروبيل 70 ٪ تليها بوفيدون اليود. ثقب عن طريق الجلد يتيح الوصول إلى الشرايين والتنسيب للغمد. بعد الإدراج غمد ، تدار 3000-5000 وحدة دولية من الهيبارين الرابع للحفاظ على الوقت لتنشيط تجلط الدم 250-300 ثواني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدار جرعة من الأميودارون بلعة (75 ملغ) عن طريق الحقن العضلي. بدء الحقن في الوريد من حقيبة مل 1000 المالحة مع الأميودارون (75 ملغ) ، الأتروبين (2 ملغ) ، وخلات البوتاسيوم (20 mEq) وحافظت باستخدام معدل 150 مل / ساعة في جميع أنحاء الداخلي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> A 7 الاب هوكي العصا القسطرة (القلبية ، ميامي ، فلوريدا) متقدمة على الشريان التاجي الأيسر ويتم إجراء تصوير الأوعية التاجية. متقدمة سلك دليل 0.014 بوصة (ابوت ، وبارك ، وايل) في الجزء الأمامي الأيسر الشريان التاجي النازل (LAD). و8 ملم طويلة ، 4.0 ملم VOYAGER الإفراط في سلك متقدمة بالون (ابوت ، وبارك ، وايل) والمتمركزة على LAD القريبة ، ويتم نفخ البالون التاجية إلى 3 أجهزة الصراف الآلي. ويؤكد انسداد LAD بواسطة عائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع الكهربائي المستمر ومراقبة الدورة الدموية ، والحفاظ على انسداد لمدة 90 دقيقة. عدم انتظام ضربات القلب البطيني الخبيث قد يحدث أحيانا في أول 40 دقيقة ، وفي هذه الحالة التسليم الفوري للصدمات المباشرة الحالية من 200 إلى 300 J J تدار. عادة ما تكون هناك إطارين وقت الذروة من عدم انتظام ضربات القلب ، واحدة في الفترة بين 2 و 10 دقيقة والآخر بين 25 و 35 دقيقة بعد تضخم البالون. الرصد والمتابعة الحثيثة من صدمات الكهربائية الفورية هي المفتاح لاحتشاء عضلة القلب وإنشاء ناجحة ، لأن هناك حالات أكثر من 95 ٪ من الذين يدخلون الرجفان البطيني ضمن الأطر الزمنية المشار إليها. إذا كان يتم تنفيذ إزالة الرجفان فورية ومناسبة ، ومعدل البقاء على قيد الحياة مرتفعة جدا. إذا كان ضغط الدم أقل من 80 مم زئبق قطرات ، ويتم إنجاز تحميل مع حجم التسريب السريع ملحي في الوريد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وبددت البالون وتتم إزالة كافة الأجهزة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتم إزالة غمد من شريان الفخذ ، هو حجب التخدير ، ويتم رصد هذا الحيوان خلال فترة الانتعاش. وانخفض ملحي في الوريد مع الأميودارون ، اتروبين والبوتاسيوم خلات التسريب في 50 مل / ساعة وتعطى له بين عشية وضحاها. يدار من الحقن العضلي من Nitroglycerline وFuroscemide. ثم سمح للحيوان لاسترداد واصلت رصد دقيق ECG ما لا يقل عن 3 ساعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وستعطى الاسبرين (200mg) ص لمدة خمسة أيام. </li></ol> المضاعفات شيوعا أثناء وبعد إجراء احتشاء عضلة القلب وخلق تشريح الشريان التاجي ، ثقب دموي الموقع ، عدم انتظام ضربات القلب ، وفشل القلب. وصقل تقنية ومطلوب رصد شامل لمنع وإدارة هذه المضاعفات. 2. حقن الفيروس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتعد هذه الحيوانات كما هو مبين أعلاه في خلق احتشاء عضلة القلب steps1 - 3. وينبغي أن تعطى الجرعة نفسها من الهيبارين لمنع تجلط الدم خلال حقن الفيروس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عصا الهوكي 5Fr القسطرة (القلبية ، ميامي ، فلوريدا) متقدمة على الشريان التاجي الأيسر. بعد عائية ، وهما من الأسلاك دليل 0.014 بوصة والمتقدمة ، واحدة في LAD واحدة في الشريان التاجي الأيسر المنعطف (LCX) لتحديد موقف القسطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويوجه الدم الشرياني (-20 مل) من القسطرة. لمنع نقص التروية خلال التسريب ، واستخدام نصف الدم المخفف للحل. يختلط الفيروس في الدم مع 10 مل و 20 مل مخففة لمع المالحة. كما يتم تخفيف ما تبقى من 10 مل و 20 مل و تسليم الفيروس المستخدمة المتبقية داخل تجويف القسطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء النتروجليسرين عن طريق الوريد (20 ميكروغرام / دقيقة) عن طريق الوريد الأذن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع الطرف قسطرة في المسالك القريبة الرئيسي اليسار. ويتم رصد الضغط من خلال قسطرة لضمان أن لا التوتيد القسطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم حقن الفيروس في الدم المختلط (15 مل) من خلال قسطرة خلال 15 دقيقة باستخدام مضخة التسريب في الشريان التاجي الأيسر. بعد 15 دقيقة ، يتم فيها تبادل المحقنة إلى الاحمرار ، واستمر لمدة 10 دقيقة التسريب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم إصلاح سلك ومعدات قسطرة الشريان التاجي إلى الحق بنفس الطريقة التي الشريان التاجي الأيسر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم حقن ما تبقى من 5 مل من الدم المختلط مع الفيروس في الشريان التاجي الأيمن لمدة 5 دقائق ثم 10 دقائق من طرد. </li></ol> 3. ممثل القضية الشكل 1 يبين تصوير البطينات اليسار في 1 الشهر بعد احتشاء عضلة القلب خلق. هو ضعف كبير في جدار البطين الأيسر الاقتراح مع جزء طرد (EF) من31 ٪. الشكل 2 يبين المقاطع العرضية من البطين الأيسر في 1 الشهر. وينظر الى ندبة كبيرة من القاعدة إلى قمة الجدار الأمامي. وEF المتوسط ​​في 1 الشهر بعد احتشاء عضلة القلب في هذا النموذج هي 36 ٪ ومتوسط ​​حجم نهاية الانبساط هو 83 مل ، في حين أن متوسط ​​هذه الحيوان في نفس الحجم من دون احتشاء عضلة القلب هو 68 ٪ و 42 مل ، على التوالي. ويبين الشكل 3 التعبير عن غال بيتا في منطقة البطين الأيسر منطقة الحدود 1 بعد شهر من حقن الغدة المرتبطة بفيروس (2 × 10 12 الجسيمات الدناز resitant من CMV rAAV1 لاك - Z). تم العثور على التعبير المعزز في مجال حقن الفيروس. <img src="/files/ftp_upload/2778/2778fig1.jpg" alt="الشكل 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 1"> الشكل 1. كسر قياس الطرد من تصوير البطينات اليسار 1 شهر احتشاء عضلة القلب بعد خلق. هي متسعة البطين الأيسر إلى 92.5 مل ، وضعف ملحوظ الجدار الأمامي للحركة. <img src="/files/ftp_upload/2778/2778fig2.jpg" alt="الشكل 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 2"> الشكل 2 ، والمقاطع العرضية من البطين الأيسر في 1 الشهر احتشاء عضلة القلب بعد إنشاء ملون بواسطة ثلاثي فينيل كلوريد tetrazolium لتحديد منطقة الندبة. وينظر الى ندبة كبيرة من القاعدة إلى قمة الجدار الأمامي. <img src="/files/ftp_upload/2778/2778fig3.jpg" alt="الشكل 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 3"> الشكل 3. بيتا غال التعبير الناجم عن الغدة المرتبطة بفيروس (2 × 10 12 الجسيمات الدناز المقاومة للCMV rAAV1 لاك - Z). تم العثور على التعبير المعززة على الحدود بين منطقة التجارة احتشاء والأنسجة الطبيعية (1) ، بعد شهر من حقن الفيروس intracoronary. الصورة اليمنى السفلى ويبين سيطرة سلبية ، حيث تم حقن المياه المالحة فقط طبيعية في الشرايين التاجية باستخدام بروتوكول نفسه.

