تحضير العضيات من الأورام: نموذج ورم ثلاثي الأبعاد في المختبر

افرم أنسجة الورم إلى قطع صغيرة. انقل القطع إلى أنبوب مع عازلة الهضم. تتحلل ألياف الكولاجين المحيطة بالخلايا ، مما يؤدي إلى تدهور مصفوفة الأنسجة. ثم قم بتكسير القطع المهضومة وتخلص من معظم المخزن المؤقت للهضم. انقر فوق الأنبوب لتفتيت الحبيبات.

يتكون المحلول الآن من كتل خلايا مختلفة الحجم. أعد تعليق كتل الخلايا في محلول من التربسين ومثبط ROCK. يستمر التربسين في تكسير الورم ويمنع المثبط موت الخلايا. على فترات منتظمة ، قم بتقطيع المحلول لتفتيت الكتل وتفريق الخلايا. ثم ، أعلقت الخلايا في محلول مصفوفة بالتركيز المناسب.

ضع قطرات من المحلول في لوحة ثقافة لتشكيل قباب مصفوفة. ضع الألواح رأسا على عقب في حاضنة واترك المصفوفة تتصلب تماما. ثم أضف وسائط زراعة الخلايا واحتضانها ، الجانب الأيمن لأعلى. توفر المصفوفة سقالة لدعم النمو ثلاثي الأبعاد للعضوية.

بعد الفرم ، ضع قطع الورم في أنبوب سعة 15 مليلتر من محلول الهضم لمدة 1.5 إلى ساعتين من الهضم عند 37 درجة مئوية. في نهاية عملية الهضم ، قم بترسيب الأنسجة المهضومة عن طريق الطرد المركزي وتخلص من المادة الطافية.

فوق الأنبوب لفك حبيبات الخلية. أعد تعليق الخلايا في 1 مليلتر من التربسين الدافئ مسبقا مع 10 ميكرومولار Y-27632 ROCK مثبط لمدة 5 دقائق عند 37 درجة مئوية.

في نهاية الحضانة ، قم بترتيتر ملاط الأنسجة خمس مرات باستخدام طرف الماصة P1000 القياسي. أعد الأنبوب إلى الحمام المائي للحصول على حضانة إضافية لمدة 5 دقائق وتجربة.

لطلاء قبة المصفوفة ، اغسل الخلايا المهضومة في 9 ملليلتر من الوسط البارد ، ثم اجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي. أعد تعليق الخلايا في 1 ملليلتر من الوسط الطازج للعد ، وبعد العد ، اجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي مرة أخرى. تمييع الخلايا السرطانية بالحجم المناسب من المصفوفة.

قم بإسقاط 200 ميكرولتر من محلول خلية المصفوفة بعناية في كل بئر من صفيحة 6 آبار دافئة بدرجة حرارة 55 درجة مئوية. اسمح للقباب بالتصلب في درجة حرارة الغرفة لمدة دقيقتين قبل وضع اللوحة رأسا على عقب في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.

عندما تصلب القباب بالكامل ، أضف 2 مل من الوسط العضوي للبروستاتا المكمل بالأندروجين R1881 ومثبط ROCK إلى كل بئر. أعد اللوحة إلى حاضنة زراعة الخلايا.

• In vitro tumor models - Methods for studying tumor behavior in lab-controlled conditions.
• PeproTech Noggin - A protein used to regulate cellular processes in tissue culture.
• Tumor model - A method or process used to replicate tumor environment and behavior for scientific studies.
• Cell pellet - Cluster of cells collected at the bottom of a tube after centrifugation.
• ROCK inhibitor organoids - Compounds that prevent cell apoptosis during organoid creation.
• Noggin conditioned media - Media enriched with Noggin protein, used in cellular culture and experiments.
• Cell pellet in tube - Term refers to cells that have been concentrated by centrifugation in a sample tube.

• Introduce In vitro tumor models by defining this as a replicate of tumor behavior (e.g., in vitro tumor models).
• Key Concepts by summarizing principles involved in cell pellet creation (e.g., cell pellet).
• Underlying Mechanisms through visualizing the process of using ROCK inhibitor in organoid creation.
• Connect the process of tumor tissue mincing to the creation of a cell pellet and suspension in a matrix solution.

• What are in vitro tumor models and how to create a cell pellet in lab conditions?
• What role does the PeproTech Noggin play in the tumor model creation?
• How does the ROCK inhibitor assist in the creation of organoids?

• Practical Applications - Tumor models help study cancer growth and potential cures (e.g., in vitro tumor models).
• Industry Impact - Lab studies benefit the healthcare industry and the field of oncology (e.g., ROCK inhibitor organoids).
• Societal Importance - The research contributes to advancements in cancer treatment options (e.g., Noggin conditioned media).
• Link to Scientific Advancements - Understanding tumor behavior facilitates innovative treatment approaches.