الجسيمات أسلوب التلصيق لتحديد فيروس شلل الأطفال

الهدف العام من الإجراء التالي هو التعرف بسرعة على فيروس شلل الأطفال المعزول باستخدام بروتوكول بسيط. في هذا الفحص ، نستخدم جزيئات الجيلاتين الحساسة المغلفة بجزيئات خيميرية تحتوي على المجال خارج الخلية لمستقبل فيروس شلل الأطفال البشري المتصل ب IgG two fc. نظرا لأن هذه الجسيمات لها تقارب موحد لجميع الأنماط المصلية لعزلات فيروس شلل الأطفال ، فإن تراص الجسيمات يحدث عند حضانة العينات التي تحتوي على أي فيروس شلل أطفال بشري.

ومع ذلك ، إذا كانت الأجسام المضادة القادرة على التعرف على العزل الفيروسي المحدد للعينة موجودة ، يحدث التحييد ويمنع التراص باستخدام هذا النظام التجريبي ، يمكن إجراء التعرف السريع على عزلات فيروس شلل الأطفال في تفاعل خطوة واحدة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية للسفينة الحالية ، مثل اختبار التحييد التقليدي هي بساطة SIM للإجراء والتفسير ، بهدف تقليل العمل وتسريع العمل المطلوب وتقصير الوقت للحصول على النتائج. لإعادة تكوين الأجسام المضادة المضادة للكهروضوئية ، والأجسام الكهروضوئية الثلاثة ، أضف 0.5 مل من الماء إلى كل قارورة.

ثم انقل كل محلول للأجسام المضادة إلى أنابيب منفصلة تحتوي على 4.5 مل من وسائط الصيانة. يتم توفير بعض الأجسام المضادة المضادة للكهروضوئية في شكل معاد تكوينه لمثل هذه الأجسام المضادة المضادة للكهروضوئية. إضافة الماء لإعادة التكوين ليست ضرورية.

بعد ذلك ، قم بإعداد مزيج فردي من محلول الأجسام المضادة المركب بحجم نهائي يبلغ 3.6 مل في أنابيب جديدة ذات علامات تجارية. على سبيل المثال ، امزج 1.8 مل من المضاد للكهروضوئية مع 1.8 مل من المضاد للكهروضوئية اثنين. لتحضير مجموعة مضادة للكهروضوئية واحدة بالإضافة إلى تركيبتين ، كرر ذلك لكل تركيبة زوجية ممكنة وقم أيضا بإعداد محلول يحتوي على جميع الأنواع الثلاثة من الأجسام المضادة عن طريق خلط 1.2 مل من كل مضاد للمصل.

بمجرد إجراء الخلطات الأربعة عند 720 ميكرولتر من FCS لكل محلول أجسام مضادة. سيساعد ذلك في تقليل التراص غير المحدد لجزيئات الجيلاتين بواسطة الأجسام المضادة أثناء الفحص. يمكن تخزين تجمعات الأجسام المضادة عند 20 درجة مئوية تحت الصفر حتى يتم استخدامها في مقايسة التراص.

في هذا الاختبار ، نستخدم جزيئات الجيلاتين المجففة بالتجميد التي تم تغطيتها بالمجالات خارج الخلية لمستقبلات فيروس شلل الأطفال البشري و IgG اثنين من مجالي FC للفأر. تأكد من استخدام كمية واحدة من الجسيمات وليس المجموعات المختلفة في تجربة واحدة لضمان اتساق صورة التراص لإعادة تكوين الجسيمات عند 1.5 مل من المخزن المؤقت لإعادة التكوين لكل قارورة. اضغط برفق للخلط جيدا.

يمكن تخزين الجسيمات المعاد تكوينها عند أربع درجات مئوية لمدة تصل إلى أسبوعين. أولا ، صمم تجربتك في لوحة ميكروتيتر 96 بئر. لكل عينة ، سيحتوي البئر رقم واحد على فيروس وحده.

ستحتوي الآبار من الثانية إلى الخامسة على الفيروس بالإضافة إلى واحد من محاليل الأجسام المضادة المختلطة الأربعة. تأكد من حفظ بئر واحد للتحكم السلبي الذي يحتوي على وسائط فقط بدون فيروس أو جسم مضاد. بمجرد إعداد اللوحة ، أضف 12 ميكرولترا من محلول الجسم المضاد الصحيح إلى كل بئر من الصفوف من اثنين إلى خمسة و 12 ميكرولترا من النمو.

متوسطة إلى الفيروس وحدها, آبار في الصف واحد, وإلى السيطرة سلبية جيدا في الصف السادسة. بعد ذلك ، أضف 12 ميكرولترا من عينة الفيروس في الصفوف الخمسة الأولى و 12 ميكرولترا من وسائط النمو إلى بئر التحكم السلبي في الصف السادس. بمجرد طلاء الأجسام المضادة والفيروسات ، قم بتعليق جزيئات الجيلاتين المعاد تكوينها عن طريق النقر عليها برفق وإضافة 25 ميكرولترا من الجسيمات لكل بئر على الفور إلى جميع الآبار.

المهم عدم ترك الجسيمات تستقر قبل نقلها إلى اللوحة من أجل الحصول على كميات متساوية من الجسيمات في كل منها. ضع لوحة الفحص جيدا على خلاط الألواح واخلطها لمدة 30 ثانية. ثم ضع الطبق على ورقة بيضاء واحتضن الطبق في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين للسماح بحدوث التراص.

المهم عدم تحريك اللوحة في أي وقت أثناء أو بعد الحضانة لأن التراص المتكون غير مستقر. بمجرد حدوث التفاعل ، التقط عدة صور للوحة حيث يمكن تقدير جودة التراص في كل بئر. في الآبار التي لم يحدث فيها التراص ، كما هو موضح هنا على اليسار ، ستترسب جزيئات الجيلاتين الملونة في قاع البئر في الآبار التي حدث فيها التراص.

نظرا للتفاعل بين الفيروس و pvr ، IgG اثنين من جزيئات الجيلاتين المطلية ب A ، يظهر نمط ملون منتشر كما هو موضح في المركز. في هذه التجربة ، اختبرنا قدرة المحاليل الفيروسية ، PV واحد ، واثنين ، وثلاثة على إحداث جلوس في وجود الجسم المضاد. التركيبات المشار إليها كما هو موضح هنا في حالة عدم وجود فيروس أو أجسام مضادة ، لا يحدث تراص وتترسب جزيئات الجيلاتين على النقيض من الفيروس الذي يحتوي بشكل جيد ، ولكن لا توجد أجسام مضادة.

حدث التراص بسبب تفاعل الفيروس. مع جزيئات الجيلاتين المغطاة PVR IgG اثنين من A في الآبار التجريبية ، يتم منع وفرة الفيروسات في أي بئر يحتوي على أجسام مضادة تحيد هذا الفيروس على وجه التحديد. على سبيل المثال ، يتم منع وفرة أمة فيروس شلل الأطفال من النوع الأول في الآبار التي تحتوي على أجسام مضادة مضادة للكهروضوئية واحدة ، ولكن ليس في الآبار التي تحتوي فقط على الأجسام المضادة المضادة للكهروضوئية الثانية والمضادة للكهروضوئية الثلاثة.

وينطبق الشيء نفسه على النوعين الثاني والثالث. أثناء الإتقان ، يمكن القيام بهذه التقنية في أقل من ثلاث ساعات إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.