<ol><li>Perez de Prado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Closed-chest+experimental+porcine+model+of+acute+myocardial+infarction-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Closed-chest experimental porcine model of acute myocardial infarction-reperfusion.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 60, 301-306 (2009).</li>
<li>Angeli, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Left+ventricular+remodeling+after+myocardial+infarction%3A+characterization+of+a+swine+model+on+beta-blocker+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Left ventricular remodeling after myocardial infarction: characterization of a swine model on beta-blocker therapy.</a> Comp Med. 59, 272-279 (2009).</li>
<li>Urdaneta, F., Lobato, E. B., Kirby, D. S. &amp, Sidi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treating+myocardial+stunning+randomly%2C+with+either+propofol+or+isoflurane+following+transient+coronary+occlusion+and+reperfusion+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Card+Anaesth%22%5BJournal%5D)">Treating myocardial stunning randomly, with either propofol or isoflurane following transient coronary occlusion and reperfusion in pigs.</a> Ann Card Anaesth. 12, 113-121 (2009).</li>
<li>Jaski, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+upregulation+by+percutaneous+administration+of+gene+therapy+in+cardiac+disease+%28CUPID+Trial%29%2C+a+first-in-human+phase+1%2F2+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22J+Card+Fail%22%5BJournal%5D)">Calcium upregulation by percutaneous administration of gene therapy in cardiac disease (CUPID Trial), a first-in-human phase 1/2 clinical trial.</a> J Card Fail. 15, 171-181 (2009).</li>
</ol>

