تحضير العضيات من الأورام: نموذج ورم ثلاثي الأبعاد في المختبر

افرم أنسجة الورم إلى قطع صغيرة. انقل القطع إلى أنبوب مع عازلة الهضم. تتحلل ألياف الكولاجين المحيطة بالخلايا ، مما يؤدي إلى تدهور مصفوفة الأنسجة. ثم قم بتكسير القطع المهضومة وتخلص من معظم المخزن المؤقت للهضم. انقر فوق الأنبوب لتفتيت الحبيبات.

يتكون المحلول الآن من كتل خلايا مختلفة الحجم. أعد تعليق كتل الخلايا في محلول من التربسين ومثبط ROCK. يستمر التربسين في تكسير الورم ويمنع المثبط موت الخلايا. على فترات منتظمة ، قم بتقطيع المحلول لتفتيت الكتل وتفريق الخلايا. ثم ، أعلقت الخلايا في محلول مصفوفة بالتركيز المناسب.

ضع قطرات من المحلول في لوحة ثقافة لتشكيل قباب مصفوفة. ضع الألواح رأسا على عقب في حاضنة واترك المصفوفة تتصلب تماما. ثم أضف وسائط زراعة الخلايا واحتضانها ، الجانب الأيمن لأعلى. توفر المصفوفة سقالة لدعم النمو ثلاثي الأبعاد للعضوية.

بعد الفرم ، ضع قطع الورم في أنبوب سعة 15 مليلتر من محلول الهضم لمدة 1.5 إلى ساعتين من الهضم عند 37 درجة مئوية. في نهاية عملية الهضم ، قم بترسيب الأنسجة المهضومة عن طريق الطرد المركزي وتخلص من المادة الطافية.

انقر

فوق الأنبوب لفك حبيبات الخلية. أعد تعليق الخلايا في 1 مليلتر من التربسين الدافئ مسبقا مع 10 ميكرومولار Y-27632 ROCK مثبط لمدة 5 دقائق عند 37 درجة مئوية.

في نهاية الحضانة ، قم بترتيتر ملاط الأنسجة خمس مرات باستخدام طرف الماصة P1000 القياسي. أعد الأنبوب إلى الحمام المائي للحصول على حضانة إضافية لمدة 5 دقائق وتجربة.

لطلاء قبة المصفوفة ، اغسل الخلايا المهضومة في 9 ملليلتر من الوسط البارد ، ثم اجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي. أعد تعليق الخلايا في 1 ملليلتر من الوسط الطازج للعد ، وبعد العد ، اجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي مرة أخرى. تمييع الخلايا السرطانية بالحجم المناسب من المصفوفة.

قم بإسقاط 200 ميكرولتر من محلول خلية المصفوفة بعناية في كل بئر من صفيحة 6 آبار دافئة بدرجة حرارة 55 درجة مئوية. اسمح للقباب بالتصلب في درجة حرارة الغرفة لمدة دقيقتين قبل وضع اللوحة رأسا على عقب في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.

عندما تصلب القباب بالكامل ، أضف 2 مل من الوسط العضوي للبروستاتا المكمل بالأندروجين R1881 ومثبط ROCK إلى كل بئر. أعد اللوحة إلى حاضنة زراعة الخلايا.