جميع المؤلفين ليس لديهم الجمعيات التجارية التي قد تشكل خطرا على النحو تضارب في المصالح فيما يتعلق المخطوطة.

من بين الأسباب المختلفة لفشل القلب ، نقص تروية هي حتى الآن الأكثر شيوعا في المسببات. للتغلب على هذا المرض الخطير ، ويجري وضع مناهج علاجية مختلفة. مطلوبة التقييمات حذرا من العلاجات قبل أن يمكن لهذه العلاجات واعدة يمكن تطبيقها على العيادات. ولذلك ، وإنشاء نموذج فشل القلب الدماغية التي تمثل الحالات السريرية للمرضى أمر بالغ الأهمية لتطوير علاجات قصور القلب. لدينا نموذج احتشاء عضلة القلب الخنازير يلبي هذه الاحتياجات متعدية. <p class="jove_content" style=";text-align:right;direction...

<table><tbody><tr><td>تيلاتزول (Telazol)</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td>0856-9050-49</td><td></td></tr><tr><td>بروبوفول (Propofol)</td><td>APP Pharmaceuticals</td><td>63323-270-20</td><td></td></tr><tr><td>هيبارين (Heparin)</td><td>APP Pharmaceuticals</td><td>63323-540-11</td><td></td></tr><tr><td>أميودارون (Amiodarone)</td><td>APP Pharmaceuticals</td><td>63323-616-03</td><td></td></tr><tr><td>كبريتات الأتروبين (Atropin Sulfate)</td><td>Med-Pharmex</td><td>54925-063-10</td><td></td></tr><tr><td>أسيتات البوتاسيوم (Potassium acetate)</td><td>American Regent Inc.</td><td>2053-25</td><td></td></tr><tr><td>نيتروجليسرين (Nitroglycerine)</td><td>American Regent Inc.</td><td>4810-25</td><td></td></tr><tr><td>ساليكس (فوروسيميد) (Salix (Furosemide))</td><td>Intervet Inc.</td><td>710461</td><td></td></tr><tr><td>قسطرة "عصا الهوكي" بمقاس 5 Fr</td><td>Cordis</td><td>556-278-0L</td><td></td></tr><tr><td>قسطرة "عصا الهوكي" بمقاس 7 Fr</td><td>Cordis</td><td>778-278-00</td><td></td></tr><tr><td>سلك تاجي (Coronary wire)</td><td>Abbott Laboratories</td><td>1044588</td><td></td></tr><tr><td>بالون تاجي (Coronary balloon)</td><td>Abbott Laboratories</td><td>1009447-08</td><td></td></tr><tr><td>غمد بمقاس 8Fr</td><td>Terumo Medical Corp.</td><td>RSS801</td><td></td></tr></tbody></table>

نقل الجينات لقصور القلب الدماغية في نموذج ما قبل السريرية

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

ويجري تطوير مختلف التكنولوجيات الناشئة للمرضى المصابين بقصور في القلب. راسخة التقييمات قبل السريرية ضرورية لتحديد فعاليتها وسلامتها. العلاج الجيني باستخدام نواقل الفيروسية هي واحدة من أكثر الأساليب واعدة لعلاج أمراض القلب. تسليم الفيروسية من جينات مختلفة مختلفة عن طريق تغيير الجينات الحاملة لديها امكانات لا حصر لها العلاجية. في هذا الفيديو ، وتقدم العملية الكاملة لنموذج حيواني من خلق فشل القلب تليها نقل الجينات باستخدام نموذج الخنازير. أولا ، يتم إنشاء احتشاء عضلة القلب عن طريق الاغلاق الأمامي الأيسر النازل القريبة الشريان التاجي. إعادة عرض نتائج القلب في فشل القلب المزمن. فريدة من نوعها لنموذجنا هو ندبة كبيرة نوعا ما وهو ما يعكس حقا المرضى الذين يعانون من قصور القلب الذين يحتاجون إلى العلاج شديد العدوانية من أجل تحقيق نتائج إيجابية. احتشاء عضلة القلب بعد إنشاء وتطوير ندبا ، ويتجلى حقنة intracoronary من الفيروس مع التسريب النيتروجلسرين في وقت واحد. لدينا وسيلة حقن يوفر بسيطة وفعالة نقل الجينات مع الجينات المحسنة. وقد أثبت هذا المزيج من احتشاء عضلة القلب نموذجا الخنازير مع فيروس التسليم intracoronary أن تكون منهجية متسقة وقابلة للتكرار ، والذي لا يساعد فقط على اختبار تأثير الجينات الفردية ، ولكن أيضا مقارنة فعالية العديد من الجينات العلاجية كمرشحين.

ووصف طريقة نقل الجينات لعلاج قصور القلب الإقفاري باستخدام نموذج الخنازير من احتشاء عضلة القلب. لدينا وسيلة بسيطة وقابلة للتكرار تمكننا من تقييم فعالية بسهولة نقل الجينات المختلفة مع طريقة بسيطة جدا وقابلة للتكرار.

يتم تطوير تقنيات ناشئة متنوعة للمرضى الذين يعانون من فشل القلب. وتعد التقييمات قبل السريرية الراسخة ضرورية لتحديد...

العلاج الجيني. يُعد استخدام الناقلات الفيروسية أحد أكثر النهج واعدة لعلاج أمراض القلب. يتم عرض الإجراءات التي نتبعها لإنشاء نموذج لفشل القلب الإقفاري، بالإضافة إلى إيصال الجينات بواسطة الناقل الفيروسي في هذا الفيديو.تتمثل الخطوة الأولى في إحداث احتشاء في عضلة القلب باستخدام نموذج من الخنازير. وللقيام بذلك، يتم إدخال سلك تاجي في الشريان التاجي، يليه بالون سدّ. وباستخدام الوصول الوعائي الداخلي، يتم نفخ البالون لسد الشريان التاجي تماماً.ونتيجة لذلك، تتشكل منطقة احتشاء كبيرة في المنطقة الأمامية، ويصاب الخنازير بفشل قلبي مزمن. والخطوة التالية هي حقن الفيروس، حيث تُحقن الناقلات الفيروسية ببطء في الشريان التاجي.سيتم نقله عبر مجرى الدم وتوزيعه في عضلة القلب. وسيدخل الفيروس إلى الخلايا العضلية القلبية، ثم إلى النواة، ويرسل إشارات لإنتاج البروتينات. وستعمل البروتينات المُعبر عنها على تعزيز الأداء القلبي وزيادة الوظيفة العامة.نستعرض في هذا الفيديو إجراءات العلاج الجيني لفشل القلب الإقفاري باستخدام نموذج خنزيري. سنوضح أولاً كيفية إحداث احتشاء في عضلة القلب، ثم سننتقل لشرح عملية التوصيل عبر الشريان التاجي لناقل فيروسي. نستخدم هذا الإجراء لاختبار فعالية وسلامة عمليات نقل جيني مختلفة.لنبدأ الآن. لبدء الإجراء، يتم تحفيز التخدير في الخنزير باستخدام telazol. قم بإنشاء خط وريدي في وريد الأذن، ثم قم بإجراء التنبيب للخنزير.ضع الخنزير في وضعية الاستلقاء الظهري. استخدم propofol للتخدير العام أثناء التجربة. وللحفاظ على ضغط الدم، قم بتنظيف منطقة الأربية بالكحول متبوعاً باليود.غطِّ الموقع بشرشف معقم وجهز كافة الأدوات المعقمة. قم بثقب الشريان الفخذي باستخدام إبرة مقاس 18 gauge باتباع طريقة Seldinger. عند رؤية تدفق دم نابض، أدخل السلك، ثم ضع الغمد؛ وبعد إدخال الغمد، احقن الهيبارين لمنع تكون الخثرات أثناء التجربة.بعد ذلك، قم بتحضير كيس محلول ملحي يحتوي على 75 milligrams من amiodarone، و20 milliequivalents من البوتاسيوم، و20 milligrams من atropine، واستخدم معدل تدفق قدره 150 milliliters في الساعة. يتم إعطاء حقنة عضلية تحتوي على 75 milligrams من amiodarone في هذا الوقت. قم بإدخال القسطرة الموجهة إلى فتحة الشريان التاجي الأيسر، ثم قم بإجراء تصوير للأوعية الدموية للتحقق من التشريح التاجي.أدخل السلك بعناية في الشريان التاجي الأمامي النازل الأيسر. ثم قم بتمرير البالون فوق السلك وصولاً إلى الشريان التاجي. التقط صورة شعاعية للأوعية للتأكد من موضع البالون.يجب إجراء تصوير وعائي آخر من زاوية مختلفة للتحقق من موضع البالون. ثم يتم نفخ البالون تدريجياً حتى يصل الضغط إلى 3 ATM. ويُجرى تصوير وعائي آخر للتأكد من انسداد الشريان.راقب الخنزير باستخدام كل من قياس الضغط الشرياني وتخطيط كهربائية القلب. قد يصاب الخنزير أحياناً بالرجفان البطيني؛ وفي هذه الحالة، قم بإزالة الرجفان عن الخنزير باستخدام صدمة التيار المباشر في أسرع وقت ممكن.إذا فشلت المحاولة، استمر في ضغط الصدر حتى يتم شحن جهاز إزالة الرجفان الكهربائي وقدم صدمة أخرى. راقب الحالة لمدة 90 minutes ثم قم بتفريغ البالون. بمجرد استقرار ضغط الدم واختفاء عدم انتظام ضربات القلب، قم بإزالة الغمد واستعِد الخنزير.قم بإعطاء حقنة عضلية من nitroglycerin و furosemide، بالإضافة إلى سوائل وريدية ليلية تحتوي على amiodarone. استعد بارتداء غطاء الرأس والقناع والنظارات الواقية والمئزر والقفازات. يتم تحضير الخنزير بنفس الطريقة المتبعة في إحداث احتشاء عضلة القلب.أدخل سلكاً تاجياً واحداً في كل من الشريان التاجي الأيسر النازل والشريان التاجي الأيسر المنعكس. ضع قسطرة عند الفوهة. اسحب 20 milliliters من الدم الشرياني، مع استخدام 10 milliliters لحقن الفيروس والباقي لعملية الغسل.امزج الفيروس مع 10 milliliters من الدم وخففه باستخدام المحلول الملحي حتى يصل الحجم إلى 20 milliliters. بعد ذلك، خفف الكمية المتبقية من الدم بالمحلول الملحي حتى تصل إلى 20 milliliters وقسمها على محقنتين. قم بتوصيل المحقنة التي تحتوي على الدم الممزوج بالفيروس بالقسطرة، واستعد لعملية التسريب.يتم البدء بحقن النيتروجليسرين وريدياً بمعدل 20 micrograms في الدقيقة عبر وريد الأذن، مع إجراء تصوير للأوعية للتحقق من موضع القسطرة. بعد ذلك، يبدأ حقن الفيروس بمعدل 1 milliliter في الدقيقة عند حقن 15 milliliters في الشريان التاجي الأيسر. يتم تغيير المحقنة لعملية الغسل مع استخدام نفس معدل الحقن. وبعد الحقن في الشريان التاجي الأيسر، يتم تنفيذ الإجراء نفسه في الشريان التاجي الأيمن باستخدام الخمسة milliliters المتبقية من الدم المحتوي على الفيروس.بعد شهر واحد من إحداث احتشاء عضلة القلب، ستصاب الخنازير بفشل في القلب مع ضعف في حركة الجدار وتوسع في القلب. يبلغ متوسط الكسر القذفي بعد شهر من احتشاء عضلة القلب في هذا النموذج 36%، وهو أقل بكثير من الخنازير ذات الحجم نفسه التي لم تتعرض لاحتشاء عضلة القلب. ويبلغ متوسط حجم نهاية الانبساط 83 milliliters، بينما يبلغ متوسط مجموعة الضبط 42 milliliters.كان DP DT أيضاً أقل بشكل ملحوظ في الخنازير المصابة باحتشاء عضلة القلب. هذه هي المقاطع العرضية للبطين الأيسر. بعد شهر واحد من احتشاء عضلة القلب، يتم العثور على ندبة كبيرة تمتد من القاعدة إلى القمة في الجدار الداخلي.توضح هذه الصورة تعبير جين gale. فبعد مرور شهر واحد على نقل الجين باستخدام فيروس مرتبط بالأعصاب (dental associated virus)، وُجد تعبير ملحوظ في المنطقة التي حُقنت بالفيروس. لقد عرضنا لكم للتو كيفية إحداث تأثير عضلة القلب في الخنزير بالإضافة إلى حقن فيروس كورونا.يعد هذا المزيج من نموذج فشل IS وتوصيل الجينات طريقة بسيطة وقابلة للتكرار لاختبار أنواع مختلفة من العلاجات الجينية في أمراض المسار. شكراً لمشاهدتكم، ونتمنى لكم التوفيق في تجاربكم المستقبلية.

gene-transfer-for-ischemic-heart-failure-in-a-preclinical-model

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

رواية الاستراتيجيات العلاجية في الطب التجديدي القلب تتطلب دراسات شاملة ومفصلة في نماذج حيوانية السريرية كبيرة قبل أن يمكن النظر لاستخدامها في البشر. هنا، نبدي تقنية حقن إينتراميوكارديال توجيه ضربات القلب تباين عن طريق الجلد في الأرانب، الذي قيمة بالنسبة لفرضية اختبار فعالية هذه العلاجات الجديدة.

حقن إينتراميوكارديال توجيه ضربات القلب التباين عن طريق الجلد وتسليم خلية في نموذج الإكلينيكية كبير

نقدم هنا بروتوكولا للتلاعب بالجينات الخاصة بالقلب في الفئران. تحت التخدير، تم تجسيدها في قلوب الماوس عبر الفضاء ربية الرابعة. وفي وقت لاحق، غدية تم حقن جينات محددة الترميز مع حقنه في عضلة القلب، تليها قياس التعبير البروتين عن طريق التصوير في فيفو والغربية لطخة تحليل.

طريقة بسيطة وفعالة في فيفو التلاعب بالجينات الخاصة بالقلب بالحقن إينتراميوكارديال في الفئران

نقدم هنا بروتوكولا لاستحثاث كريوينجوري البطين الأيسر متبوعاً بغرس تصحيحًا عضلة القلب، المستمدة من خلايا iPS البشرية كارديوميوسيتيس في نموذج خنزير غينيا.

غرس المستمدة من هيبسك بقع عضلة القلب بعد "إصابة احتشاء عضلة القلب" في "نموذج خنزير غينيا"

هنا، نقوم بوصف نموذج ما قبل السريرية كبيرة الحيوان (porcine) من زرع القلب تقويم العظام التي تم تأسيسها بحزم واستخدامها للتحقيق في استراتيجيات جديدة لكارديوبروتيك.

نموذج بورسين ما قبل السريرية لزراعة القلب التقويمي

وسعينا إلى إنشاء نموذج خنازير من فشل القلب الناجم عن انسداد الشريان المحيط الأيسر والسرعة السريعة لاختبار تأثير وسلامة الإدارة داخل القلب للخلايا الجذعية للعلاجات القائمة على الخلايا.

إنشاء نموذج الخنازير من فشل القلب احتشاء ما بعد عضلة القلب لعلاج الخلايا الجذعية

يقدم هذا البروتوكول طريقة بسيطة ومتماسكة لتشفير جين من الاهتمام بشكل عابر باستخدام modRNA بعد احتشاء عضلة القلب في الفئران.

تسليم مرنا معدلة في نموذج الماوس احتشاء مايدق

نقدم نموذجًا لأمراض القلب الإقفارية باستخدام خلايا القلب المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان، إلى جانب طريقة للتقييم الكمي لتلف الأنسجة الناجم عن نقص التروية. يمكن أن يوفر هذا النموذج منصة مفيدة لفحص المخدرات والمزيد من البحوث حول أمراض القلب الإقفارية.

نموذج من مرض القلب الإقفاري والمقارنة المستندة إلى الفيديو من انكماش القلبية من خلال استخدام هابسك المشتقة من القلب

يهدف هذا البروتوكول إلى زرع رقعة مطبوعة بيولوجية ثلاثية الأبعاد على epicardium من الفئران المهجوعة التي تقوم بالنمذجة لفشل القلب. وهو يتضمن تفاصيل تتعلق التخدير, فتح الصدر الجراحية, الربط الدائم من اليسار المنحدرة (LAD) الشريان التاجي وتطبيق التصحيح مطبوعة بيولوجيا على المنطقة الزراعية من القلب.

زرع رقعة مطبوعة بيولوجية ثلاثية الأبعاد في نموذج مورين من احتشاء عضلة القلب

يحمل العلاج الجيني لعضلة القلب لمرض القلب الإقفاري وعدا كبيرا للعلاجات المستقبلية. هنا ، نقدم نموذجا حيوانيا كبيرا لتقييم فعالية العلاج الجيني في القلب الإقفاري.

نموذج حيواني كبير لتقييم فعالية العلاج الجيني في القلب الإقفاري

نحن نقدم بروتوكولا لاستخدام نظام التروية المعيارية خارج الجسم الحي لتوصيل العلاجات إلى مجموعة كاملة من القلب في نموذج زرع قلب غير متجانس للخنزير.

بروتوكول زرع قلب غير متجانس من لحم الخنزير لتوصيل العلاجات إلى ألوغرافت القلب

يصف هذا البروتوكول طرق التعبير الجيني المحوري في قلوب الفئران والفئران عن طريق الحقن المباشر للفيروس داخل عضلة القلب تحت توجيه تخطيط صدى القلب. يتم شرح طرق تقييم قابلية القلوب لعدم انتظام ضربات القلب البطيني عن طريق التحفيز الكهربائي المبرمج للقلوب المعزولة التي تحتوي على لانجيندورف هنا.

التعبير الجيني المحورة الفيروسية في قلوب القوارض وتقييم مخاطر عدم انتظام ضربات القلب

اكتشف طريقة نقل الجينات لعلاج قصور القلب الدماغي باستخدام نموذج الخنزير. تُتيح هذه التقنية تقييم فعالية العلاج الجيني باستخدام المتجهات الفيروسية بشكل موثوق وقابل للتكرار.

نقل الجينات لقصور القلب الدماغية في نموذج ما قبل السريرية

استكشف المزيد من الفيديوهات